桃金娘提取物抗菌剂的制备及其抑菌作用制造技术

本发明专利技术提供几种桃金娘提取物制成的抗菌剂分别来自桃金娘水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物和正己烷提取物，实验表明它们各自对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的生长具有一定的抑制作用。以桃金娘科桃金娘属植物桃金娘的叶片为原料，经过适当粉碎后采用不同浓度和比例的溶剂以一定工艺条件提取、加工得到不同的桃金娘提取物制剂。本发明专利技术的桃金娘提取物，制备工艺易于实现工业化，所得提取物制剂抗菌效果显著，具有抑菌广谱性，可作为替代抗生素广泛应用于牲畜饲料中，为植物源抗菌剂在饲料工业上的应用提供良好的愿景。

【技术实现步骤摘要】
桃金娘提取物抗菌剂的制备及其抑菌作用
本专利技术属于天然植物抗菌剂领域，具体涉及桃金娘提取物抗菌剂在抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌生长繁殖的作用。
技术介绍
已有研究表明桃金娘科桃金娘属桃金娘植物的果实和叶子提取物经分离纯化可得到上百种化合物，其中具有多种显著抗菌作用的化合物。对于桃金娘中具体化合物的抗菌效能的研究较多，而对于将其抗菌性能应用到饲料工业中作为天然植物提取物来源的抗菌剂的应用尚未有报道，因此，本专利技术研制桃金娘提取物抗菌剂，探索了不同提取剂，比较了不同制剂方法对桃金娘抗菌剂的抗菌效果的影响，测定了其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的影响，初步确定了桃金娘叶片提取物作为饲料工业中替抗产品的潜力，为今后开发植源性抗菌产品提供了理论基础和实践方法。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是：针对饲料工业上植源性抗菌剂的缺乏，提供了桃金娘叶提取物抗菌剂的制备及其抑菌效果评价。上述的抑菌作用实际上是指对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌的抑制。上述的桃金娘提取物指的是水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物和正己烷提取物。其中乙醇提取物采用的提取剂是浓度为20%-100%的乙醇水溶液。上述的抗菌剂剂型为颗粒剂和粉剂，桃金娘提取物通过真空干燥或喷雾干燥得到颗粒或粉末状产品。本专利技术的乙醇提取物抗菌剂对于金黄色葡萄球菌具有显著的抑制效果，对于大肠杆菌和白色念球菌也有较强的抑制作用。本专利技术的丙酮提取物抗菌剂和乙酸乙酯提取物抗菌剂对于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌都具有较强的抑制作用。本专利技术中提供的桃金娘水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物、正己烷提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别是1.25mg/ml，0.6mg/ml，2.5mg/ml，5.0mg/ml，2.5mg/ml，0.6mg/ml，1.25mg/ml。本专利技术中提供的桃金娘水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物、正己烷提取物对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是5.0mg/ml，2.6mg/ml，5.0mg/ml，20.0mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml，7.5mg/ml。本专利技术中提供的桃金娘水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物、正己烷提取物对白色念球菌的最低抑菌浓度分别是5.0mg/ml，10.0mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml。具体实施方式供试植物和菌株桃金娘科桃金娘属的桃金娘叶来自广东揭阳市，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌由中国科学院华南植物园天然产物化学和生物学组提供。三种供试菌液的制备:取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌培养在37℃恒温培养箱中12h，用培养基稀释，通过测定OD600为0.070左右，得到1.25×106CFU/mL的供试菌液。连续二倍稀释法:配制0.1mg/mL的刃天青溶液，取7.5mL此溶液与5mL的供试菌溶液（1.25×106CFU/mL）混合。分别移取100μL此混合液从96孔板的B行到H行。在A行移取180μL混合液，并在此行第1列到第12列每孔分别加入20μL样品或对照品溶液，每个样品或对照品加两个孔以作为平行组。