【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化半乳糖氧化酶变体酶
[0001]本申请要求2018年7月9日提交的美国临时专利申请序列号62/695,570和2019年3月22日提交的美国临时专利申请序列号62/822,286的优先权，这两项美国临时专利申请出于所有目的通过引用以其整体并入本文。
专利
[0002]本专利技术提供了工程化半乳糖氧化酶(GO酶)、具有GO酶活性的多肽和编码这些酶的多核苷酸、以及包含这些多核苷酸和多肽的载体和宿主细胞。还提供了用于产生GO酶的方法。本专利技术还提供了包含GO酶的组合物，以及使用工程化GO酶的方法。本专利技术尤其可用于药物化合物和其他化合物的产生。
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Web提交的序列表为说明书的一部分并且通过引用以其整体并...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种工程化半乳糖氧化酶，所述工程化半乳糖氧化酶包含与SEQ ID NO:2、4、166、272、928、932、1264、1416、1598、1866、1912、2080、2300和/或2424具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的多肽序列或其功能片段，其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中包含至少一个取代或取代集，并且其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:2、4、166、272、928、932、1264、1416、1598、1866、1912、2080、2300和/或2424编号。2.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:2具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自331/406/407/465和331/406/465的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:2编号。3.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:4具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：170、171、173、191、192、193、194、197、198、199、202、204、205、220、227、243、247、248、252、269、294、296、324、332、407、463、465、466、493、515、517、520、521和522，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:4编号。4.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:4具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：171、173、188、192、197、199、203、220、223、243、252、294、295、296、332、407、465、466、493、515、517、520和521，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:4编号。5.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:166具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：171/220/243/407/465、171/220/295/296/407、171/220/296/407/520、171/220/332/407、171/220/407、171/220/465/520、171/243/296/332、171/295/296/332/465、171/295/332、171/296/407、171/296/407/465、171/332、171/407、171/407/520、173、173/192/243/465、173/465、192/220/295/296/332/521、192/220/295/520/521、192/220/296/332/520、192/220/407、192/294/465/515、192/295/296、192/295/296/332、192/295/296/520/521、192/296、198/294/296、198/295、198/295/296、204、204/243/465/517/521、220、220/243、220/243/295/296/332/407/521、220/243/295/296/407、220/243/407、220/243/407/465、220/243/407/520/521、220/252/332/407、220/295/296、220/295/296/332、220/295/296/332/407/465/521、220/295/296/332/407/520、220/295/296/332/407/521、220/295/296/407、220/295/296/465/520、220/295/332、220/295/332/465/520/521、220/295/407/465、220/295/407/520/521、220/295/407/521、220/295/465/520、220/295/465/521、220/296、220/296/332/407、220/296/332/407/520/521、220/296/407、220/296/465、220/296/465/521、220/332/407/465/521、220/407、220/
407/520、220/465、220/465/517、220/465/520、221/227/243/465、227、243/295、243/295/407、243/515/517、277/296/407/520/521、284/295/296、294/296/407、294/465、294/465/515、294/521、295/296、295/296/332/407、295/296/407、295/296/407/521、295/296/521、295/332/407/465、295/332/407/521、295/332/520/521、295/407、296、296/332/407/520、296/332/407/521、296/407、296/520/521、332/407、332/407/520/521、332/407/521、407、407/465、407/520、465、465/515、465/515/517/521、465/517/521和517，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:166编号。6.