本发明专利技术公开了一株兰花菌根真菌PF02，所述兰花菌根真菌PF02命名为Kirschsteiniothelia tectonae PF02，于2020年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO：21051。本发明专利技术首次从野生兰花中分离筛选到一株Kirschsteiniothelia tectonae PF02，该菌能促进兰花的生长，应用于兰花菌根化育苗实践中，可促进兰花种苗的快速繁育，并缩短成苗周期，为珍稀濒危植物的保育提供理论基础，并为促进兜兰产业的规模化发展提供技术支撑。支撑。支撑。
【技术实现步骤摘要】
一株兰花菌根真菌PF02及其应用
[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及的是一株兰花菌根真菌PF02及其应用。
技术介绍
[0002]几乎所有的兰科植物都与菌根真菌有着共生关系，已有的研究表明，菌根真菌对兰科植物具有独特的生态功能，如促进种子萌发和幼苗的形态建成，帮助兰科植物的生态入侵，影响生物群落组成及制备特定功效的生物诱导子，利于生态系统的保护、恢复或重建等方面。究其机理，近年来的研究发现，菌根真菌通过消化菌丝为胚细胞提供必需的营养，刺激植物产生赤霉素、IAA等激素，烟酸和烟酰胺等维生素。此外，菌根真菌可在植物体内合成植保素，进一步激发SOD、POD、CAT和PAL等酶活性，来增强宿主植物的抗性。同时，当菌根真菌定殖成功并成为有益的优势菌群后，释放的拮抗物质将有效增强兰科植物的抗病能力，对于提高幼苗的成活率和促进植株的生长具有重要意义。近年来，兰科菌根真菌成为新的研究热点，特别是在园艺学和植物保护学中的应用和功效引起了一些学者们的高度重视，利用兰科菌根真菌提高一些珍稀种类组培苗的移栽成活率、促进植株生长及保育等方面的研究已有广泛报道，如石斛属(Dendrobium sp.)、金线莲属(Anoectochillus sp.)、兜兰属、兰属(Cymbidium sp.)、五唇兰属(Doriti sp.)等，将菌根化育苗技术引入人工栽培后，显著提高了幼苗移栽成活率、鲜质量增长率、干物质积累及矿质元素吸收，部分菌根真菌的代谢产物可分泌赤霉素，IAA等植物生长调节剂。
技术实现思路
[0003]本专利技术目的在于提供一株兰花菌根真菌PF02及其应用，该菌是一种能够促进兰花植物生长的菌株。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：
[0005]一株兰花菌根真菌PF02，分类命名为Kirschsteiniothelia tectonaePF02，于2020年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO：21051。
[0006]如上所述兰花菌根真菌PF02在促进兰花生长中的应用。
[0007]优选地，将所述兰花菌根真菌PF02制成液体菌剂或真菌诱导子后促进兰花生长。
[0008]优选地，将所述兰花菌根真菌PF02制成液体菌剂的方法：将兰花菌根真菌PF02接种到PDA培养基平板上，置入光照培养箱28℃恒温暗培养5～7d活化菌株，然后于菌落边缘打孔做成菌饼，将菌株制作的菌饼移入盛有150mL液体PDA培养基的瓶中，接种2块菌饼(2块菌饼表示接种量)，置于28℃，140r/min的摇床震荡培养10d，破碎5min，用无菌水稀释至40倍显微镜的视野内观察到平均20个菌体，配制成液体菌剂。
[0009]优选地，所述的兰花菌根真菌PF02制成浓度为100～150mL/L的真菌诱导子后促进兰花生长。
[0010]优选地，所述真菌诱导子的配制：将活化后的兰花菌根真菌PF02打成菌饼，将菌饼
接种到PDA液体培养基中，250mL/瓶，接种菌饼1块/瓶，120r/min摇床震荡培养7d，待菌丝体充分生长后收获，将菌丝体打碎后与菌液混合，121℃灭菌20min后即得到PF02真菌诱导子。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益的技术效果：
[0012]本专利技术首次从野生兰花中分离筛选到一株Kirschsteiniothelia tectonae PF02，该菌能促进兰花的生长，应用于兰花菌根化育苗实践中，可促进兰花种苗的快速繁育，并缩短成苗周期，为珍稀濒危植物的保育提供理论基础，并为促进兜兰产业的规模化发展提供技术支撑。
[0013]保藏信息说明
