一种分辨硃砂烟和普通烟的方法技术

本发明专利技术属于烟草鉴别技术领域，具体公开一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，包括以下步骤：配制缺铁的1/2霍格兰营养液和含铁1/2霍格兰营养液；挑取同时播种下长成幼苗的烟草，取发芽后生长10天或两个月的烟草，进行水培，在正常铁浓度的1/2霍格兰营养液中适应3天，然后进行缺铁水培21天；水培21天后，通过叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟，在缺铁培养下，叶绿素含量较高或叶片表型为深绿色的则为硃砂烟，所用霍格兰营养液配制方便，成本较低；该方法能很好的区分硃砂烟和普通烟草，所培育的烟草，有助于科技工作者对硃砂烟形成的分子机理的研究，以及前期种子的筛选和纯度的鉴定，促进农业生产。促进农业生产。促进农业生产。

【技术实现步骤摘要】
一种分辨硃砂烟和普通烟的方法


[0001]本专利技术属于烟草鉴别
，具体涉及一种分辨硃砂烟和普通烟的方法。

技术介绍

[0002]烟草属管状花目，茄科一年生或有限多年生草本植物。在世界各地均有广泛种植，具有很高的经济价值、食用价值和药用价值。朱砂烟是指充分成熟烟叶烤后外观呈现朱砂斑纹，俗称硃砂烟，国外则称之为樱桃红烟草（Cherry Red），香气突出，风味独特。国外早期从Nicotiana tabacum, L. cv. 401株系中获得了樱桃红和无红的品种。Einosuke Wada 报道了在烟草烤制过程中樱桃红品种烟草的去甲基烟碱含量显著增加，这与红色物质的出现一致，并提出了它们之间的相关性。
[0003]硃砂烟遗传属于表观遗传，烤烟中出现硃砂烟的主要原因是CYP82E4基因受到诱导而发生强烈表达，从而使烤烟中烟碱向去甲基烟碱发生转化。基因主效、环境互作、中上部典型，决定表观性状的基因功能表达，并且是可稳定遗传。根据相关信息综合判断，随着代数增加，硃砂烟烟碱转化率逐步增加，即大部分烟碱转化成去甲基烟碱造成烟碱含量下降。
[0004]在已有云烟97
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硃砂烟与云烟87
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硃砂烟的种子库资源下，为满足各大烟区的推广生产以及烟民需求，便于科学制定硃砂烟的鉴定标准，需要一种快速便捷的鉴别方法，现有技术中如CN201911140582.2 基于烟碱定量转化率和基因表达筛选硃砂烟种子的方法，其工艺复杂，成本高昂，不适用生产过程中的快速鉴定，另有专利CN202010111937.1 一种快速鉴别烤烟硃砂烟叶的方法，其倾向于烟叶采摘至烘烤后进行的进一步鉴定，对前期种子纯度的快速判定并不适用。这两种方法，在实际培育筛选硃砂烟中并不能直接从表型进行区分硃砂烟和普通烟，故而目前需要一种在烟草种植前期快速鉴别硃砂烟的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目前是提供一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，以便于生产的需要，快速分辨硃砂烟和普通烟，在前期对烟草种子的纯度做测定，以保障最终产品的可靠性。
[0006]为实现以上目的，本专利技术主要提供以下技术方案：一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，使用缺铁的1/2霍格兰营养液培育烟草幼苗后，通过叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟。
[0007]进一步地，一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，包括以下步骤：（1）配制缺铁的1/2霍格兰营养液和含铁的1/2霍格兰营养液；（2）挑取同时播种下长成幼苗的烟草，取发芽后生长10天或两个月的烟草，进行水培，在含铁的1/2霍格兰溶液中适应3天，然后用缺铁1/2霍格兰溶液水培21天；（3）水培21天后，通过叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟，在缺铁培养下，叶绿素含量高或叶片表型为深绿色的则为硃砂烟。
[0008]优选的，发芽后生长10天，水培21天后的烟草，采集烟草到三叶，进行叶片表型或
测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟。
[0009]优选的，发芽后生长两个月，水培21天后的烟草，采集顶端第一片真叶进行叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟。
[0010]优选的，所述含铁的1/2霍格兰溶液，其含铁浓度为40μmol/L，霍格兰溶液配制时所加铁盐为乙二胺四乙酸铁钠盐。
[0011]优选的，所述硃砂烟品种来源于云烟87