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:272具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：4、8、8/29/92/196/258/426、8/46/92/279/296/426/549/553/597、8/56/192/194/460/571/598、8/56/243/560/598、8/92/258/363/549/553/567、8/192/194/243/460/553/560、8/192/460/560/598、8/258/363/426/553/597、16、16/24/43/56/103/220/295/296/499/549、16/43/56/103/148/220/295/296/499/549、16/43/63/103/295/304/499/549、16/43/63/148/295/499、16/43/103/148/220/295/426/549、16/43/148/220/295/499、16/43/295/296/549、16/43/426/549、16/56/63/148/295/296/304/426、16/56/296、16/56/426/499、16/63/103/220/295/426/549、16/103/220/296/465/549、16/103/220/465、16/148/220/295/296/304/499、16/148/220/295/426/499/549、16/148/220/296/549、16/148/295/426/549、16/220/499、16/295/296/426/499/549、16/295/426/465/499/549、24、24/36、24/36/43/148/319/560/637、24/36/92/148、24/36/92/222/560/637、24/36/92/279/319/363/637、24/36/148/222/279/560/637、24/36/363/465/637、24/43/92/279/363/560/637、24/43/92/279/499、24/43/148/295/560、24/43/148/363、24/43/148/560、24/43/222、24/92/148/279/363、24/92/279/363/465/499/560/637、24/148/319/465/637、24/148/637、24/637、29、29/46/92/196/258/279/363/426/481/567/597、36、36/43/92/148/222/279/295/499/560/637、36/92/148/279/319/363/560/637、36/92/148/499/637、36/92/319/363/637、36/92/560、36/148/222/319/465/499、36/222/279/319/363/560、43、43/56/220/296/426/499/549、43/56/220/426/549、43/92/148/222/279/499/560、43/92/222/465/499/637、43/148/279/295/560、43/148/549、43/222/279、43/295/499、46、46/196/228/279/296/465/553、56、63、92、92/148/295/319/465/637、92/279/465/637、103、134、148、148/295/465、192/243、194、196、196/258/363/426/465/549/597、220、220/295/520、220/295/521、220/296/304/426/549、222、257、258、279、279/560/637、295、296、304、319、363、363/426/481/553、426、465、499、549、553、560、567、597和637，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:272编号。7.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:272具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：4/8/56/598、4/56/192/194/257/571/598、4/56/194/329/598、4/194/243/549/598、8/29/46/196/363/481/549/553、8/56、8/56/192/194/243/329、8/56/192/194/243/329/460/560、8/56/192/194/243/460/560/598、8/
56/192/243/460、8/56/192/243/598、8/56/194/257/460/549/560/598、8/92/196/258/426/597、8/92/196/481/597、8/192/194/243/329/460/560、8/196/258/279/481/549/553、8/243/460/560/571/598、8/257/460/560/598、8/258/363/426/549、8/279/363/426/481/549/553、16/43/63/103/295/296/499、16/43/103/148/295/426/499/549、16/43/103/304/499/549、16/43/148/295/296/304/499/549、16/43/148/296/426/499、16/43/295/296/499、16/56/103/220/295、16/56/103/220/295/296、16/56/103/295/549、16/56/148/295/296/304/426/549、16/56/220/295、16/56/220/499/549、16/56/295、16/56/295/296/549、16/56/295/499、16/56/499/549、16/63/103/148/426/499/549、16/63/103/426/499/549、16/63/148/220/295/296/426/499、16/63/148/499/549、16/103、16/103/148、16/103/148/220/499、16/103/148/295/426/499/549、16/103/220/295、16/148/220/295/426/499、16/148/295/426、16/148/295/549、16/148/426/549、16/220/295/296、16/304/426/499、16/304/499/549、24/36/92/279/295/363/499、24/43/92/148/279/295/319/637、24/43/92/222/279、24/43/222/319、24/43/363/637、24/92、24/92/148/279、24/92/222/279/319/637、24/222/637、24/279/319、29/46/92/196/426/481/549/597、29/46/481/549/553/597、29/426/549、29/549/553、36/43/222/279/363/560、36/92/148/222/279/319/363/499/560/637、36/92/222/637、36/148/279/319/499、43/148/222/279/560/637、43/220/295/549、56/148/220/295/499、56/194/243/257/329/460、56/243、63/103/148/220/295/549、63/220/295/304/426/499/549、63/220/295/304/549、92、92/222/279/499/560/637、92/258/363/426/481/549/597、103/295/499/549、148/220/304、148/222、148/222/560/637、148/279/319/499、194/243/329/460、194/243/329/560/571/598、220/295/549、279/296/481/549/553/567/597、279/560/637、295/296/426/549、295/296/549、295/499/560/637、296/363/426/481/549、319/560、319/637和363/560，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:272编号。8.