一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法，采用高效液相色谱对瑞加诺生注射液有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为Welch Ultimate Polar

【技术实现步骤摘要】
一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]瑞加诺生注射液商品名为Lexiscan，是AstellasPharma(安斯泰来)公司开发的新型A
2A
腺苷受体激动剂，于2008年4月10日获得FDA批准，目前已在美国、英国、德国等国家上市销售。瑞加诺生注射液是一种选择性腺苷受体激动剂，可使冠状动脉产生舒张。这款药物用于不能接受运动压力测试患者的放射性核素心肌灌注显像。
[0003]瑞加诺生注射液的杂质，来源于原料引入杂质、工艺杂质和降解杂质。目前，瑞加诺生均未在中国、美国、欧洲等药典中收录，无有关物质检测分析方法，且对于瑞加诺生有关物质研究的亦比较少。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对瑞加诺生注射液有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：
[0007]色谱柱为Welch Ultimate Polar
‑
RP，该色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为3μm。
[0008]柱温为40～50℃；流速为0.5mL/min～1.0mL/min；检测波长为210nm～220nm；进样体积为20μl～80μl；
[0009]以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中，流动相A为9mmol/L～12mmol/L磷酸二氢钾水溶液，以磷酸调节其pH值至2.4～2.6；流动相B为乙腈；具体梯度洗脱过程如下：(1)在0
‑
3分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至94:96；(2)在3
‑
10分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持96:4不变；(3)在10
‑
23分钟内，流动相A和流动相B的体积比由96:4匀速渐变至85:15；(4)在23
‑
40分钟内，流动相A和流动相B的体积比由85:15匀速渐变至78:22；(5)在40
‑
50分钟内，流动相A和流动相B的体积比由78:22匀速渐变至20:80；(6)在50
‑
51分钟内，流动相A和流动相B的体积比由20:80匀速渐变至95:5；(7)在51
‑
60分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持95:5不变。
[0010]在一种优选方案中，柱温为45℃。
[0011]进一步地，流速为0.7mL/min。
[0012]进一步地，检测波长为215nm。
[0013]本专利技术提供的瑞加诺生注射液有关物质的检测方法，不仅可以检测出杂质A，也可以检测出新的杂质IMP1，其中杂质A为瑞加诺生在制备过程中的副产物，而杂质IMP1为降解
产物，可以将瑞加诺生注射液进行破坏(例如，高温、酸或碱破坏)后得到。对于新的杂质IMP1，通过质谱分析，可以得出，其ESI
+
为259.10，ESI
‑
为257.10。至于，杂质A的化学结构如下所示：
[0014][0015]本专利技术提供的瑞加诺生注射液有关物质的检测方法，采用反相色谱柱及紫外检测器，其中，色谱柱为Welch Ultimate Polar
‑
RP(250mm
×
4.6mm,3μm)，在检测过程中，对色谱柱的要求很高，在实验过程中发现，即使采用类似的C18色谱柱，例如，色谱柱Restek Ultra AQ C18(250mm
×
4.6mm,3μm)，在色谱柱的长度、直径和填料粒径相同的情况下，主峰前的色谱峰峰形及分离情况均不佳。即使采用相同的色谱柱，而色谱柱的填料粒径不同，即使在相同的梯度洗脱过程中进行检测，杂质A与相邻峰之间的分离度也不佳。例如，当填料粒径为5μm时，即使主峰与主峰附近杂质的分离效果得到改善，但主峰前面的某些杂质无法区分，杂质的个数检索，且杂质A与相邻峰之间无法分离。
[0016]对于本专利技术而言，以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中，流动相A为9mmol/L～12mmol/L磷酸二氢钾水溶液，以磷酸调节其pH值至2.4～2.6，流动相B为乙腈。在检测过程中，由于杂质难以区分，对于流动相A中磷酸二氢钾水溶液的pH值亦是有很高的要求。当磷酸二氢钾水溶液中其pH值高于2.6或者低于2.4时，主峰与有关杂质的分离度欠佳。例如，pH值为2.9时，杂质的出峰时间延迟，但是主峰上明显有杂质未与主峰分离，分离度不佳。在一种优选方案中，流动相A为10mmol/L磷酸二氢钾水溶液，以磷酸调节其pH值至2.5。