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硃砂烟的种子库，普通烟的品种为云烟87。
[0012]本专利技术使用缺铁和含铁浓度（40μM）1/2霍格兰营养液水培烟草，21天后通过叶片表型来分辨硃砂烟和普通云87烟草，效果显著，处理方法简单，利于推广，所用霍格兰营养液配制方便，成本较低；该方法能很好的区分硃砂烟和普通烟草，特别是针对现有的云烟87
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硃砂烟种子库，所培育的烟草，有助于科技工作者对硃砂烟形成的分子机理的研究，以及前期种子的筛选和纯度的鉴定，促进农业生产。
[0013]本专利技术使用缺铁1/2霍格兰营养液，并进一步配合培养方法，而使硃砂烟和普通烟的表型出现明显的变化，从而可以快速的对烟草进行鉴定，其成本低廉，操作便捷。
附图说明
[0014]图1是本专利技术用不同铁浓度（0、40、160、320μM）的1/2霍格兰营养液水培生长10天的烟草幼苗，21天后烟草到三叶（从上往下数第三片真叶）表型图；图2是本专利技术不同铁浓度（0、40、160、320μM）的1/2霍格兰营养液水培生长10天的烟草幼苗，21天后烟草叶绿素含量和SPAD值对比图；其中A图为烟草到三叶（从上往下数第三片真叶）的叶绿素含量，B图为烟草到三叶（从上往下数第三片真叶）的SPAD值；图3是本专利技术用不同铁浓度（0、40μM）的1/2霍格兰营养液水培生长2个月的烟草，21天后单株烟草不同位置叶片的表型图；其中A图为单株烟草缺铁处理后不同位置叶片的表型，B图为单株烟草正常铁处理后不同位置叶片的表型；图4是本专利技术用不同铁浓度（0、40μM）的1/2霍格兰营养液水培生长了2个月的烟草，21天后不同位置叶片的SPAD值。
具体实施方式
[0015]下面通过附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术保护范围不局限于所述内容。实施例中方法如无特殊说明，按常规操作进行，如无特殊说明使用试剂均为常规市购试剂或按常规方法配制的试剂，为便于区分，实施例中由云烟87筛选来的硃砂烟统一命名为CR60进行表述，本专利技术配制的霍格兰营养液为经典的配置组方，具体配制方法可参考文献D.R. Hoagland, D.I. Arnon, The Water
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Culture Method for Growing Plants Without Soil, California Agricultural Experimental Station Bulletin 347 (1937)，本专利技术实施例中铁浓度的表述均为简写，其单位为μmol/L。
[0016]实施例1用不同铁浓度（0、40、160、320μM）的1/2霍格兰营养液水培生长10天的烟草幼苗，包括如下步骤：（1）实验材料为烟草；选择发芽后生长10天的烟草幼苗，移到装满铁浓度（40μM）的
霍格兰营养液的水培盒，适应三天后进行不同铁浓度处理，每隔3天换一次霍格兰营养液；（2）21天后观察叶片表型，拍烟草到三叶（从上往下数第三片真叶）照片；图1所示，缺铁时云87叶片比硃砂烟（CR60）叶片颜色更黄，很好区分云87和硃砂烟（CR60）。而在高铁浓度（160、320μM）处理下，云87和硃砂烟（CR60）的叶片颜色没有明显的区别。
[0017]采用实施例1处理后的烟草苗测定烟草的叶绿素含量，包括如下步骤：A、分别在不同铁浓度（0、40、160、320μM）1/2霍格兰营养液处理21天的烟草叶片取样，采集四株烟草到三叶（从上往下数第三片真叶）不同部位，用天平准确称取鲜重0.1g；B、将叶片切成1
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2mm的细丝，加入到2 mL的提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，其特征在于，使用缺铁的1/2霍格兰营养液培育烟草幼苗后，通过叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟。2.根据权利要求1所述的一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制缺铁的1/2霍格兰营养液和含铁的1/2霍格兰营养液；（2）挑取同时播种下长成幼苗的烟草，取发芽后生长10天或两个月的烟草，进行水培，在含铁的1/2霍格兰溶液中适应3天，然后用缺铁1/2霍格兰溶液水培21天；（3）水培21天后，通过叶片表型或测定叶绿素含量和SPAD值来区别硃砂烟和普通烟，在缺铁培养下，叶绿素含量高或叶片表型为深绿色的则为硃砂烟。3.根据权利要求2所述的一种分辨硃砂烟和普通烟的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈奇，刘飞，宋中邦，张学飞，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：