一种黄连解毒汤拆分组分及其在特应性皮炎中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种黄连解毒汤拆分组分及其在特应性皮炎中的应用，属于中药复方活性部位提取方法技术领域。该黄连解毒汤拆分组分通过对黄连、黄芩、黄柏、栀子进行药液提取，随后对药液进行醇沉，保留滤液后进行萃取，获得石油醚萃取物，并将萃取后的水层进行色谱柱分离得到黄连解毒汤多糖组分、黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分。通过本发明专利技术分离方法获得的组分，经抗特应性皮炎研究发现，黄连解毒汤多糖组分和黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分的抗特应性皮炎效果较好。

【技术实现步骤摘要】
一种黄连解毒汤拆分组分及其在特应性皮炎中的应用
本专利技术属于中药复方活性部位提取方法
，具体地，涉及一种黄连解毒汤拆分组分及其在特应性皮炎中的应用。
技术介绍
特应性皮炎(atopicdermatitis，AD)，又称为异位性皮炎、遗传过敏性皮炎等，是一种慢性复发性、瘙痒性、炎症性皮肤病，其特点是慢性炎症、免疫反应改变和表皮屏障功能障碍,临床特征表现为湿疹样皮炎反复发作，并伴有炎症、瘙痒、结痂和干燥等。作为一种慢性疾病，AD存在于所有年龄的患者中：15％至30％的儿童时期就开始发病，2％至10％的成年人受到AD的影响，大约有40％-80％的患者有家族过敏史。多项研究均已证实黄连解毒汤为治疗特应性皮炎有效复方。黄连解毒汤出自《外台秘要》，由黄连、黄芩、黄柏和桅子组成，具有清热泻火解毒的功效，用于一切实热火毒，三焦实热之症。现代药理学研究证实，黄连解毒汤具有抗炎、抗菌、解热、抗内毒素等作用，临床用于治疗特应性皮炎、脑血管疾病、脓毒症、多器官功能障碍综合征等均有一定的疗效。临床研究表明黄连解毒汤对于顽固性湿疹的治疗总有效率为84％，65％疗效较为满意，尤其适用于上半身病情较重，皮损潮红焮热，痛痒交作，伴心烦寐差、渴喜冷饮的AD患者。Kobayashi等对数千名AD患者的治疗进行归纳研究发现黄连解毒汤能很好的消除面部炎症，在AD的治疗中起到抗炎与镇静的作用。此外，体内外研究均表明黄连解毒汤可能通过抑制MAPKS的磷酸化和NF-κB的转录在AD的治疗中发挥抗过敏和抗炎作用。但是，黄连解毒汤作为中药复方，服药量大，不方便制剂且副作用大。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种黄连解毒汤拆分组分及其在特应性皮炎中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种黄连解毒汤拆分组分，所述黄连解毒汤拆分组分通过以下拆分方法获得：(1)分别称取300g的黄连、200g的黄芩、200g的黄柏、300g的栀子，经剪碎研磨后，得到混合物，对混合物重复进行药液提取；(2)将提取的药液减压浓缩至3.2L后加入乙醇，进行醇沉，醇沉时使得乙醇的酒精度为75％，4℃以下冷藏12h-24h，得到醇沉液，抽滤醇沉液，使用乙酸乙酯对滤渣进行超声洗涤，将洗涤液中的乙酸乙酯挥发后，经水溶解合并入滤液中，将滤液浓缩至无醇味；所述滤渣为黄连解毒汤多糖组分；(3)在浓缩后的滤液中加入浓缩滤液体积1/2的石油醚进行萃取，重复萃取三次，萃取后得到石油醚层和水层，合并石油醚层，将所述石油醚层进行浓缩得到黄连解毒汤石油醚组分；(4)将水层挥发至无石油醚味后，将水层加入所述水层三倍生药量的大孔树脂柱中，静置12-24h，分别以水、酒精度为40％的乙醇溶液、酒精度为90％的乙醇溶液进行洗脱，分别洗脱5个保留体积，分别收集洗脱液并进行浓缩，水浴烘干得到的三份样品研磨至粉末状，分别为：黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分。进一步地，所述药液提取的过程为：在所述混合物加入5-7L水浸泡2h后，加热至100℃提取2h，趁热过滤出药液，重复上述提取过程，直至药液为无色，合并提取的药液。进一步地，所述保留体积为3L。本专利技术还提供了一种黄连解毒汤拆分组分在特应性皮炎中的应用。进一步地，所述黄连解毒汤拆分组分为黄连解毒汤多糖组分和黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：通过对黄连解毒汤进行简单拆分，与中医药中的“整体观”观念较为一致，避免了对药物多次拆分造成的“成分丢失”及“活性消失”的现象，本专利技术的拆分方法相对简便，对各拆分组分进行分析发现交叉度较少，各拆分组分之间的成分含量相对清晰，通过药理学研究明确拆分组分中的活性组分，本专利技术的方法对黄连解毒汤原方起到一个简化以及减毒增效的作用，有利于后续药物开发。附图说明图1为黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分以及黄连解毒汤石油醚组分的PCA图；图2为各组分对抗特应性皮炎活性评价图；图3为利用HE染色观察黄连解毒汤各组分对皮炎小鼠组织病理的影响图；图4为采用RTPCR方法对各组小鼠皮损部位进行H4R4、JAK1、IL-4RαmRNA表达检测图；图5为采用WB方法对各组小鼠皮损部位进行H4R4、JAK1、p-JAK1、IL-4Rα蛋白表达检测图；图6为采用高通量液相蛋白芯片以及ELISA方法对Histamine,IgE,IL-3,IL-4,IL-5,IL-13,IL-17A,IL-31和IL-33指标进行检测图。