改进的尿酸酶及其用于治疗高尿酸血症的方法技术

提供了改进的尿酸酶及其治疗高尿酸血症的方法以及相应的药物组合物。该改进的尿酸酶包含与SEQ ID NO：1具有至少约90％的一致性的氨基酸序列，且所述序列不是SEQ ID NO：1。1。

【技术实现步骤摘要】
改进的尿酸酶及其用于治疗高尿酸血症的方法


[0001]本专利技术涉及改进的尿酸酶和/或PEG-尿酸酶，及其用于治疗高尿酸血症的方法。

技术介绍

[0002]痛风和高尿酸血症是目前危害人类健康的常见疾病，据统计高尿酸血症的发病率已经达到了人群的10％。痛风是由于血尿酸水平过高而造成尿酸盐结晶在关节中沉淀而导致的一种急性关节炎。一方面，是随着人们饮食和生活习惯的变化，高蛋白和高嘌呤食物的摄取增加，痛风患者的数量逐年增加；另一方面，某些恶性肿瘤，特别是白血病和淋巴瘤患者放化疗之后，在短期内将有大量的尿酸沉积于肾脏而引起的剂型肾功能衰竭。近几十年来，有很多科学家致力于将其他种属来源的尿酸酶用于人类高尿酸血症相关疾病的治疗。但是，异种蛋白应用于人体内最大的问题之一就是蛋白的免疫原性引起的抗蛋白反应和变态性反应。后来科学家采用乙二醇(PEG)对蛋白进行共价修饰，证明能够降低蛋白免疫原性，增加蛋白溶解度并延长蛋白的半衰期。
[0003]目前临床上批准的尿酸酶类药物有两种，其一是Krystexxa，另一个是Elitek。Krystexxa(聚乙二醇重组尿酸酶(pegloticase))是经批准的用于治疗常规疗法难治的成人患者的慢性痛风的聚乙二醇化尿酸酶，其是高聚乙二醇化的猪和狒狒尿酸酶序列的嵌合蛋白，可通过静脉内注射在2小时内给药完毕。Krystexxa含有针对过敏性反应和输液反应的黑框警告。而Elitek(拉布立酶)是被指示用于初始管理患有白血病、淋巴瘤和实体瘤恶性肿瘤的儿童和成人患者的血浆尿酸水平的修饰的重组黄曲霉尿酸酶，这些患者接受预期导致肿瘤溶解和血浆尿酸随后升高的抗癌治疗。但是Elitek在体内具有16-21小时的半衰期，并且必须经由静脉输注每天给药。同样的，Elitek也具有针对过敏性反应和溶血的黑框警告。
[0004]鉴于以上情况，本领域迫切需要开发用于治疗高尿酸血症的更安全、更方便、且具有更低免疫原性的药物。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术中尿酸酶类药物已知的副作用，获得更加安全、方便和具有更低免疫原性的尿酸酶类药物，进行本专利技术所述技术方案的研究。
[0006]本专利技术一方面提供了改进的尿酸酶序列，所述的尿酸酶包含与SEQ ID NO：1至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性的氨基酸序列，且所述序列不是SEQ ID NO：1。
[0007]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差约1个至约20个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸)。
[0008]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差19个氨基酸。
[0009]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差18个氨基酸。
[0010]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差17个氨基酸。
[0011]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差16个氨基酸。
[0012]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差15个氨基酸。
[0013]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差14个氨基酸。
[0014]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差13个氨基酸。
[0015]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差12个氨基酸。
[0016]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差11个氨基酸。
[0017]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差10个氨基酸。
[0018]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差9个氨基酸。
[0019]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差8个氨基酸。
[0020]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差7个氨基酸。
[0021]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差6个氨基酸。
[0022]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差5个氨基酸。
[0023]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差4个氨基酸。
[0024]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差3个氨基酸。
[0025]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差2个氨基酸。
[0026]在一些实施方式中，该尿酸酶与SEQ ID NO：1相差1个氨基酸。
[0027]在一些实施方式中，该尿酸酶可以因在氨基酸序列中包含添加、缺失或取代一个或多个氨基酸残基而与SEQ ID NO：1不同。
[0028]在一些实施方式中，该尿酸酶为在N-末端和/或C-末端处被截短的SEQ ID NO:1的片段，其中该片段保留了酶活性。
[0029]在一些实施方式中，该SEQ ID NO:1的片段为N-末端截短了约1-17个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)的片段。
[0030]在一些优选的实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N-末端截短了17个氨基酸的序列。
[0031]在一些实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N-末端截短约1-17个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)，并且替换成约1-8个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8)的序列。
[0032]在一些优选的实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N-末端截短了17个氨基酸，并且替换成约1-8个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8)的序列。
[0033]在一些优选的实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N-末端截短了17个氨基酸，并且替换成8个氨基酸的序列。
[0034]在一些具体的实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N-末端截短了17个氨基酸(MTATAETSTGTKVVLGQ)，并且替换成M(T/A)NIILGK氨基酸的序列。
[0035]在一些实施方式中，该尿酸酶为在SEQ ID NO：1的C-末端截短约1-5个氨基酸(例如，约1、2、3、4或5)的序列。
[0036]在一些优选的实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的C-末端截短了5个氨基酸的序列。
[0037]在一些实施方式中，该尿酸酶的序列为SEQ ID NO：1的N末端截短了约1-17个氨基酸(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17)，且C-末端截短了约1-5个氨
基酸(例如，约1、2、3、4或5)的序列。
[0038]在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿酸酶，包含与SEQ ID NO：1具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性的氨基酸序列，且所述序列不是SEQ ID NO：1。2.如权利要求1所述的尿酸酶，其特征在于，与SEQ ID NO:1的序列相比，所述尿酸酶的氨基酸序列中包含一个或多个氨基酸残基的添加、缺失或取代。3.如权利要求2所述的尿酸酶，其特征在于，所述尿酸酶为在N-末端和/或C-末端处被截短的SEQ ID NO:1的片段，其中该片段保留了酶活性。4.如权利要求3所述的尿酸酶，其特征在于，所述截短为N末端17个以内的氨基酸残基的截短，和/或C末端5个以内的氨基酸残基的截短；任选地，N末端截短后，添加了8个以内的氨基酸残基。5.如权利要求4所述的尿酸酶，其特征在于，所述N末端截短为截短了17个氨基酸，即MTATAETSTGTKVVLGQ；所述添加为添加了M(T/A)NIILGK氨基酸序列。6.如权利要求1所述的尿酸酶，其特征在于，与SEQ ID NO:1相比，所述尿酸酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:1第175、178和258位置的至少一个位置上具有取代突变。7.如权利要求6所述的尿酸酶，其特征在于，第175位上取代后的氨基酸残基为脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或蛋氨酸；第178位上取代后的氨基酸残基是谷氨酸或天冬氨酸；第258位上取代后的氨基酸残基是丝氨酸、谷氨酸、苏氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺。8.如权利要求1-7所述的尿酸酶，其特征在于，所述尿酸酶序列中经突变引入1-6个表面可及的半胱氨酸残基，并任选的在第205和/或第208位上的取代突变，其中位置编号是相对于SEQ ID NO：1。9.如权利要求8所述的尿酸酶，其特征在于，所述尿酸酶在以下位置中的至少一个中包含半胱氨酸：35、82、142、194、2...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄国锋，赵朋，陈思，李铁，李瑞胜，张静，周岳华，刘洪川，姚盛，
申请(专利权)人：苏州君盟生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：