微生物制剂制造技术

本发明专利技术涉及农业微生物领域，公开了一种微生物制剂，包括吸附剂和杰米拉类芽孢杆菌（Paenibacillus jamilae）W51；其中，所述杰米拉类芽孢杆菌W51的活菌总浓度为1

【技术实现步骤摘要】
微生物制剂
[0001]分案说明本专利技术为申请日为2019年9月29日，申请号为2019109339644，专利技术名称为“杰米拉类芽孢杆菌、其微生物制剂与制备方法及应用”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及农业微生物领域，特别涉及一种微生物制剂。

技术介绍

[0003]番茄是我国生产种植体系中最重要的蔬菜种植作物之一，近年来其生产规模不断扩大，在栽培种植过程中，导致番茄减产的首要病害为番茄青枯病，病原菌为茄科青枯劳尔氏菌（Ralstonia solanacearum）。青枯病原菌可通过雨水、浇灌水、地下虫害或操作工具等方式从番茄的根部、茎基部皮孔或伤口侵入并潜伏，待条件适宜时在维管束内迅速繁殖，并沿导管向上扩展，侵入邻近的薄壁细胞组织，导致导管堵塞，植株得不到应有的水分和营养供给而萎蔫死亡。由于该病害传染性极强，病原菌主要在土壤中完成越冬和侵染，其在植株维管束中的致病方式使得传统防治手段束手无策，因此被人们称为“植物癌症”。中国长江以南特别是华南地区是该病害的重灾区，一旦发病难以控制，经常造成番茄植株的大面积枯萎死亡，重病田块严重减产甚至绝收，该病害严重制约着番茄产业的发展和经济效益的提高。
[0004]目前，对番茄青枯病的防治已有诸多报道，比如浇灌农药、作物轮种、抗性育种等，但尚未出现稳定有效的防治措施。近年来，越来越多的研究人员开始在生物防治上寻找突破口，如无致病力青枯菌、假单胞菌、芽孢杆菌、真菌、噬菌体等，由于芽孢杆菌是多种病原菌的拮抗菌，能预防和控制作物病害，被普遍认为是一种环境友好、经济有效的病害防治途径。然而尽管目前国内外利用生防制剂防治番茄青枯病取得了一定的研究进展，但大多数的生防制剂仍处于试验阶段，在实际应用中存在不少问题，如田间防效不理想、防治时间短、生防菌定殖力低、受环境影响因素大等。
[0005]因此，需要合适的载体材料来增强其适应性和有效性。粘土矿如伊利石等是组成粘土岩和土壤的主要矿物，粘土颗粒所具有的大比表面积、多孔结构及强吸附性能已经引起越来越多的学者及研究人员的兴趣。伊利石是一种常见的黏土矿物，其成分主要为伊利石，还含有少量的高岭石、蒙脱石、绿泥石、叶蜡试石等。伊利石晶体结构属于2：1型单元层的二八面体型，含有大量的金属阳离子如Fe
2+
、Mg
2+
、Si
2+
等，可以与细菌细胞壁表面的肽聚糖相结合。此外伊利石晶体的大比表面积的特征也使得其具备良好的静电吸附性能，这些特征使得伊利石在水中能够聚集细菌菌体，形成富含菌体的颗粒状物质，而大多数芽孢杆菌在富集时会形成菌膜使得菌体在不良环境中拥有比单个菌体更高的存活率。在生产应用中，生防菌在植株根系周围的存活率会直接影响生防效果，因此，通过伊利石吸附后的菌体相较于单一菌体则具有较高的存活率，从而具有更高的生物防治效果。
[0006]利用伊利石吸附生防菌可制得微生物制剂，将这种微生物制剂作用于番茄青枯病的防治，有望提高生防菌在自然环境中的成活率和改善其在番茄根系周围的定殖能力，从而防止或减轻青枯病菌侵染造成的番茄病害影响。因此，这种微生物制剂具有可观的生产应用前景。

