血小板模拟粒子及其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物技术

一种制备血小板模拟粒子的方法，其中使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理，以制成能结合荧光染料的血小板模拟粒子。该方法能使血小板模拟粒子与荧光染料分子简单、有效地结合。还涉及另一种制备血小板模拟粒子的方法，其中使用单宁酸和醛类对动物红细胞进行固定处理，以制成血小板模拟粒子。该方法能提高血小板模拟粒子的稳定性。此外还涉及按照该方法制备的血小板模拟粒子及含有该血小板模拟粒子的质控物或校准物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血小板模拟粒子及其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物
本专利技术涉及血液质控校准物领域，尤其是涉及血小板模拟粒子及其制备方法以及包含该血小板模拟粒子的质控物或校准物。
技术介绍
血细胞分析仪用于对血液样品中存在的不同类型细胞(诸如血小板、白细胞、红细胞和网织红细胞等)进行检测分析，其检测分析功能是依据每一种类型细胞的电学和/或光学性质来实现的。为保证分析结果的准确性和精确性，需要定期用血液质控物对血细胞分析仪进行日常监控。血液质控物是一种含有单一组分或多组分血细胞或血细胞模拟粒子的液体，具备如同血液一样的可检测特性。在血液质控物所包含的各类血细胞模拟粒子中，血小板模拟粒子的制备所面临的问题比较多。在以人源血小板为原材料制备血小板模拟粒子的方法中，通过使用聚乙二醇(缩写PEG)增强血小板稳定性，但是该制备方法的缺点在于：1)当血小板悬浮于悬液并离开血管时会发生破裂，从而引起促凝血酶原激酶的释放并导致凝血；2)该方法所制备的血小板模拟粒子易活化进而引发聚集效应，导致质控品失效；3)人血小板提取的困难且低效；4)人源血小板商业来源价格昂贵。此外，已经开发了采用动物红细胞来制备血小板模拟粒子的方法，例如，US4179398A和US5008201A中使用山羊红细胞来制备血小板模拟粒子，CN1891230A中使用鹰隼血液来制备血小板模拟粒子等。在使用动物红细胞制备血小板模拟粒子的方法中，如果要使动物红细胞能够与荧光染料结合从而产生荧光信号，由于动物红细胞核酸含量很低而需要对动物红细胞进行处理以使其表现出由核酸所带来的荧光方向上的展出。目前已提出了以下方法：1)采用与荧光染料产生特异性结合的物质对动物红细胞进行处理，例如向动物红细胞内注入核酸，以使其表现出由核酸带来的荧光方向上的展出，但是该方法成本较高且实现难度大；2)预先使用特定的荧光染料、例如N-羟基琥珀酰亚胺活化的蛋白荧光染料对动物红细胞进行染色处理，使经染色处理的动物红细胞在检测通道中产生荧光信号，但是该方法对该荧光染料有较高的要求，需要预先进行复杂的活化步骤。因此，亟需一种操作简便的血小板模拟粒子制备方法，该方法所制备的血小板模拟粒子可以实现在荧光方向上的良好展出。另一方面，在使用动物红细胞来制备血小板模拟粒子的方法中，通常使用甲醛与戊二醛混合溶液对模拟粒子进行固定处理。然而，该方法所获得血小板模拟粒子与真实的人血小板粒子差距较大且易与旁伴噪声及红细胞模拟粒子碎片在散点图上混合，对计数准确性及质控物稳定性产生影响。此外，现有的血小板模拟粒子由于上述固定方式强度过大而导致难以被白细胞分群溶血剂完全溶解，使得在白细胞分群通道中产生的信号过大，致使白细胞分群通道所产生的计数粒子数剧烈增大，采样时间缩短，进而影响了白细胞分群测量结果的准确性。因此，亟需一种血小板模拟粒子的制备方法，该方法制备的血小板模拟粒子具有良好的稳定性及合适的固定强度。
技术实现思路
因此，为了解决上述问题，本专利技术提供了新的制备血小板模拟粒子的方法、由该方法制备的血小板模拟粒子以及包含该血小板模拟粒子的质控物或校准物。为此，在第一方面，本专利技术提供了一种制备血小板模拟粒子的方法，其中，使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理，以制成能结合荧光染料的血小板模拟粒子。所述动物红细胞的体积大小优选可以为2fL至25fL。本专利技术通过使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理，使得经修饰处理的动物红细胞能够与血细胞分析仪中的荧光染料分子简单、有效地结合，因此，由经三氟甲基类化合物修饰处理的动物红细胞所制成的血小板模拟粒子能够在网织红通道(也称为RET通道)中产生与真实的人血小板相近的荧光信号。与现有技术相比，用于修饰处理的三氟甲基类化合物容易获得、成本低廉，而且使用三氟甲基类化合物进行修饰处理的操作简单。在一些的实施方式中，本专利技术的三氟甲基类化合物为被至少一个三氟甲基取代的醛和/或被至少一个三氟甲基取代的酸。在具体的实施方式中，被至少一个三氟甲基取代的醛的结构如式I所示：R1-CHO(I)；被至少一个三氟甲基取代的酸的结构如式II所示：R2-COOH(II)；其中，R1和R2各自为H、C1-C4烷基、C6-C10芳基、C7-C10苯烷基和C7-C10烷基苯基。在一些实施方式中，本专利技术的三氟甲基类化合物可以选自以下项组成的组中一种或更多种：对三氟甲基苯甲醛、2,4-二三氟甲基苯甲醛、对三氟甲基苯甲酸、三氟乙酸和三氟乙醛。在具体的实施方式中，本专利技术所使用的三氟甲基类化合物的反应浓度可以约为0.1v/v％～1v/v％、优选可以约为0.2v/v％～0.6v/v％，例如可以约为0.25v/v％或0.5v/v％。在具体的实施方式中，使用三氟甲基类化合物进行修饰处理的时长可约为5min～40min、优选约为15min～30min。进一步地，按照本专利技术的第一方面的制备血小板模拟粒子的方法可以进一步包括：使用固定剂对动物红细胞进行固定处理。在此，对于所述固定处理与所述修饰处理的顺序没有特别的限制。例如，可以先对动物红细胞进行固定处理，再使用三氟甲基类化合物对经固定的动物红细胞进行修饰处理；或者，可以在使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理之后，再对经修饰的动物红细胞进行固定处理。根据本专利技术的第一方面，对于固定剂的种类没有特别的限制，任何用于固定血小板模拟粒子的常见固定剂都可以使用。示例性固定剂例如可以是选自以下项组成的组中一种或多种固定剂：多聚甲醛、甲醛、丙烯醛、丙二醛、戊二醛、己二醛、甲醇、乙醇和乙酸。在有利的实施方式中，可以使用醛类固定剂对动物红细胞进行固定处理，例如多聚甲醛、甲醛、丙烯醛、丙二醛、戊二醛和己二醛中的一种或更多种。优选的，所述醛类固定剂包括戊二醛。根据本专利技术的第一方面，对于固定剂的浓度没有特别的限制，只要能够实现常规的固定效果即可。更进一步地，当使用醛类对动物红细胞进行固定处理时，本专利技术的制备血小板模拟粒子的方法还可以包括使用单宁酸(也称为单宁)对动物细胞进行固定处理。在此情况下，与单独使用醛类固定相比，通过该实施方式所制备的血小板模拟粒子能够在较强溶血能力试剂(DIFF通道的溶血剂)作用下溶血，而在较弱溶血能力试剂(RET通道稀释液)作用下稳定，并且具有较好的保存稳定性。对于醛类和单宁酸在固定处理时的使用顺序，本专利技术没有特别的限制。例如，可以先使用单宁酸对动物红细胞进行固定处理，再使用醛类化合物对动物红细胞进行固定处理；或者，在使用醛类对动物红细胞进行固定处理之后，再使用单宁酸对动物红细胞进行固定处理。在本专利技术的有利实施方式中，本专利技术的醛类的反应浓度可以约为0.0075v/v％～0.025v/v％、优选可以约为0.01v/v％～0.0125v/v％。例如，本专利技术所使用的醛类的反应浓度可以约为0.0075v/v％、0.01v本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备血小板模拟粒子的方法，其中，使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理，以制成能结合荧光染料的血小板模拟粒子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种制备血小板模拟粒子的方法，其中，使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理，以制成能结合荧光染料的血小板模拟粒子。


