C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用。本发明专利技术研究表明，可通过C/EBPα和CD68在组织原位的共定位情况来判断单核/巨噬细胞在肝癌组织原位的分化和成熟状态，以确定肝癌患者组织原位免疫反应情况，帮助临床医生更好的判断患者的预后生存情况，为选择合适的个体化治疗提供免疫学理论基础。本发明专利技术还提供一种用于检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的双抗体联合的荧光检测试剂盒的应用，包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为C/EBPα和CD68的抗体的组合，所述第二抗体是荧光标记的第二抗体。所述第二抗体是荧光标记的第二抗体。所述第二抗体是荧光标记的第二抗体。

【技术实现步骤摘要】
C/EBP
α
和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及疾病预后诊断
，具体地，涉及C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是我国最常见和预后最差的恶性肿瘤之一，绝大多数起病于长期的慢性炎症。不论肝癌的发生起源于何种诱因，均能导致免疫反应的失衡，大量的免疫细胞连同其产生的细胞因子和代谢产物使肝实质细胞发生基因突变和表观遗传学水平的改变，逐步演变成恶性肿瘤细胞。单核/巨噬细胞是其中数量最多的白细胞之一，对肝癌的发生、进展和转归均起着非常重要的调节作用。单核/巨噬细胞既是效应细胞又是抗原递呈细胞，在正常组织及肿瘤发生的早期，能及时、有效地清除衰老和突变的细胞，防止细胞恶性转化的发生；但在多数已形成的肿瘤中，单核/巨噬细胞受肿瘤微环境的“教育”和影响，可极化出促肿瘤的表型/功能。因此在许多实体肿瘤中，单核/巨噬细胞的浸润程度与肿瘤的预后呈显著负相关关系。
[0003]近年来的研究表明，在包括肝脏在内的多种器官和组织中的巨噬细胞多起源于胚胎时期的卵黄囊和胎肝，这驻留在组织当中的巨噬细胞能够通过低水平的自我增殖、自我更新以维持数量的平衡。在疾病发生，如肿瘤存在的情况下，组织微环境可以通过上调巨噬细胞的增殖水平以补充足够的巨噬细胞数量。尽管如此，外周血来源的单核细胞仍然是组织巨噬细胞的重要补充，参与对疾病进程的调控。我们先前的研究显示在肝癌的侵袭前缘部位聚集有大量活化的单核细胞，这些单核细胞可通过多种机制促进肿瘤进展。然而，对于这些单核细胞，其分化命运、分化程度，与功能表型的关系，以及肿瘤如何参与这些过程的具体机制尚不清楚。目前为止，尚没有相关技术或指标能反映单核/巨噬细胞在肝癌组织原位的分化、成熟和增殖情况。
[0004]C/EBPα是C/EBPs家族中最早被发现克隆和研究的基因，在肝脏组织中丰富表达。近年来研究表明，C/EBPα参与肝细胞的增殖和分化，参与慢性肝炎、肝纤维化、肝癌发生等病理过程。郑洁等研究表明C/EBPα基因低表达或失活参与肝癌的发展过程，C/EBPα基因表达水平有可能作为一项预测肝癌进展和预后的指标(郑洁,魏志新,王宝松,姜栋栋,赵金岭,于树娜,蒋吉英.C/EBPα在肝细胞癌中的表达及意义[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2010,19(06):593
‑
596.)。
[0005]CD68是一种相对分子质量为110 000的细胞浆糖蛋白，与溶酶体颗粒有关，是巨噬细胞标记的一种。CD68表达于以下细胞中：单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、嗜碱性粒细胞、大淋巴细胞、破骨细胞、肥大细胞、滑膜细胞、朗格汉斯巨细胞、树突状网织细胞肉瘤和黑色素瘤。此抗体可用于真性组织细胞淋巴瘤、AML、粒细胞肉瘤、Kikucki病中浆样单核细胞和肥大细胞增多症的诊断。目前还未见有将C/EBPα和CD68用于反映单核/巨噬细胞在肝癌组织原位的分化和成熟状态，以用于肝癌患者预后生存期预测的相关报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供C/EBPα和CD68在制备检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的试剂盒中的应用。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种用于检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的双抗体联合的荧光检测试剂盒。
[0009]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：
