基于纳米金的分裂型适体传感器及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于传感器领域，涉及分裂型适体传感器，特别是指基于纳米金的分裂型适体传感器及其制备方法和应用。本申请基于能量转移原理，利用纳米金淬灭FAM荧光基团；结合分裂型核酸适体识别机制，构建了一种基于纳米金的高灵敏分裂型适体传感器。对传感器制备条件进行实验优化，如AuNPs与P2的结合过程中的柠檬酸钠用量、AuNPs与P2的比例、工作溶液的稳定时间等。利用优化后的工作溶液检测ATP，结果表明该传感器检测范围为30pmol/L到15 nmol/L，高灵敏线性检测范围为30pmol/L到3330pmol/L，检出限为30pmol/L，且具有良好的特异性，是一种极具应用潜力的分裂型适体传感器。

【技术实现步骤摘要】
基于纳米金的分裂型适体传感器及其制备方法和应用
本专利技术属于传感器领域，涉及分裂型适体传感器，特别是指基于纳米金的分裂型适体传感器及其制备方法和应用。
技术介绍
三磷酸腺苷(triphosadenine，ATP)是生物体内各种生命活动能量的直接来源，在生化反应和药物分析中起着关键的作用。常见的心血管病、帕金森综合征和阿尔兹海默症都与ATP浓度密切相关，检测ATP浓度在病理和生命科学研究中具有重要意义。传统检测ATP的方法主要依赖于昂贵的仪器设备，如高效液相色谱法、同位素示踪法等，虽然灵敏度较高，但样品制作要求高，实验操作繁琐，仪器昂贵等缺点限制了其推广应用。核酸适体（aptamer）是指经体外筛选技术SELEX(指数富集配体系统进化)筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段（RNA或DNA），具有易合成、易标记、性质稳定、没有免疫源性和毒性等优势。适配体与靶标结合后，其构象通常发生显著变化，形成发夹、茎环、假结或膨出结构，利用核酸适体与靶标结合后构象变化或结构修饰，结合荧光分析技术的高灵敏性可设计多种荧光适体传感器。但本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于纳米金的分裂型适体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n（1）将核苷酸链P2加入Tris-HCl溶液中反应2h进行激活，得P2溶液；/n（2）向P2溶液中加入AuNPs，常温反应20min后，再加入柠檬酸钠溶液并在37℃恒温振荡培养3 h，再离心取底液即得到AuNPs@P2耦合物；/n（3）向AuNPs@P2耦合物中加入核苷酸链P1，室温培养2h，即得基于纳米金的分裂型适体传感器工作液。/n

【技术特征摘要】
1.基于纳米金的分裂型适体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将核苷酸链P2加入Tris-HCl溶液中反应2h进行激活，得P2溶液；
（2）向P2溶液中加入AuNPs，常温反应20min后，再加入柠檬酸钠溶液并在37℃恒温振荡培养3h，再离心取底液即得到AuNPs@P2耦合物；
（3）向AuNPs@P2耦合物中加入核苷酸链P1，室温培养2h，即得基于纳米金的分裂型适体传感器工作液。


2.根据权利要求1所述的基于纳米金的分裂型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，核苷酸链P2的序列如5′-TGCGGAGGAAGGT-(CH2)6-SH-3′所示。


3.根据权利要求1所述的基于纳米金的分裂型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，Tris-HCl溶液的pH=7、浓度为10mmol/L，P2溶液的浓度为5μmol/L。


4.根据权利要求1所述的基于纳米金的分裂型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，AuNPs的浓度为1nmol/L，柠檬酸钠溶液的浓度为500mmol/L、pH=5。


5.根据权利要求4所述的基于...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜利英，任林娇，秦自瑞，张培，孟晓龙，徐晓萍，张吉涛，陈青华，
申请(专利权)人：郑州轻工业大学，
类型：发明
国别省市：河南;41