[0017]在本专利技术提供的检测方法中，包括以下优选的色谱条件：色谱柱为Welch Ultimate Polar
‑
RP(250mm
×
4.6mm,3μm)，柱温为45℃；流速为0.7mL/min；检测波长为215nm～220nm；进样体积为50μl。以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，流动相A为10mmol/L磷酸二氢钾水溶液，以磷酸调节其pH值至2.5，流动相B为乙腈，具体的洗脱过程如下：
[0018][0019]在一种优选方案中，在检测的过程中，具体还包括如下步骤：
[0020](1)溶液的配制：
[0021](a)分别称取瑞加诺生对照品和瑞加诺生杂质A对照品，加入甲醇待完全溶解后，再加入纯化水制成每1ml中含瑞加诺生80μg和瑞加诺生杂质A1.6μg的溶液，作为系统适用性溶液；其中，杂质A的化学结构如下所示：
[0022][0023](b)瑞加诺生注射液，作为供试品溶液；其中，瑞加诺生注射液的浓度为0.05mg/mL～0.1mg/mL，优选为0.08mg/mL。
[0024](c)移取0.5mL瑞加诺生注射液至100mL容量瓶中，加入体积比为50％甲醇水溶液定容，摇匀，作为对照品溶液；
[0025](d)移取1.0mL对照品溶液至10mL容量瓶中，加入体积比为50％甲醇水溶液定容，摇匀，作为灵敏度溶液；
[0026](2)先移取灵敏度溶液50μl，按照所述色谱条件进行分析，当瑞加诺生的信噪比大于或等于10时，符合要求；继续移取系统适用性溶液50μl，在相同的色谱条件下进行分析，当主峰的理论塔板数大于20000，以及主峰与杂质A之间的分离度大于或等于2.0时，符合要求；再移取对照溶液和供试品溶液各50μl，在相同的色谱条件下进行检测，然后，根据自身对照法，计算瑞加诺生注射液中各杂质的含量。
[0027]采用本专利技术的检测方法可有效地控制瑞加诺生注射液中的有关物质，各杂质之间及主峰与相邻杂质之间的分离度均大于1.5，主峰及各杂质峰纯度角均小于纯度阈值。
[0028]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种瑞加诺生注射液有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱对瑞加诺生注射液有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为Welch Ultimate Polar
‑
RP，该色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为3μm；柱温为40～50℃；流速为0.5mL/min～1.0mL/min；检测波长为210nm～220nm；进样体积为20μl～80μl；以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为9mmol/L～12mmol/L磷酸二氢钾水溶液，以磷酸调节其pH值至2.4～2.6；所述流动相B为乙腈；具体梯度洗脱过程如下：(1)在0
‑
3分钟内，流动相A和流动相B的体积比由95:5匀速渐变至94:96；(2)在3
‑
10分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持96:4不变；(3)在10
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23分钟内，流动相A和流动相B的体积比由96:4匀速渐变至85:15；(4)在23
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40分钟内，流动相A和流动相B的体积比由85:15匀速渐变至78:22；(5)在40
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50分钟内，流动相A和流动相B的体积比由78:22匀速渐变至20:80；(6)在50
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51分钟内，流动相A和流动相B的体积比由20:80匀速渐变至95:5；(7)在51
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60分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持95:5不变。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)溶液的配制：(a)分别称取瑞加诺生对照品和瑞加诺生杂质A对照品，加入甲醇待完全溶解后，再加入纯化水制成每1ml中含瑞加诺生80μg和瑞加诺生杂...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐咏群，黄锡伟，王芳，胡铮，田欣欣，
申请(专利权)人：南京健友生化制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：