具有神经保护作用的达玛烷型皂苷类化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了对人神经母细胞瘤SH‑SY5Y细胞有保护作用的绞股蓝提取物式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物及其制备方法，属于植物化学领域。式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物的制备方法如下：将绞股蓝全草用70％乙醇超声提取30min，提取液减压浓缩得浸膏；浸膏加蒸馏水混悬后过SP825L大孔树脂，依次用水、50％乙醇、95％乙醇分别进行洗脱，95％乙醇洗脱液减压浓缩得洗脱物，洗脱物上硅胶柱色谱，用10∶1～1∶1(V/V)的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到8个组分，组分5用中压快速制备色谱柱(8×30cm)，40∶60(V/V)乙腈/水洗脱，流速为50mL/min，得到5个组分，组分3用半制备色谱柱(250mm×10mm，5μm)，28∶72→95∶5(V/V)乙腈/水洗脱，流速3mL/min，即得。

【技术实现步骤摘要】
具有神经保护作用的达玛烷型皂苷类化合物及其制备方法
本专利技术涉及一种从植物绞股蓝(Gynostemmapentaphyllum)中提取得到的具有神经保护作用的皂苷类化合物；本专利技术还涉及该皂苷类化合物的制备方法，属于植物化学领域。
技术介绍
绞股蓝为葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属(Gynostemma)绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino的全草，具有清热解毒，止咳祛痰等功能。绞股蓝中最主要的药效成分是皂苷类成分。研究表明，绞股蓝又名“南方人参”，其价格远远低于人参，但药用价值可以与人参相媲美；生命力极其顽强，扦插即活，极易实现机械化种植；成药时间短，绞股蓝皂苷种类多且易得，本身含有Rb1、Rg3等人参皂苷成分，一定程度上可作为人参替代资源。如果用传统方法进行分离，不但耗费大量的药用资源，而且得率也很低。因此，利用LC-MS对化合物进行靶向分离已经成为现代药学研究的热点，可创造更大的经济效益、社会效益和生态效益。
技术实现思路
本专利技术人在对绞股蓝的有效成分研究中分离得到具有结构式(I)、(II)、(III)和(IV)的新化合物，在现有文献中从未报道，于是对其进一步进行了药理实验，发现对人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有一定的神经保护作用，从而完成了本专利技术。本专利技术目的之一是提供一种下述式(I)、(II)、(III)和(IV)的化合物：本专利技术的另外一个目的是提供制备上述式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物的方法。本专利技术的另外一个目的通过以下技术方案来实现的：一种制备上述式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物的方法，包括：(1)将植物绞股蓝的干燥全草的粗粉在70％乙醇超声提取30min，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；(2)将乙醇提取浸膏通过SP825L大孔树脂，用水、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，95％乙醇洗脱液减压浓缩，得95％乙醇洗脱物；将95％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用10∶1～1∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到8个组分，将其中第5个组分运用硅胶柱色谱、中压快速制备色谱、制备型HPLC进行分离，即得。上述制备方法中，步骤(1)中优选将绞股蓝干燥全草的粗粉在70％乙醇超声提取，超声提取3次，3次回流提取的时间均为30min；合并提取液，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；步骤(2)中用95％乙醇洗脱，回收溶剂为总皂苷提取物。本专利技术式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物具有一定的神经保护作用，具体来说本专利技术式(I)、(II)、(III)和(IV)化合物对氧化损伤的人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y具有一定保护作用。附图说明图1本专利技术化合物(I)、(II)、(III)和(IV)的LC-MS图谱图2本专利技术化合物(I)、(II)、(III)和(IV)神经保护活性图具体实施方式实施例1本专利技术化合物的制备绞股蓝全草的干燥粗粉在在70％乙醇超声提取，超声提取3次，时间分别均为30min。提取液合并后减压回收溶剂，得70％乙醇提取浸膏。