一株促生高地芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株促生高地芽孢杆菌及其应用，所述菌为高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB

【技术实现步骤摘要】
一株促生高地芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一株促生高地芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]红树植物是生长在热带、亚热带海湾、河口和海岸受周期性海水浸淹的潮间带的一种特殊植被群落，是链接陆地生态系统和海洋生态系统的重要“生态屏障”。因其生境非常特殊，同时又具有海洋和陆地生态系统的特点，使得红树林内生菌具有独特的代谢途径和遗传背景，其种类和产物类型丰富多样。红树林特殊的生境决定了其丰富的微生物资源，蕴藏着不同于其他环境微生物来源的遗传资源。
[0003]植物是高度多样化、动态化的微生物的宿主，这些微生物对宿主有着重要的功能。植物相关的微生物可以保护宿主免受病原体和害虫侵袭，有助于植物利用营养，并提高植物抗逆性。植物内生细菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部, 并与植物建立了和谐联合关系的细菌。植物内生细菌因其生态学优势，能在植物体内长期定殖、传导，且不易受环境条件的影响，对植物生长发育、抵抗疾病以及不良环境具有广泛的生物学作用，是非常难得的天然生物资源，在农业生产中具有良好的研究和开发潜力。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一株促生高地芽孢杆菌及其应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株促生高地芽孢杆菌，其分类命名为高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB
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C01，已于2020年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.20898，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]所述促生高地芽孢杆菌的菌落特征及菌体形态为：将高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB
‑
C01在NA平板上培养24h后形成菌落颜色为乳白色，无光泽，呈圆形、无流动性，革兰氏染色阳性，有芽孢，无荚膜；菌落直径2
‑
3mm。
[0007]所述促生高地芽孢杆菌的生理生化特征：高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB
‑
C01 接触酶反应呈阴性，V．P测定呈阳性，MR测定呈阳性，葡萄糖产酸试验阴性，葡萄糖产气试验阴性，柠檬酸盐试验阴性，硝酸盐还原呈阳性，淀粉水解呈阴性，吲哚实验呈阴性，丙二酸测定呈阴性，产H2S试验试验阳性。
[0008]将所述促生高地芽孢杆菌的16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，结果表明: ZLB
‑
C01与Bacillus altitudinis同处于一个分支上，其16S rDNA序列与Bacillus altitudinis（MW474842.1）的相似度达99.86%。结合菌落形态，生理生化特征和16S rDNA序列分析，鉴定为高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）。
[0009]本专利技术的优点在于：所述植物内生高地芽孢杆菌具有解磷解钾固氮的作用，可以在植物体内定殖，提高生物酶活性，对调节植物生长和发育具有重要的作用。
[0010]本专利技术所述促生高地芽孢杆菌制成菌剂通过灌根接种到植物幼苗，可以明显提高植物叶片叶绿素含量，提高过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)，与对照相比，差异显著。因此，本专利技术为将来开发植物专用的微生物菌剂菌肥提供了良好的菌株资源。
附图说明
[0011]图1ZLB
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C01处理后油菜叶片 SPAD值的变化。
[0012]图2ZLB
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C01处理后油菜叶片 CAT 活性的变化。
[0013]图3ZLB
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C01处理后油菜叶片POD活性的变化。
[0014]图4ZLB
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C01处理后油菜叶片SOD 活性的变化。
[0015]图5ZLB
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C01处理后对油菜生长的影响。
[0016]图6ZLB
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C01处理后上海青叶片 SPAD值的变化。
[0017]图7ZLB
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C01处理后上海青叶片 CAT 活性的变化。
[0018]图8ZLB
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C01处理后上海青叶片POD活性的变化。
[0019]图9ZLB
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C01处理后上海青叶片SOD 活性的变化。
[0020]图10ZLB
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C01处理后对上海青生长的影响。
具体实施方式
[0021]下面结合实例对本专利技术进一步说明。
[0022]一株促生高地芽孢杆菌，其分类命名为高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB
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C01，已于2020年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.20898。
[0023]实施例1 解磷解钾固氮高地芽孢杆菌的筛选（1）筛选过程：通过梯度稀释法，从福建漳州、泉州、宁德红树植物中分离出319株分离物。通过三区划线法对分离到的内生细菌进行纯化，并通过镜检判断菌株是否纯化，对纯化后的细菌进行编号，挑取单菌落，转移到NA斜面上保存备用。通过平板解磷解钾固氮效果测定，初步筛选出32株具有较好解磷解钾固氮效果的内生菌株，最终筛选出一株具有良好解磷解钾固氮效果的内生细菌，标记为ZLB
‑
C01。
[0024]（2）菌落特征及菌落形态：将ZLB
‑
C01在NA平板上培养24h后形成菌落颜色为乳白色，无光泽，呈圆形、无流动性，革兰氏染色阳性，有芽孢，无荚膜；菌落直径4
‑
5mm。
[0025]（3）生理生化特征：ZLB
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C01 接触酶反应呈阴性，V．P测定呈阳性，MR测定呈阳性，葡萄糖产酸试验阴性，葡萄糖产气试验阴性，柠檬酸盐试验阴性，硝酸盐还原呈阳性，淀粉水解呈阴性，吲哚实验呈阴性，丙二酸测定呈阴性，产H2S试验试验阳性。
[0026]（4）解磷解钾固氮能力测定：将分离得到的内生细菌菌株分别接种到事先配制好的有机磷培养基、无机磷培养基、钾细菌培养基以及Ashby无氮培养基平板上，每皿4个接菌点，重复3次。28℃恒温培养 5 d。分别观察并记录菌株生长情况及分解圈大小，根据分解圈大小、透明圈直径／菌落直径（Ｄ/ｄ值）确定内生细菌的解磷解钾固氮活性。分解圈越大、Ｄ/ｄ值越大，表示解磷解钾固氮活性越强。
[0027]其中，有机磷培养基： 葡萄糖 10g，(NH4)
2 SO
4 0.5g，NaCl 0.3g，KCl 0.3g，MnSO
4 0.03g，FeSO
4 0.03g，卵磷脂 0.2 g，CaCO
3 5.0g，酵母膏 0.4 g，琼脂 20g，蒸馏水 1000 mL，pH 7.0
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株促生高地芽孢杆菌，其特征在于：所述菌为高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）ZLB
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C01，已于2020年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.208...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，袁宗胜，林鸿艳，陈垚宇，肖航，曾志浩，陈新强，夏法刚，谢宝贵，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：