而后用排枪从A行混匀后吸取100μL到下一行，如此依次取100μL混合液直到最后一行后弃去最后的100μL混合液，以保证每一行的孔中的溶液都是100μL。最后，将加好的96孔板放入恒温培养箱中37℃培养6～8h，直到孔板的染色变为粉红色。检测活性标准:以颜色从蓝色变为粉红色为临界，蓝色表明有抑菌活性，粉红色表明无活性。发生颜色变化的最低稀释浓度就是该样品的最低抑菌浓度（MIC）。供试培养基MHB肉汤培养基：牛肉粉2.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解酪蛋白17.5g，蒸馏水1000ml，pH7.4±0.2；改良马丁培养基：胨5.0g，酵母浸出粉2.0g，葡萄糖20.0g，磷酸氢二钾1.0g，硫酸镁0.5g，pH6.4±0.2。实施例1取桃金娘叶，晒干至含水量为5%-10%，粉碎成20-40目干粉。称取100g桃金娘叶干粉，加入1000ml蒸馏水，80℃条件下加热回流搅拌提取2h，过滤，收集滤液；滤渣重复提取一次，合并两次滤液。所有滤液通过喷雾干燥得到喷干粉，喷淋塔的进风温度为170℃，出风温度为95℃。将得到的喷干粉过40-60目筛，即得到桃金娘叶水提取物。采用刃天青显色法测定桃金娘叶水提取物金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌的抑制效果。通过观察刃天青显色剂由蓝变粉红的临界点，得到桃金娘叶水提物对三种菌的最小抑菌浓度分别为1.25mg/ml，5.0mg/ml，5.0mg/ml。实施例2取桃金娘叶，晒干至含水量为5%-10%，粉碎成40-60目干粉。称取100g桃金娘叶干粉，加入1000ml50%乙醇，60℃条件下加热回流搅拌并超声波辅助提取3h，过滤，收集滤液；滤渣重复提取一次，合并两次滤液。所有滤液在水浴温度60℃、冷凝水温度为0℃、压力为0.1MPa条件下，旋转蒸发至流膏状。转移此流膏状物质至干净铁托盘中，再置于50-60℃真空干燥箱中干燥24h，将得到的固体粉碎至6-10目，即得到桃金娘叶50%乙醇提取物颗粒剂。采用刃天青显色法测定桃金娘叶50%乙醇提取物金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌的抑制效果。通过观察刃天青显色剂由蓝变粉红的临界点，得到桃金娘叶50%乙醇提物对三种菌的最小抑菌浓度分别为0.60mg/ml，2.60mg/ml，10.0mg/ml。实施例3取桃金娘叶，晒干至含水量为5%-10%，粉碎成20-40目干粉。称取100g桃金娘叶干粉，加入1000ml30%乙醇，80℃条件下加热回流并超声波辅助提取3h，过滤，收集滤液；滤渣重复提取一次，合并两次滤液。所有滤液在水浴温度60℃、冷凝水温度为0℃、压力为0.1MPa条件下，旋转蒸发至流膏状。转移此流膏状物质至干净铁托盘中，再置于60-70℃真空干燥箱中干燥36h，将得到的固体粉碎至6-10目，即得到桃金娘叶30%乙醇提取物颗粒剂。采用刃天青显色法测定桃金娘叶30%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌的抑制效果。通过观察刃天青显色剂由蓝变粉红的临界点，得到桃金娘叶30%乙醇提物对三种菌的最小抑菌浓度分别为2.5mg/ml，10.0mg/ml，5.0mg/ml。实施例4取桃金娘叶，晒干至含水量为5%-10%，粉碎成40-60目干粉。称取100g桃金娘叶干粉，加入1000ml无水乙醇，60℃条件下加热回流搅拌提取3h，过滤，收集滤液；滤渣重复提取一次，合并两次滤液。所有滤液在水浴温度60℃、冷凝水温度为0℃、压力为0.1MPa条件下，旋转蒸发至流膏状本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.桃金娘提取物抗菌剂的制备及其抑菌作用，其特征在于，包括不同溶剂的桃金娘提取物。/n

【技术特征摘要】
20201231 CN 202011627902X1.桃金娘提取物抗菌剂的制备及其抑菌作用，其特征在于，包括不同溶剂的桃金娘提取物。


2.根据权利要求1，所述的桃金娘提取物指的是桃金娘的叶片提取物。


3.根据权利要求2，所述的桃金娘叶片提取物包括水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物、甲醇提取物和正己烷提取物。


4.根据权利要求3所述的乙醇提取物，其特征在于，采用的提取剂为20%-100%的乙醇水溶液。


5.根据权利要求3所述的多种提取物，是通过水浴加热回流和超声波辅助提取相结合的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶正国，赵丽云，林劲冬，潘丹阳，李辉，余勃，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广州立达尔生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44