一种重组角蛋白分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种重组角蛋白分离纯化方法，包括如下步骤：1)将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后进行离心收集上清液，最后对上清液进行过滤得到含有重组角蛋白的滤液；2)采用Ni亲和层析柱对步骤1)中得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；3)采用阴离子层析柱对步骤2)得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液。本发明专利技术为重组角蛋白提供了一种有效的分离纯化方法，过程简单，且不会对重组角蛋白结构造成破坏，分离纯化效率高，重组角蛋白的分离纯度能够达到90％

【技术实现步骤摘要】
一种重组角蛋白分离纯化方法


[0001]本专利技术涉及角蛋白分离
，尤其是涉及一种重组角蛋白分离纯化方法。

技术介绍

[0002]角蛋白是一类具有缔结和保护功能的纤维状动物蛋白质，是外胚层细胞的结构蛋白，广泛存在于动物的毛发、羽毛和蹄中；由于角蛋白具有良好的生物活性高和组织相容性，能够起到消炎、止血、神经修复、减少创面渗出和促进创伤组织再生，修复、愈合的作用；由于角蛋白具有高抗性的理化性质和特殊的生物学作用，再加上现有的角蛋白分离需要复杂的化学工艺才能实现，并且分离过程中容易造成角蛋白结构的破坏，分离的效率也较低，分离得到得角蛋白的纯度较低；由于上述限制使得角蛋白目前只在化妆品领域应用较为广泛；无法在对角蛋白纯度要求更高的医疗产品领域内使用。
[0003]现在市场上为了避免从动物中提取角蛋白的提取工艺对角蛋白造成的各种不利的影响，现在市场上逐步开始研究重组角蛋白，然后通过将重组的角蛋白在大肠杆菌中表达和培养；但是现在还没有针对就重组角蛋白进行分离纯化的方法。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的缺陷，本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，再进行离心收集上清液，最后对上清液进行过滤得到含有重组角蛋白的滤液；2)采用Ni亲和层析柱对步骤1)中得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；3)采用阴离子层析柱对步骤2)得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液。2.根据权利要求1所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中溶解菌泥的缓冲液为5
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100mM PB缓冲液或者Tris pH7.0。3.根据权利要求1或2所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中高压匀浆的压力为800～2000Bar，高压匀浆3～5次。4.根据权利要求3所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中采用冷冻高速离心机收集上清液，所述冷冻高速离心机的分离转速为8000～12000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。5.根据权利要求1或4任一所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤1)中采用0.22um中空纤维或者滤膜过滤上清液。6.根据权利要求5所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤2)的具体操作为：取装有Ni亲和层析介质的层析柱，用纯水处理层析柱后，用平衡缓冲液平衡层析柱后上样，再用清洗缓冲液清洗杂质，用洗脱缓冲液进行洗脱，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；最后用0.5M NaOH溶液清洗结合能力强的杂质，用20％乙醇保存层析柱。7.根据权利要求6所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤3)的具体操作为：取装有阴离子层析介质的层析柱，用纯水处理层析柱，之后用平衡缓冲液平衡层析柱后上样，再用清洗缓冲液清洗杂质，最后用洗脱缓冲液进行洗脱，收集含有重组角蛋白的洗脱缓冲液；用0.5M NaOH溶液清洗结合能力强的杂质，用20％乙醇保存层析柱。8.根据权利要求6所述的重组角蛋白分离纯化方法，其特征在于，所述步骤2)中Ni亲和层析柱中的介质为Ni SMart Beads 6FF、Ni NTA Beads 6FF、Ni
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【专利技术属性】
技术研发人员：查国栋，余钡，
申请(专利权)人：海默斯重庆医学生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：