一种MicroRNA捕获磁珠、制备方法及MicroRNA的检测方法技术

本发明专利技术提供一种MicroRNA捕获磁珠、制备方法及MicroRNA的检测方法，属于生物技术领域。该方法将链霉亲和素生物磁珠和生物素修饰的与待测hsa

【技术实现步骤摘要】
一种MicroRNA捕获磁珠、制备方法及MicroRNA的检测方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种MicroRNA捕获磁珠、制备方法及MicroRNA的检测方法。

技术介绍

[0002]MicroRNA(miRNA)是一类短链非编码核糖核酸(RNA)分子，长度为19～25个核苷酸。miRNA参与人体内多种生物过程，如细胞增殖、分化、代谢、胚胎发生、炎症、衰老和程序性细胞死亡等。由于miRNAs具有序列短，含量低，各成员之间的序列相似度高等特点，使其检测和分析具有一定的难度。现有的miRNA检测技术主要包括Northern印迹，微阵列法，逆转录聚合酶链反应(RT
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PCR)，等温指数扩增(EXPAR)，滚环扩增(RCA)，环介导的等温扩增(LAMP)，酶辅助miRNA定量检测法等。但这些方法大多数都存在探针/引物/模板序列设计复杂，检测步骤繁琐检测时程长，需要特殊的酶或引物，费用昂贵等问题，很难大规模推广使用。近年来，核酸探针作为基因探针的一种，具有很强的亲和力和选择性，被广泛应用于生化分析中。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MicroRNA捕获磁珠的制备方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将链霉亲和素生物磁珠和生物素修饰的与待测hsa
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miRNA
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5p完全互补的ssDNA探针混合，得到MicroRNA捕获磁珠；步骤二：将荧光基团FAM修饰的与ssDNA探针部分互补的荧光DNA和MicroRNA捕获磁珠混合杂交，制备得到荧光MicroRNA捕获磁珠，并在ssDNA探针末端形成一段暴露的Toehold区域；步骤三：将含有hsa
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miRNA
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5p的待测液与荧光MicroRNA捕获磁珠混合，进行链置换反应，得到置换后的MicroRNA捕获磁珠。2.根据权利要求1所述的一种MicroRNA捕获磁珠的制备方法，其特征在于，所述的步骤一中生物素修饰的与待测hsa
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miRNA
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5p完全互补的ssDNA探针的浓度为1nM。3.根据权利要求1所述的一种MicroRNA捕获磁珠的制备方法，其特征在于，所述的步骤一中的ssDNA探针为5
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端生物素修饰的ssDNA探针。4.根据权利要求1所述的一种MicroRNA捕获磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的杂交是在设定温度为30℃，140转/分钟的摇床上进行反应，反应时间为1个小时。5.根据权利要求1所述的一种MicroRNA捕获磁珠的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宪瑛，吴越，魏佳，周晶晶，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：