取70％乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，乙醇提取物加蒸馏水混悬，并用SP825L大孔树脂，用水、50％乙醇、95％乙醇分别进行洗脱；减压回收溶剂，得到水提物，乙醇提取物；将95％乙醇提取物减压浓缩后，干燥后与硅胶1∶1混合，用硅胶柱色谱分离，用10∶1～1∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到8个组分，将其中第5个组分用中压快速制备色谱柱(340g，C18)进行分离，流速为50mL/min，分段收集洗脱液得到5个组分，将其中第3个组分用岛津LC-6AD半制备液相系统，Shim-packPREP-ODS(H)KIT柱(250mm×10mm，5μm)，乙腈-水为流动相进行二元等度浓度洗脱，28-28％(16min)-35％(17min)-35％(28.6min)-95％(29min)-95％(34min)，流速3mL/min，柱温为室温，检测波长为203nm，将分离得到的4个成分旋蒸及冷冻干燥后，得到4种白色粉末体(GypenosideS1，GypenosideS2，GypenosideS3，GypenosideS4)；对所得到的化合物(GypenosideS1，GypenosideS2，GypenosideS3，GypenosideS4)的结构鉴定波谱数据见下表1。表1分离化合物的13CNMR数据A3-1-31H-NMR(CD3OD，600MHz)谱的高场区显示8个甲基信号δ0.72(3H，s，H-19)，0.87(3H，s，H-29)，0.98(3H，s，H-30)，1.02(3H，s，H-28)，1.21(3H，d，H-6″)，1.24(3H，s，H-18)，1.26(3H，s，H-26)，1.26(3H，s，H-27)和一个甲氧基3.16(3H，s，C25-OCH3)；此外，氢谱还显示4个糖的端基质子信号δ4.47(1H，d，J＝6.0Hz，H-1′)，δ5.20(1H，s，H-1″)，δ4.48(1H，d，J＝6.0Hz，H-1″′)和δ4.21(1H，d，J＝6.0Hz，H-1″″)，结合其化学位移值和端基氢的耦合常数鉴定鼠李糖为α构型，其他三个糖为β构型；2个烯烃质子信号δ5.63(1H，H-23)和δ5.52，(1H，d，J＝18.0Hz，H-24)，表明分子内23、24位为双键，根据耦合常数18.0Hz，确定双键为反式构型。13C-NMR(CD3OD，150MHz)谱给出了54个碳信号，其中δ127.4(C-23)，139.4(C-24)表明分子内含有2个烯碳存在，表明化合物内含有碳碳双键；δ215.4说明含有一个羰基信号，结合氢谱数据，确定化合物内含有羰基；δ50.8说明含有一个甲氧基信号，结合1H-NMR、DEPT90、DEPT135数据，表明化合物内含有甲氧基；δ62-83间的碳化学位移信号是典型的糖基碳化学信号，表明该化合物中含有糖基；4个糖端基碳信号：δ105.2(C-1′)，δ102.1(C-1″)，δ104.9(C-1″′)和δ104.4(C-1″″)，HMBC谱中，δ3.15(1H，m，H-3)和δ105.2(C-1′)存在远程偶合，以及阿拉伯糖端基质子信号δ4.47(1H，d，J＝6.0Hz，H-1′)与苷元的C-3位δ89.4存在远程偶合，证明阿拉伯糖与C-3位成苷；而鼠李糖的端基质子信号δ5.20(1H，s，H-1″)与阿拉伯糖的C-2′位δ75.3信号，葡萄糖的端基质子信号δ4.48(1H，d，J＝6.0Hz，H-1″′)与阿拉伯糖的C-3′位δ81.6信号存在远程相关，表明鼠李糖连在了阿拉伯糖的C-2′位，木糖连在C-3′位。δ3.90(1H，m，H-21)和δ104.8(C-1″″)存在远程偶合，以及葡萄糖端基质子信号δ4.21(1H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有制备神经保护作用药物用途的化合物，所述的癌症选自：人神经母细胞瘤。其特征在于，所述的化合物具有式(I)、(II)、(III)和(IV)的结构：/n式(I)：/n

【技术特征摘要】
1.具有制备神经保护作用药物用途的化合物，所述的癌症选自：人神经母细胞瘤。其特征在于，所述的化合物具有式(I)、(II)、(III)和(IV)的结构：
式(I)：



式(II)



式(III)



式(IV)





2.一种制备(权利要求1所述)化合物的方法，包括：
(1)将植物绞股蓝全草经70％乙醇超声提取30min，提取液减压浓缩，得乙醇提取浸膏；
(2)将乙醇提取浸膏过SP825L大孔树脂，用水、50％乙醇、95％乙醇进行洗脱，95％乙醇洗脱液减压浓缩，得95％乙醇洗脱物；将95％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用10∶1～1∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到8个组分，将其中第5个组分用中压快速制备色谱柱(8×30cm)...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴香兰，翟新房，
申请(专利权)人：中央民族大学，
类型：发明
国别省市：北京;11