技术实现思路

[0007]专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种微生物制剂，对番茄青枯病具有较高的预防功能。
[0008]技术方案：本专利技术提供了一种杰米拉类芽孢杆菌，分类命名为Paenibacillus jamilae W51，2018年 10月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC No.16639。
[0009]本专利技术还提供了一种杰米拉类芽孢杆菌在防治番茄青枯病中的应用。
[0010]本专利技术还提供了一种微生物制剂，包括吸附剂和权利要求1中所述的杰米拉类芽孢杆菌W51；其中，所述杰米拉类芽孢杆菌W51的活菌总浓度为1
×
10
8 ~1
×
10
9 CFU/mL。
[0011]优选地，所述吸附剂为伊利石粉。
[0012]优选地，所述伊利石粉在所述微生物制剂中的浓度为4%。
[0013]优选地，所述伊利石粉的粒度<2
µ
m，自然白度>85%。
[0014]本专利技术还提供了一种微生物制剂的制备方法，包括以下步骤：S1：将杰米拉类芽孢杆菌W51的种子菌液以1:100的体积比接种至PDB发酵培养基中发酵培养；发酵培养的条件为：32℃，200 ~220 rpm振荡培养18 ~32 h；S2：4000~6000 rpm离心25~30min，取沉淀用灭菌水重悬使得制成的菌悬液在600 nm处的 OD 值范围为0.8 ~1.0；S3：向所述菌悬液中加入4%的灭菌后的伊利石粉，32℃，200~220 rpm振荡吸附0.5 ~1.0 h，即得所述微生物制剂。
[0015]进一步地，在所述S1中，所述杰米拉类芽孢杆菌W51的种子菌液的制备方法如下：将杰米拉类芽孢杆菌W51的菌株接种到YPGB培养液中32℃，200 rpm 振荡培养12 h后，每隔2 h在超净工作台中取样测其在600 nm处的OD值，当OD值为0.8时结束培养，此菌液作为种子菌液。
[0016]本专利技术还提供了一种微生物制剂在防治番茄青枯病中的应用。
[0017]本专利技术还提供了一种防治番茄青枯病的方法，使用微生物制剂对番茄进行灌根处理。
[0018]有益效果：本专利技术是专门针对番茄青枯病开发的微生物制剂，由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，不易产生抗性；对环境安全，无公害，无残留；专一性强，活性高，生产成本低，制备工艺简单，因而有利于番茄的无公害生产；所用的伊利石粉为廉价的天然粘土矿资源，农民可以不用或减少其他化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且减少化学药剂的残留。
[0019]温室实验结构表明：该杰米拉类芽孢杆菌W51（CGMCC No.16639）微生物制剂能显著降低番茄青枯病的发生。利用杰米拉类芽孢杆菌W51和伊利石粉制备的微生物制剂进行灌根处理，对番茄青枯病的防效可达79.35%。
附图说明
[0020]图1为实施方式6中微生物制剂对番茄青枯病防效的可视化照片；其中，A为空白对照组番茄青枯病发病情况，B为微生物制剂组番茄青枯病发病情况。
具体实施方式
[0021]下面结合附图对本专利技术进行详细的介绍。
[0022]实施方式1：本实施方式提供了一种杰米拉类芽孢杆菌W51，该菌株的筛选方法如下：杰米拉类芽孢杆菌W51（CGMCC No. 16639）由江苏省淮安市码头镇番茄根围土中分离获得。将番茄根系切成1cm的小段，用1%的次氯酸钠溶液浸泡5 min，75%的酒精浸泡90 s，无菌水清洗3次（取最后一次清洗的溶液 50 μL 涂于YGPA固体培养基上培养，若48 h 后无菌生长则认为表面消毒干净，无菌）本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种微生物制剂，其特征在于，包括吸附剂和杰米拉类芽孢杆菌（Paenibacillus jamilae ）W51；其中，所述杰米拉类芽孢杆菌W51的活菌总浓度为1
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9 CFU/mL。2. 根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述杰米拉类芽孢杆菌于2018年10月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓莉，祁红英，王云鹏，袁志香，史雨琪，张弯弯，颜歆雯，
申请(专利权)人：淮安柴米河农业科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：