[0010]本专利技术研究表明，可通过C/EBPα和CD68在组织原位的共定位情况来判断单核/巨噬细胞在肝癌组织原位的分化和成熟状态，以确定肝癌患者组织原位免疫反应情况，帮助临床医生更好的判断患者的预后生存情况，为选择合适的个体化治疗提供免疫学理论基础。因此本专利技术首先请求保护C/EBPα和CD68在制备检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的试剂盒中的应用。
[0011]本专利技术还提供C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用。
[0012]优选地，所述肝癌预后预测为肝癌切除术后患者生存期预测。
[0013]本专利技术还提供C/EBPα和CD68的抗体的组合作为第一抗体在制备检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度以用于肝癌切除术患者预后预测的双抗体联合的荧光检测试剂盒的应用。
[0014]本专利技术还提供一种用于检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的双抗体联合的荧光检测试剂盒的应用，包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为C/EBPα和CD68的抗体的组合。通过检测C/EBPα和CD68两种分子标记物在肝癌切除术患者石蜡切片肿瘤区域中的共定位情况；通过综合分析单核/巨噬细胞分化成熟度，进行肝癌切除术患者预后生存期预测。
[0015]优选地，所述第二抗体是荧光标记的第二抗体。
[0016]本专利技术还提供利用上述双抗体联合的荧光检测试剂盒检测单核/巨噬细胞在肝癌组织原位的分化、成熟和增殖状态以用于肝癌切除术患者预后生存期预测的方法：
[0017]首先，利用免疫荧光双染技术，检测C/EBPα和CD68两种分子标记物在肝癌切除术患者石蜡切片肿瘤区域中的共定位情况；然后，利用专业图像分析软件分析C/EBPα和CD68双阳性细胞在肝癌癌巢组织中占CD68阳性细胞的比例，采用中位值法确定阈值(根据不同的样本数会有变化)，例如在本专利技术中，通过中位值法确定C/EBPα和CD68双阳性细胞在肝癌癌巢组织中占CD68阳性细胞的比例大于10％为阈值，并以此阈值对样本进行“高”与“低”的分组，即通过双阳性细胞比例大于10％的为“高”的一组，小于或等于为10％的为“低”的一组。若高于10％则预测患者预后有较好生存期，若低于10％则预测患者预后有较差生存期。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019](1)本专利技术提供了C/EBPα和CD68在检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度以用于肝癌切除术患者预后预测中的新用途。
[0020](2)本专利技术试剂盒采用免疫荧光双染技术便于直观准确的反应细胞的分化和增殖状态，预测肝癌患者的预后情况。试验方法非常成熟，检测过程简便，直观，易于重复，由普
通技术员即可完成。
附图说明
[0021]图1为免疫荧光多标检测肝癌组织中C/EBPα在单核/巨噬细胞上的表达。绿色荧光显示C/EBPα分子，红色荧光显示CD68分子，荧光蓝显示C/EBPα与CD68的定位情况。
[0022]图2为生存曲线分析肝癌患者肿瘤组织中C/EBPα和CD68双阳性巨噬细胞比例与患者总体生存情况的关系。
具体实施方式
[0023]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.C/EBPα和CD68在制备检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分化成熟度的试剂盒中的应用。2.C/EBPα和CD68作为预后标记物在制备肝癌预后预测试剂盒中的应用。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述肝癌预后预测为肝癌切除术后患者生存期预测。4.C/EBPα和CD68的抗体的组合作为第一抗体在制备检测肝癌组织中单核/巨噬细胞分...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑利民，陈敏山，王永春，许静，周仲国，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心中山大学附属肿瘤医院，中山大学肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：