【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】灭菌的层析树脂及其在制造工艺中的用途【相关申请的交叉引用】本申请要求2018年8月31日提交的美国临时专利申请序列号62/726,043的优先权；其全部内容通过引用并入本文中。
本专利技术涉及重组蛋白的生物技术和生物制造的方法。
技术介绍
通常使用包括编码重组蛋白的核酸的哺乳动物细胞来生产治疗上或商业上重要的蛋白质。在当前不同产品管线的环境中，生物技术公司越来越多地致力于开发创新的解决方案来高度灵活且成本有效地制造治疗性蛋白药物。有效分离重组蛋白的策略之一是通过包括连续层析(例如，使用封闭系统)的方法进行。连续层析的一个已知限制是系统中存在污染物(例如，增加的生物负载)，这导致系统中产物被污染的、产率降低、以及流速降低(或压力增加)。例如，系统内增加的生物负载可能导致系统完全停工。
技术实现思路
本专利技术至少部分地基于以下发现：γ-照射层析树脂降低了层析树脂的结合能力，并且在至少一种醇存在下照射可以有助于防止这种由γ-照射引起的层析树脂结合能力的降低。鉴于这个发现，本文提供了...
【技术保护点】
1.一种减少层析树脂的生物负载的方法，所述方法包括：/n将包含含有(i)层析树脂和(ii)含至少一种醇的液体的组合物的容器暴露于足以减少所述容器和所述层析树脂的生物负载的剂量的γ-照射，其中所述至少一种醇的存在量足以改善所述层析树脂在暴露于所述剂量的γ-照射之后结合能力的损失。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180831 US 62/726,0431.一种减少层析树脂的生物负载的方法，所述方法包括：
将包含含有(i)层析树脂和(ii)含至少一种醇的液体的组合物的容器暴露于足以减少所述容器和所述层析树脂的生物负载的剂量的γ-照射，其中所述至少一种醇的存在量足以改善所述层析树脂在暴露于所述剂量的γ-照射之后结合能力的损失。
2.如权利要求1的方法，所述方法还包括在暴露之前将所述组合物布置于所述容器中。
3.如权利要求1的方法，其中所述容器是储存器皿。
4.如权利要求1的方法，其中所述容器是层析柱。
5.如权利要求1的方法，其中所述容器是填充层析柱。
6.如权利要求1的方法，其中所述组合物是沉降的层析树脂的浆液。
7.如权利要求1的方法，其中所述组合物是润湿的固体混合物。
8.如权利要求1-7中任一项的方法，其中所述至少一种醇选自：苯甲醇、环己醇、异丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
9.如权利要求8的方法，其中所述至少一种醇包括苯甲醇。
10.如权利要求1-9中任一项的方法，其中所述液体中一种或多种醇的总和浓度为约0.01v/v％至约10v/v％。
11.如权利要求1-10中任一项的方法，其中所述液体还包含至少一种抗氧化剂和/或螯合剂。
12.如权利要求11的方法，其中所述液体包含至少一种抗氧化剂和/或螯合剂，其量足以改善所述层析树脂在暴露于所述剂量的γ-照射之后结合能力的损失。
13.如权利要求11或12的方法，其中所述液体包含至少一种选自以下的抗氧化剂：还原型谷胱甘肽、还原型硫氧还蛋白、还原型半胱氨酸、类胡萝卜素、褪黑激素、西红柿红素、生育酚、还原型泛醌、抗坏血酸、胆红素、尿酸、硫辛酸、类黄酮、酚丙酸、利多卡因、柚皮素、富勒烯、葡萄糖、甘露糖醇、4-羟基-2,2,6,6-四甲基呱啶-1-氧基和二甲基甲氧基色原烷醇。
14.如权利要求13的方法，其中所述液体包含至少一种选自以下的抗氧化剂：甘露糖醇、抗坏血酸钠、组氨酸和甲硫氨酸。
15.如权利要求14的方法，其中所述液体包含甘露糖醇、抗坏血酸钠、组氨酸和甲硫氨酸。
16.如权利要求11或12的方法，其中所述液体包含：
(i)75mM与约125mM之间的甘露糖醇；
(ii)75mM与约125mM之间的甲硫氨酸；
(iii)75mM与约125mM之间的抗坏血酸钠；
(iv)75mM与约125mM之间的组氨酸；
(v)30mM与约70mM之间的甲硫氨酸和约30mM与约70mM之间的组氨酸；
(vi)约10mM与约50mM之间的甲硫氨酸、约10mM与约50mM之间的组氨酸和约10mM与约50mM之间的抗坏血酸钠；或
(vii)约5mM与约45mM之间的抗坏血酸钠、约5mM与约45mM之间的甲硫氨酸、约5mM与约45mM之间的甘露糖醇和约5mM与约45mM之间的组氨酸。
17.如权利要求1-16中任一项的方法，其中所述液体是缓冲溶液。
18.如权利要求11或12的方法，其中所述液体包含至少一种选自以下的螯合剂：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙磺酸钠(DMPS)、二巯基丁二酸(DMSA)、金属硫蛋白和去铁胺。
19.如权利要求1-18中任一项的方法，其中所述层析树脂选自阴离子交换层析树脂、阳离子交换层析树脂、亲和层析树脂、疏水相互作用层析树脂和尺寸排阻层析树脂。
