脂代谢紊乱动物模型构建以及利用AAV-CRISPR/CAS9的修复制造技术

本发明专利技术涉及脂代谢紊乱动物模型构建以及利用AAV

【技术实现步骤摘要】
脂代谢紊乱动物模型构建以及利用AAV-CRISPR/CAS9的修复


[0001]本专利技术属于生物医药领域，更具体地，本专利技术涉及脂代谢紊乱动物模型构建以及利用AAV-CRISPR/CAS9的修复。

技术介绍

[0002]心血管疾病是全世界危害最大的疾病之一，是导致人类疾病死亡的首要原因，尤其是动脉粥样硬化引起的心肌梗死和脑卒中已成为中国人最主要的死亡原因。家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia，FH)是一种有家族性特征的常染色体显性遗传疾病，发生率约为1/200-1/500，患者主要临床表现为血浆中低密度脂蛋白胆固醇数值(LDL-C)异常超高，使得胆固醇沉积在皮肤、肌腱和冠状动脉等位置，而引起黄斑瘤、黄色瘤和动脉粥样硬化，给患者带来生命威胁。家族性高胆固醇血症通常由LDLR、APOB和PCSK9三个基因中的一个发生致病变异引起的，其中最主要由LDLR基因突变所致。该疾病包含两种临床亚型，纯合型家族性高胆固醇血症患者在10岁左右甚至更小就出现冠心病的症状和体征，多在30岁前死于心血管疾病，而杂合型家族性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的方法，包括：针对啮齿类动物基因组中编码低密度脂蛋白受体第208位的密码子，利用CRISPR/Cas系统引入终止子；所述CRISPR/Cas系统包括：sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；和含有突变位点的外源模板链序列。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有突变位点的外源模板链序列将低密度脂蛋白受体第208位突变为终止子，其具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在啮齿类动物生长后，进行高脂饮食诱导，获得脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型。4.一种用于制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的试剂盒，其中包括：CRISPR/Cas系统，包括sgRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；和含有突变位点的外源模板链序列。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的含有突变位点的外源模板链具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：高脂饮食，所述高脂饮食为食物中含有高于20％的脂肪和高于0.2％的胆固醇。7.权利要求1～3任一所述的方法或权利要求4～6任一所述的试剂盒在制备脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型中的应用。8.利用权利要求1～3任一所述的方法或权利要求4～6任一所述的试剂盒获得的脂代谢紊乱疾病的啮齿类动物模型的应用，用于：作为筛选缓解或治疗脂代谢紊乱疾病的候选药物或治疗剂的动物模型；或用于作为研究脂代谢紊乱疾病的动物模型；或用于作为研究脂代谢紊乱疾病的药物的动物模型。9.一种靶向性修复低密度脂蛋白受体的方法，包括：以腺相关病毒递送Cas酶编码基因以及针对低密度脂蛋白受体基因的sgRNA至细胞内，从而靶向性修复低密度脂蛋白受体；所述腺相关病毒携带一供体序列，该供体序列来自低密度脂蛋白受体基因且包含编码野生型低密度脂蛋白受体第208位的密码子。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，Cas酶的表达盒被置于腺相关病毒载体1中，sgRNA和供体序列片段的表达盒被置于腺相关病毒载体2中，分别包装为腺相关病毒1和腺相关病毒2；其中，所述Cas酶的表达盒中，包含TBG启动子，核定位信号序列，Cas酶编码核酸序列，末端反向重复序列；...

【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，赵欢，
申请(专利权)人：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：