根据权利要求1所述的方法，其中，所述三氟甲基类化合物为被至少一个三氟甲基取代的醛和/或被至少一个三氟甲基取代的酸。


根据权利要求2所述的方法，其中，被至少一个三氟甲基取代的醛的结构如式I所示：
R
1-CHO(I)；

被至少一个三氟甲基取代的酸的结构如式II所示：
R
2-COOH(II)；

其中，R
1和R
2各自为H、C
1-C
4烷基、C
6-C
10芳基、C
7-C
10苯烷基和C
7-C
10烷基苯基。



根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述三氟甲基类化合物选自对三氟甲基苯甲醛、2,4-二三氟甲基苯甲醛、对三氟甲基苯甲酸、三氟乙酸和三氟乙醛所组成的组。


根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，在使用三氟甲基类化合物对动物红细胞进行修饰处理之前或之后，使用固定剂对所述动物红细胞进行固定处理。


根据权利要求5所述的方法，其中，所述使用固定剂对所述动物红细胞进行固定处理的步骤包括：使用醛类对所述动物红细胞进行固定处理；
优选地，所述醛类选自由以下项所组成的组中的一种或多种：多聚甲醛、甲醛、丙烯醛、丙二醛、戊二醛和己二醛，所述醛类尤其包括戊二醛；
优选地，所述醛类的反应浓度为0.0075v/v％～0.025v/v％、优选为0.01v/v％～0.0125v/v％。


根据权利要求6所述的方法，其中，所述使用固定剂对所述动物红细胞进行固定处理的步骤还包括：使用单宁酸对所述动物红细胞进行固定处理；
优选地，所述单宁酸的反应浓度为5mg/L～75mg/L、优选为15mg/L～37.5mg/L、更优选为15mg/L～25mg/L。


一种制备血小板模拟粒子的方法，其中，使用单宁酸和醛类对动物红细胞进行固定处理，以制成血小板模拟粒子。


根据权利要求8所述的方法，其中，所述醛类选自由以下项所组成的组中的一种或多种：多聚甲醛、甲醛、丙烯醛、丙二醛、戊二醛和己二醛，所述醛类尤其是包括戊二醛；
优选地，所述醛类的反应浓度为0.0075v/v％～0.025v/v％、优选为0.01v/v％～0.0125v/v％。


根据权利要求8或9所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙思祥，谢键，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44