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:928具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：4/43/46/56/63/279/295/319/567/598、4/43/46/295/319/549/560、4/43/46/426/549/560、4/43/148/196/279/319/363/560、16、16/24/29、16/24/29/92/220/279/597/598、16/24/29/279/549、16/24/29/279/637、16/24/43/92/549、16/24/43/192/220/279/549、16/29/36/192/319/549/597/598/637、16/29/36/279/549、16/29/43/92/192/319、16/29/43/192/222/319/549/637、16/29/43/222/279/549、16/29/92/192/549/637、16/29/92/220/222/319/549/598、16/29/92/279/549、16/29/92/319/549、16/29/92/549/637、16/29/192/220/549、16/29/192/220/549/597、16/29/192/222/279/549、16/29/192/222/637、16/29/192/549、16/29/220/222/279/549/637、16/29/220/222/597/598、16/29/222/549/598/637、16/29/549/637、16/36/43/192/597/637、16/36/92/220/222/279/549、16/36/192/549/597/598/637、16/36/319/549/597/598/637、16/43/56/192/549/597/598/637、16/43/92/222/597/598、16/43/192/549、16/43/220/549/637、16/43/279/319/597、16/43/279/549/597、16/43/319/549/598、16/43/597、16/92/192/279/319/549/637、16/92/192/279/637、16/92/220/549、16/92/319/597/637、16/
192/319/549/637、16/192/549、16/220/222/279/549/598/637、16/220/279/549、16/220/319/549/597/598、16/222/319/597/598、16/222/637、16/279/319/549/597/637、16/279/549/597/598/637、16/279/597、16/319/597、16/319/597/598、16/549、16/549/598、16/597、29/63/134/520/597/598、29/63/520/537/538/598、29/134/237/537/538/567/571、29/237/520、29/237/520/538、29/237/567/598、29/237/597、29/597/598、36/92/549、36/134/237/520/537/538/571、36/134/237/567/571/597/598、36/520/537/538/597、43/46/56/148/258/279/363/549/571、43/46/63/258/295/426/560/567/571、43/46/196/319/549/560/567、43/279/549/560/567、46/295/319/426、46/560、95、134/237/520/597、134/520/597/598、220/222/597/637、220/296/407/465、224、237/520、237/520/537/538/598、237/520/537/598、237/520/538/597、237/520/567/571/597、237/520/597/598、237/538/597/598、237/571、237/597/598、279/319/560、294、295/549/560、343、433、465、483、486、520/571/598、520/597/598、549/598、556、564、567/571/597、568和609，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:928编号。9.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:928具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：4/43/46/426/549/560、36/63/520、95、394、483、520/597、556、562、568和598，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:928编号。10.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:928具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：63/196、173、189、194、196、197、198、198/447、220/294/296/332、220/294/465、290、292、294/407/465、327、407/465和638，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:928编号。11.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:932具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：16/43/220/258/538/637、16/258/426/465/538/549/637、18、24/222/237/520/538、24/222/520、43/222/237/258/426/597、43/258/407/426/465/538/549/637、63、63/95/173/343/564/568/609、95/173/258/426/556/564、95/173/556/609、173/556、194、220/294/295/319/407/426/465/538/549/637、222/237、222/520/597、237/258/549/597、237/265/279、258/267、258/319/426/465/549/637、258/426和258/538/549/637，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:932编号。12.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:1264具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：18/95/327/548、28、36、43、43/
46/56/63/191、43/237/279/538/597/598、43/237/294/538、43/237/520、43/237/520/549/598、43/237/520/597、43/279/294、43/538、43/549/597、51/55/111/150/367/564、55、61、95/327/548、99、183、198、224、229、237/520/538/597、243、252、258、291、295、312、335、342、343、367/371/564/594、371、384、468、485、520、544、549、564/604、567、568、570、594、596、604、635和637，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:1264编号。13.根据权利要求1所述的工程化半乳糖氧化酶，其中所述多肽序列与SEQ ID NO:1264具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性，并且其中所述工程化半乳糖氧化酶在所述多肽序列中选自以下的一个或更多个位置处包含至少一个取代或取代集：28、28/99/520/637、55/295、55/342、55/568、55/568/594、55/568/637、61/224/343/520/637、99/343/637、99/520/637、99/637、224/520/637、295/342、295/342/568、342/568、342/594、343/520/637、403/520/637、520/637、568/637、594和637，其中所述多肽序列的氨基酸位置参照SEQ ID NO:1264编号。14.根据权利要求1所述的...
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