一种抗氧化效能的检测方法技术

本发明专利技术公开一种抗氧化效能的检测方法。所述方法包括荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量。述方法包括荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量。

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化效能的检测方法


[0001]本专利技术属于化妆品
，特别涉及到类胡萝卜素作为抗氧化指标，荧光光谱在体检测产品的抗氧化性能的方法。

技术介绍

[0002]皮肤氧化损伤会导致皮肤产生过多的自由基，而这些自由基会攻击肌肤细胞，引起肌体老化、肌肤衰老以及免疫力下降，造成胶原和弹性纤维松弛，表皮细胞新生减缓、脸色暗沉，水分大量流失等。
[0003]目前对于抗氧化剂的评价方法主要分为体外和体内两类。体外评估方法主要包括DPPH、超氧、羟基自由基等自由基清除试验，体外模拟生成活性氧自由基，易受溶剂体系的影响，与机体的细胞水平的自由基有很大差距，无法考虑到抗氧化样品的吸收，代谢和药效等因素。体内抗氧化评估主要通过检测抗氧化物质(如抗氧化物歧化酶(SOD)、ROS水平等)对动物模型相关抗氧化指标的影响，以反映其抗氧化作用的强弱。动物损伤模型的评价方法也存在缺点，诱导剂对动物组织损伤使其发生氧化应激反应，然后给药(抗氧化物质)，检测到氧化损伤相应的指标改善时，不一定抗氧化应激就是其作用机制，也有可能是药物的其他作用减轻或缓解了诱导剂对机体的伤害，进而减弱或消除了组织氧化应激损伤的现象。
[0004]类胡萝卜素是皮肤主要的抗氧化系统之一，是具有8个异戊二烯共轭双键基本单位组成多烯链化合物，主要包括胡萝卜素和叶黄素两大类，最大吸收峰通常在450～570nm之间。人体自身不能合成类胡萝卜素，血液和皮肤中的类胡萝卜素主要来自于水果和食物的摄入，人每天从食物和水果中摄入的类胡萝卜素约为6mg。皮肤中的类胡萝卜素主要有叶黄素、玉米黄质、β
‑
隐黄质、β
‑
胡萝卜素、番茄红素及茄红素，正常生理状态下，它们的含量主要在0
–
10nmol/g。据文献报道，日常连续摄入含类胡萝卜素较多的食物和水果(如；胡萝卜、西兰花、西红柿等)，人体内的类胡萝卜素的含量会相应升高。
[0005]类胡萝素在对抗氧化应激反应方面发挥着重要作用，尤其是β
‑
胡萝卜素、叶黄素和番茄红素，其抗氧化活性的主要机制是：(1)通过淬灭单线态氧和消除自由基；(2)淬灭自由基阻断自氧化的链式反应，防止自由基对蛋白质、脂质、DNA的过氧化损伤；(3)通过电子转移的方式来清除自由基；(4)可以与自由基发生加成反应，形成类胡萝卜素加合自由基。
[0006]目前针对类胡萝卜素的测试方法主要有HPLC法和光学检测法，光学检测法包括共振拉曼光谱法(RRS法)和反射光谱法(RS法)。
[0007]HPLC法主要测试血液或其他组织中的类胡萝卜素含量，需要活检和合适的提取方法，除了志愿者的不适，这是一种耗时的方法，也可能会导致类胡萝卜素的氧化损失。因此，它不适合高通量分析和人体皮肤类胡萝卜素水平变化的动力学分析。
[0008]RRS法是一种激光光谱学方法，用于检测分子的振动/旋转能级。典型的类胡萝卜素RRS谱主要有三个强而清晰的斯托克斯峰，分别为1525cm
‑
1(C＝C拉伸)、1159cm
‑
1(C
‑
C拉伸)和1008cm
‑
1(C
‑
CH3摇摆运动)，可以此来定量检测类胡萝卜素的含量。RRS法具有高分子
特异性、快速、高灵敏性，可选择性检测胡萝卜素和番茄红素，已被应用于营养科学、医学研究等领域中，但该法也存在一定的缺点，如响应信号较弱、仪器设备复杂、需要外部的灵敏度校准，在测试皮肤中类胡萝卜素量时易受黑色素影响。
[0009]RS法主要用相同的紫外
‑
可见光谱去测量β
‑
胡萝卜素和几乎所有的类胡萝卜素(除了α
‑
胡萝卜素、叶黄素、β
‑
隐黄质和番茄红素)，主要采用Multiscan OS 20分光光度计和全硅光纤反射束进行无损伤收集350～850nm范围内反射光谱，一般采用二氧化钛作为空白参考标准。RS法具有信号强度高、快速、仪器设备简单、自我校准的优势，但相对于RRS法其灵敏度和特异性较低，在皮肤中应用时也需要克服皮肤的光学特性(自发荧光、皮肤水合、汗液和皮脂生成)干扰及其他有色分子干扰，如黑色素、血红蛋白、氧血红蛋白及胆红素等。
[0010]因此，本领域迫切需要提供一种适用于抗氧化剂的在体评价的操作简单、灵敏且可靠的方法。

