一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，更具体的涉及一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法。本发明专利技术提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，包括以下步骤：(1)将染色用Adipo

【技术实现步骤摘要】
一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法


[0001]本专利技术属于生物
，更具体的涉及一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法。

技术介绍

[0002]脂肪间充质干细胞Adipose
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derived stem cells(ADSC)，是从脂肪组织中分离出来的一种多向分化干细胞，因其与BMSC形态形似而称为脂肪间充质干细胞。2001年，ZuK首次从人抽脂术抽取获得。人脂肪间充质干细胞具有许多特性，包括间充质干细胞潜在的增殖能力和适当条件下的多向分化能力。人脂肪充质干细胞不仅可以应用于组织的修复，而且在细胞免疫调节和基因治疗中均发挥重要作用。
[0003]因此，出现了较多有关研究人脂肪间充质干细胞分化的研究，也带动着研究者们对人间充质干细胞诱导分化成脂后的鉴定方法的开发。现阶段关于间充质干细胞诱导分化成脂后的染色过程可能存在因为染色剂的存在导致在观察细胞西南柜台的时候出现漂浮的块状物，影响对细胞形态的判断，影响研究者后续研发的进行。因此，开发一种快速、方便、准确的染色鉴定方法成为一项重要的研究。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术的第一方面提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，包括以下步骤：
[0005](1)将染色用Adipo
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Staining A和Adipo
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Staining B混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；
[0006](2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo
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Fixation，静置；
[0007](3)然后向步骤(2)中加入Adipo
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Wash I清洗；
[0008](4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；
[0009](5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo
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Wash II清洗；
[0010](6)重复步骤(5)一次或多次；
[0011](7)最后向步骤(6)中加入Adipo
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Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成。
[0012]作为一种优选的技术方案，步骤(1)所述的Adipo
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Staining A和Adipo
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Staining B的体积比为(1
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4)：2。
[0013]作为一种优选的技术方案，所述的Adipo
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Staining A和Adipo
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Staining B要求混合后3小时内有效。
[0014]作为一种优选的技术方案，步骤(2)中氯化钠注射液的质量浓度为0.7～1.0％；步骤(2)中吸掉清洗后的氯化钠注射液后再加入Adipo
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Fixation。
[0015]作为一种优选的技术方案，步骤(2)中静置时间为20分钟以上。
[0016]作为一种优选的技术方案，步骤(2)中静置时间为20～30分钟。
[0017]作为一种优选的技术方案，步骤(4)中静置时间为25～30分钟。
[0018]作为一种优选的技术方案，步骤(5)中加入Adipo
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Wash II清洗，清洗时间为3～5分钟。
[0019]作为一种优选的技术方案，步骤(6)中重复步骤(5)一次到三次。
[0020]本专利技术的第二方面，提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法的应用，用于脐带、脂肪、胎盘、羊膜的间充质干细胞诱导分化成脂后染色鉴定。
[0021]有益效果：经本专利技术开发的人间充质干细胞诱导分化成脂染色鉴定方法，可以有效鉴定通过血清替代物和间充质干细胞基础培养基培养的间充质干细胞的成脂分化鉴定，避免了染色后在显微镜中出现的块状漂浮物对细胞形态的判断，并且，此方法简单、快速，有效性和针对性强，在脐带、脂肪、胎盘、羊膜的人间充质干细胞的诱导分化成脂鉴定方面提供了有效的方法。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1间充质干细胞诱导分化成脂染色前细胞形态图；
[0023]图2为本专利技术实施例1间充质干细胞诱导分化成脂染色后细胞形态图。
具体实施方式
[0024]结合以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可进一步地理解本专利技术的内容。除非另有说明，本文中使用的所有技术及科学术语均具有与本申请所属领域普通技术人员的通常理解相同的含义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。
[0025]在本文中使用的，除非上下文中明确地另有指示，否则没有限定单复数形式的特征也意在包括复数形式的特征。还应理解的是，如本文所用术语“由
…
制备”与“包含”同义，“包括”、“包括有”、“具有”、“包含”和/或“包含有”，当在本说明书中使用时表示所陈述的组合物、步骤、方法、制品或装置，但不排除存在或添加一个或多个其它组合物、步骤、方法、制品或装置。此外，当描述本申请的实施方式时，使用“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。除此之外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本专利技术的范围之外。
[0026]为了解决上述技术问题，本专利技术第一方面提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，包括以下步骤：
[0027](1)将染色用Adipo
‑
Staining A和Adipo
‑
Staining B混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；
[0028](2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo
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Fixation，静置；
[0029](3)然后向步骤(2)中加入Adipo
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Wash I清洗；
[0030](4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；
[0031](5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo
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Wash II清洗；
[0032](6)重复步骤(5)一次或多次；
[0033](7)最后向步骤(6)中加入Adipo
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Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成。
[0034]在一些优选的实施方式中，步骤(2)中所说的分化成脂后的间充质干细胞选择由血清代替物和间充质干细胞基础培养基培养得到的细胞。
[0035]在一些优选的实施方式中，步骤(1)所述的Adipo
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Staining A和Adipo
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将染色用Adipo
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Staining A和Adipo
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Staining B混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；(2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo
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Fixation，静置；(3)然后向步骤(2)中加入Adipo
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Wash I清洗；(4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；(5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo
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Wash II清洗；(6)重复步骤(5)一次或多次；(7)最后向步骤(6)中加入Adipo
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Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成。2.根据权利要求1所述的人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，其特征在于，步骤(1)所述的Adipo
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Staining A和Adipo
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Staining B的体积比为(1
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4)：2。3.根据权利要求2所述的人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，其特征在于，所述的Adipo

【专利技术属性】
技术研发人员：朱灏，
申请(专利权)人：华夏源细胞工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：