[0014]Kirschsteiniothelia tectonae PF02于2020年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC NO：21051。
附图说明
[0015]图1兰花菌根真菌PF02形貌特征图，其中(a)为40倍率下PF02菌丝图，(b)为PF02菌落图。
[0016]图2兰花菌根真菌PF02对带叶兜兰试管苗生物量增长的影响。
[0017]图3兰花菌根真菌PF02对带叶兜兰移栽杯苗生物量增长的影响。
[0018]图4是不同浓度的兰花菌根真菌PF02真菌诱导子对带叶兜兰试管苗生长的影响。
[0019]图5兰花菌根真菌PF02真菌诱导子对带叶兜兰试管苗生长的影响。
[0020]图6兰花菌根真菌PF02对带叶兜移栽杯苗植株生长的影响。
具体实施方式
[0021]下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0022]实施例1
[0023]兰花菌根真菌PF02的分离和鉴定
[0024]1.1、兰花菌根真菌PF02的分离
[0025]兰花菌根真菌PF02的分离包括取样、筛选，具体如下：
[0026]从7批次野生兰花新鲜营养根中采用组织块分离法或组织液涂抹法分离出菌株，分离培养基为马铃薯葡萄糖培养基(PDA)，共分离菌株154株，将这些菌根真菌采用尖端挑取法纯化，合并后共得到60个菌株；
[0027]优良性状真菌菌株初筛与复筛：
[0028](1)固体菌种：选取已活化的不致死(初筛)或有益菌株(复筛)菌种，从菌落边缘打取直径0.5cm的菌饼作为接种材料；
[0029](2)接种方法：在超净工作台上，用无菌水冲洗干净粘附在组培苗根上的培养基，无菌吸水纸吸干水分，以瓶为单位称取鲜重后移入共生培养基，每瓶2株，挑取1个菌饼接入培养瓶中央，对照不接菌；每处理重复3次，放入培养室中进行共生培养，温度(23
±
1)℃，每天光照12～14h，光照强度为1 600～2 000Lux，隔两天观察菌及苗的生长状况；
[0030](3)兰花生长指标的测定：在接种当天和接种后90d测定组培苗的鲜重，统计植株接菌后的成活情况及长势；计算苗的鲜重增长率(％)＝(末重－始重)/始重
×
100；
[0031](4)菌根化检测：每处理随机抽取2～3株苗，每株苗剪取3～4条新鲜营养根，将根段在超净工作台中用75％的乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2次，然后用0.1％升汞溶液消毒1～3min进行表面灭菌，以后操作及培养条件同1.1的真菌分离方法，7d后统计分离情况并计算分离率，与原菌株的菌落形态及生长特征对比后若分离到的是目标菌株则说明该菌株可以形成菌根，植株己经充分菌根化；
[0032]采用共生(DE)培养基接种兰花组培苗与菌株，初筛培养60d后选取对幼苗不致死的菌株再进行下一步复筛，测量并记录，获得对幼本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株兰花菌根真菌PF02，其特征在于：所述兰花菌根真菌PF02命名为Kirschsteiniothelia tectonae PF02，于2020年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC NO：21051。2.如权利要求1所述兰花菌根真菌PF02在促进兰花生长中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将所述兰花菌根真菌PF02制成液体菌剂或真菌诱导子后促进兰花生长。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将所述兰花菌根真菌PF02制成液体菌剂的方法：将兰花菌根真菌PF02接种到PDA培养基平板上，置入光照培养箱28℃恒温暗培养5～7d活化菌株，然后于菌落边缘打孔...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈宝玲，杨开太，龙定建，唐庆，龚建英，苏莉花，杜铃，陈尔，李冰，唐遒冥，
申请(专利权)人：广西壮族自治区林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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