具体实施方式实施例1本专利技术提供了一种黄连解毒汤拆分组分，所述黄连解毒汤拆分组分通过以下拆分方法获得：(1)分别称取300g的黄连、200g的黄芩、200g的黄柏、300g的栀子，经剪碎研磨后，得到混合物，在所述混合物加入5L水浸泡2h后，加热至100℃提取2h，趁热过滤出药液，重复上述提取过程，直至药液为无色，合并提取的药液。(2)将提取的药液减压浓缩至3.2L后加入乙醇，进行醇沉，醇沉时使得乙醇的酒精度为75％，4℃以下冷藏12h，得到醇沉液，抽滤醇沉液，使用乙酸乙酯对滤渣进行超声洗涤，将洗涤液中的乙酸乙酯挥发后，经水溶解合并入滤液中，将滤液浓缩至无醇味；所述滤渣为黄连解毒汤多糖组分；(3)在浓缩后的滤液中加入浓缩滤液体积1/2的石油醚进行萃取，重复萃取三次，萃取后得到石油醚层和水层，合并石油醚层，将所述石油醚层进行浓缩得到黄连解毒汤石油醚组分；(4)将水层挥发至无石油醚味后，将水层加入所述水层三倍生药量的大孔树脂柱中，静置24h，分别以水、酒精度为40％的乙醇溶液、酒精度为90％的乙醇溶液进行洗脱，分别洗脱5个保留体积，每个保留体积为3L，分别收集洗脱液并进行浓缩，水浴烘干得到的三份样品研磨至粉末状，分别为：黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分。将上述有效组分分离方法获得的黄连解毒汤多糖组分、黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分以及黄连解毒汤石油醚组分经HPLC分析可知：黄连解毒汤多糖组分与其余各组分均无交叉，黄连解毒汤水洗组分与黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分的交叉度为3.73％，黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分与黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分的交叉度为4.15％，黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分与黄连解毒汤石油醚组分的交叉度为0.03％；以上所有交叉度均小于5％，表明各个组分均无交叉，且经8次重复实验证明本专利技术黄连解毒汤有效组分分离方法较为稳定。本专利技术采用夹角余弦法、相关系数法和生药峰面积交叉分析方法对黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分以及黄连解毒汤石油醚组分进行差异度评价。(1)生药峰面积差异度分析法通过HPLC色谱软件分别导出本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄连解毒汤拆分组分，其特征在于，所述黄连解毒汤拆分组通过以下拆分方法获得：/n(1)分别称取300g的黄连、200g的黄芩、200g的黄柏、300g的栀子，经剪碎研磨后，得到混合物，对混合物重复进行药液提取；/n(2)将提取的药液减压浓缩至3.2L后加入乙醇，进行醇沉，醇沉时使得乙醇的酒精度为75％，4℃以下冷藏12h-24h，得到醇沉液，抽滤醇沉液，使用乙酸乙酯对滤渣进行超声洗涤，将洗涤液中的乙酸乙酯挥发后，经水溶解合并入滤液中，将滤液浓缩至无醇味；所述滤渣为黄连解毒汤多糖组分；/n(3)在浓缩后的滤液中加入浓缩滤液体积1/2的石油醚进行萃取，重复萃取三次，萃取后得到石油醚层和水层，合并石油醚层，将所述石油醚层进行浓缩得到黄连解毒汤石油醚组分；/n(4)将水层挥发至无石油醚味后，将水层加入所述水层三倍生药量的大孔树脂柱中，静置12-24h，分别以水、酒精度为40％的乙醇溶液、酒精度为90％的乙醇溶液进行洗脱，分别洗脱5个保留体积，分别收集洗脱液并进行浓缩，水浴烘干得到的三份样品研磨至粉末状，分别为：黄连解毒汤水洗组分、黄连解毒汤40％酒精度醇洗组分、黄连解毒汤90％酒精度醇洗组分。/n...

【技术特征摘要】
1.一种黄连解毒汤拆分组分，其特征在于，所述黄连解毒汤拆分组通过以下拆分方法获得：
(1)分别称取300g的黄连、200g的黄芩、200g的黄柏、300g的栀子，经剪碎研磨后，得到混合物，对混合物重复进行药液提取；
(2)将提取的药液减压浓缩至3.2L后加入乙醇，进行醇沉，醇沉时使得乙醇的酒精度为75％，4℃以下冷藏12h-24h，得到醇沉液，抽滤醇沉液，使用乙酸乙酯对滤渣进行超声洗涤，将洗涤液中的乙酸乙酯挥发后，经水溶解合并入滤液中，将滤液浓缩至无醇味；所述滤渣为黄连解毒汤多糖组分；
(3)在浓缩后的滤液中加入浓缩滤液体积1/2的石油醚进行萃取，重复萃取三次，萃取后得到石油醚层和水层，合并石油醚层，将所述石油醚层进行浓缩得到黄连解毒汤石油醚组分；
(4)将水层挥发至无石油醚味后，将水层加入所述水层三倍生药量的大孔树脂柱中，静置12-24h，分别以水、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐煜彬，王文杰，陈赛贞，
申请(专利权)人：台州市中心医院台州学院附属医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33