20.如权利要求19的方法，其中所述组合物包含含有蛋白质配位体的亲和层析树脂。
21.如权利要求20的方法，其中所述蛋白质配位体是蛋白A。
22.如权利要求19的方法，其中所述组合物包含阴离子交换层析树脂。
23.如权利要求22的方法，其中所述阴离子交换层析树脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基团。
24.如权利要求1-23中任一项的方法，其中所述剂量为约15kGy与约45kGy之间。
25.如权利要求24的方法，其中所述剂量为约20kGy与约30kGy之间。
26.如权利要求25的方法，其中所述剂量为约23kGy与约27kGy之间。
27.如权利要求1-26中任一项的方法，其中暴露是在如下温度下执行：约-25℃与约0℃之间，包括端点。
28.如权利要求1-26中任一项的方法，其中暴露是在如下温度下执行：约0℃与约25℃之间，包括端点。
29.一种生物负载减少的层析树脂，其通过如权利要求3的方法生产。
30.如权利要求29的生物负载减少的层析树脂，其中所述树脂的灭菌保证水平(SAL)为约1x10-8与约1x10-5之间。
31.如权利要求30的生物负载减少的层析树脂，其中所述树脂的灭菌保证水平(SAL)为约1x10-7与约1x10-6之间。
32.如权利要求29-31中任一项的生物负载减少的层析树脂，其中所述层析树脂包含至少一种选自以下的树脂：阴离子交换层析树脂、阳离子交换层析树脂、亲和层析树脂、疏水相互作用层析树脂和尺寸排阻层析树脂。
33.如权利要求32的生物负载减少的层析树脂，其中所述层析树脂包含含有蛋白质配位体的亲和层析树脂。
34.如权利要求33的生物负载减少的层析树脂，其中所述蛋白质配位体是蛋白A。
35.如权利要求32的生物负载减少的层析树脂，其中所述层析树脂包含阴离子交换层析树脂。
36.如权利要求35的生物负载减少的层析树脂，其中所述阴离子交换层析树脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基团。
37.一种制备生物负载减少的填充层析柱的方法，所述方法包括：
提供如权利要求29的生物负载减少的层析树脂；和
在无菌环境中将所述层析树脂填充到生物负载减少的柱中。
38.一种生物负载减少的填充层析柱，其通过如权利要求37的方法生产。
39.一种生物负载减少的填充层析柱，其通过如权利要求5的方法生产。
40.如权利要求39的生物负载减少的填充层析柱，其中所述填充柱中的树脂的灭菌保证水平(SAL)为约1x10-8与约1x10-5之间。
41.如权利要求40的生物负载减少的填充层析柱，其中所述树脂的灭菌保证水平(SAL)为约1x10-7与约1x10-6之间。
42.如权利要求39-41中任一项的生物负载减少的填充层析柱，其中所述填充柱中的树脂包含至少一种选自以下的树脂：阴离子交换层析树脂、阳离子交换层析树脂、亲和层析树脂、疏水相互作用层析树脂和尺寸排阻层析树脂。
43.如权利要求42的生物负载减少的填充层析柱，其中所述树脂包含含有蛋白质配位体的亲和或假亲和层析树脂。
44.如权利要求43的生物负载减少的填充层析柱，其中所述配位体是蛋白A。
45.如权利要求42的生物负载减少的填充层析柱，其中所述树脂包含阴离子交换层析树脂。
46.如权利要求45的生物负载减少的填充层析柱，其中所述阴离子交换层析树脂包含N-苄基-N-甲基-乙醇胺基团。
47.一种组合物，其包含(i)层析树脂和(ii)含至少一种醇的液体，其中所述至少一种醇的存在量足以改善所述层析树脂在用足以减少所述组合物的生物负载的剂量的γ-照射处理时结合能力的损失。
48.如权利要求47的组合物，其中所述组合物是沉降的层析树脂的浆液。
49.如权利要求47的组合物，其中所述组合物是润湿的固体混合物。
50.如权利要求47-49中任一项的组合物，其中所述至少一种醇选自：苯甲醇、环己醇、异丁醇、2-甲基-2-丁醇、甲醇、乙醇、丙-2-醇、丙-1-醇、丁-1-醇、戊-1-醇、十六烷-1-醇、2-苯基乙醇、仲苯基乙醇、3-苯基-1-丙醇、1-苯基-1-丙醇、2-苯基-1-丙醇、2-苯基-2-丙醇、1-苯基-2-丁醇、2-苯基-1-丁醇、3-苯基-1-丁醇、4-苯基-2-丁醇、dl-1-苯基-2-戊醇、5-苯基-1-戊醇和4-苯基-1-丁醇。
51.如权利要求50的组合物，其中所述至少一种醇包含苯甲醇。
52.如权利要求47-51中任一项的组合物，其中所述液体中一种或多种醇的总和浓度为约0.01v/v％至约10v/v％。
53.如权利要求47-52中任一项的...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·帕蒂尔，C·瓦尔纳，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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