技术实现思路

[0011]本专利技术旨在提供一种在体抗氧化能力的检测方法。
[0012]本专利技术提供一种抗氧化效能的检测方法，所述方法包括荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量。
[0013]在另一实施方式中，所述方法包括在对皮肤进行紫外光照射前后荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量的变化。
[0014]在另一实施方式中，所述方法包括步骤：
[0015](1)使皮肤的空白区域和样品区域分别进行荧光检测，得到相应的类胡萝卜素荧光强度H0空白和HO样品；
[0016](2)使步骤(1)中的皮肤的空白区域和样品区域分别进行紫外光照射；
[0017](3)使步骤(2)中经过紫外光照射的皮肤的空白区域和样品区域分别进行荧光检测，得到相应的类胡萝卜素荧光强度H1空白和H1样品；和
[0018](4)根据公式Ⅰ计算样品相对于空白的抗氧化效能：
[0019]抗氧化效能＝AC＝((H0
空白
‑
H1
空白
)
平均值
‑
(H0
样品
‑
H1
样品
)
平均值
)/(H0
空白
‑
H1
空白
)
平均值
*100％＝[1
‑
(H0
样品
‑
H1
样品
)
平均值
/(H0
空白
‑
H1
空白
)
平均值
]*100％(Ⅰ)。
[0020]在另一实施方式中，步骤(1)在使用样品10
‑
60分钟后进行荧光检测；较佳地，步骤(1)在使用样品30
‑
60分钟后进行荧光检测。
[0021]在另一实施方式中，步骤(3)在步骤(2)紫外光照射结束后0
‑
30分钟内进行；较佳地，步骤(3)在步骤(2)紫外光照射结束后0
‑
10分钟内进行。
[0022]在另一实施方式中，所述紫外照射剂量为60
‑
80mJ/cm2。
[0023]在另一实施方式中，所述荧光强度为激发光350nm，发射光450
±
4nm处的荧光强度。
[0024]据此，本专利技术提供了一种适用于抗氧化剂的在体评价的操作简单、灵敏且可靠的方法。
附图说明
[0025]图1显示实施例中涉及的手臂前臂内侧测试区域(方款内为测试区域)。
具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化效能的检测方法，其特征在于，所述方法包括荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括在对皮肤进行紫外光照射前后荧光检测皮肤中类胡萝卜素的量的变化。3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)使皮肤的空白区域和样品区域分别进行荧光检测，得到相应的类胡萝卜素荧光强度H0空白和HO样品；(2)使步骤(1)中的皮肤的空白区域和样品区域分别进行紫外光照射；(3)使步骤(2)中经过紫外光照射的皮肤的空白区域和样品区域分别进行荧光检测，得到相应的类胡萝卜素荧光强度H1空白和H1样品；(4)根据公式Ⅰ计算样品相对于空白的抗氧化效能：抗氧化效能＝AC＝((H0
空白
‑
H1
空白
)
平均值
‑
(H0
样品
‑
H1
样品
)
平均值
)/(H0
空白
‑
H1
空白
)
平均值
*100％＝[1
‑
(H0...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋姣，张文娟，秦燕，鲁楠，朱旗扬，
申请(专利权)人：上海百雀羚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：