一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物药肥制造技术

本发明专利技术公开了一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物药肥。所述生物药的质量百分含量组成如下：甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂5％～10％，草炭20％～30％，锯末60％～70％；甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂中的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12218。本发明专利技术生物药肥施于花生根部，能够防治花生白绢病和花生茎腐病，并能促进花生生长，具体能提高地上部鲜重、提高地下部鲜重、提高根长以及提高株高。本发明专利技术甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂对花生茎腐病菌和花生白绢病病原菌抑制率均达90％以上；利用本发明专利技术生物药肥对花生进行灌根，对花生茎腐病和花生白绢病的防治效果达75％以上，并对花生生长具有明显的促进作用。

【技术实现步骤摘要】
一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物药肥
本专利技术涉及一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物药肥，属于农药

技术介绍
花生是重要的经济作物之一，同时也是优质食用油的主要油料品种，在多个地区被广泛地种植，花生具有促生长、抗衰老、止血造血等良好功效，因而又被称为“长生果”。近年来，随着农业生产的快速发展，受花生连作等不良种植方式及气候变化等环境因素的影响，花生病害也呈明显上升的趋势，严重影响花生的产量与质量。花生茎腐病是危害较为严重的一种病害，国内各花生主产区均有发生，尤以山东、江苏等地区发生最重。一般地块发病率为10～20％，重病地块发病面积常达50％以上，严重的达60～70％。病株常整株枯死，形成成片发病中心。花生白绢病是由齐整小核菌引起的土传真菌病害，在花生产区普遍发生，温暖地区发病更严重，轻者减产50％，重者绝收，造成巨大的经济损失。目前花生病害的防控主要采用化学药剂防治，而长期使用化学药剂导致的食品安全、病原菌抗药性及生态破坏驱使人们寻找更安全、高效的解决措施。生物防治作为一种病害防治手段虽然不像化学农药那么高效、简便，但其对环境友好，而且防效稳定、持久，不产生抗药性，必将对农业的可持续发展起到十分重要的作用。微生物肥料是用有活性的微生物制成的肥料产品，微生物可在植物根际、体表或体内及土壤中定殖，施入土壤后可在植物根际先占领生存空间，形成优势种群，减少病原菌对植物根部的侵害，对土传病害有很好的防效；微生物肥料必然是未来可持续发展的重要方向之一。因此，有必要提供一种防治花生土传病害的微生物肥料。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种含甲基营养型芽孢杆菌的生物药肥，所述生物药肥施于花生根部，可达到控制花生白绢病和花生茎腐病病害的目的，并对花生生长具有明显的促进作用。本专利技术生物药肥采用甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)，于2016年3月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCCNo.12218。本专利技术所提供的生物药肥，其质量百分含量组成如下：甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂5％～10％，草炭20％～30％，锯末60％～70％；或，甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂8％，草炭25％，锯末67％；所述生物药肥中有效活菌数≥100亿/g；其中，所述甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂的质量百分含量组成如下：甲基营养型芽孢杆菌母药粉10～30％、分散剂NNO1～20％、十二烷基硫酸钠0.1～5％、余量的高岭土；或，甲基营养型芽孢杆菌母药粉30％、分散剂NNO10％、十二烷基硫酸钠2％、余量的高岭土。其中，所述甲基营养型芽孢杆菌母药粉的质量百分含量组成如下：甲基营养型芽孢杆菌发酵液90～99％，硅藻土1～10％；或，甲基营养型芽孢杆菌发酵液98％，硅藻土2％。其中，所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液按照下述方法制备得到：1)将甲基营养型芽孢杆菌活化，然后接种于LB液体培养基中进行振荡培养，得到一级种子液；2)将所述一级种子液接种于种子罐中进行培养，得到二级种子液；3)将所述二级种子液接种于发酵罐中进行培养，当发酵液中90％以上的菌体转化为芽孢时，停止发酵，即得到所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液。上述方法中，步骤1)中，活化的步骤如下：将所述甲基营养型芽孢杆菌接种于LB斜面培养基上，30℃～37℃下培养16～24h，然后挑取一环斜面菌接种于另一支LB斜面培养基上，30℃～37℃下培养16～24h后得到活化的菌种；所述LB斜面培养基的组成为：蛋白胨10g/L、YeastExtract5g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L、蒸馏水1L，pH7.3；步骤1)中，将所述甲基营养型芽孢杆菌接种于LB斜面培养基上，于30℃～37℃下培养16～24h；所述振荡培养的条件如下：转速为150～180rpm，温度为30℃～37℃，时间为12～16h；步骤2)中，所述一级种子液的接种量为1～5％；在37℃下培养12～16h；所述种子罐中培养基的组成为：黄豆饼粉15g/L、玉米粉10g/L、氯化钠10g/L、磷酸二氢钾8g/L、碳酸钙5g/L、pH6.0～7.0；步骤3)中，所述二级种子液的接种量为2～8％；所述发酵罐中培养基的组成为：黄豆饼粉10g/L、玉米粉10g/L、麸皮5g/L、氯化钠5g/L、磷酸二氢钾5g/L、碳酸钙5g/L、pH6.0～7.0。所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液经过陶瓷膜进行浓缩2～10倍后得到浓缩液，然后与硅藻土混匀后通过喷雾干燥得到所述甲基营养型芽孢杆菌母药粉；然后与上述物料混合均匀制成甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂，备用。本专利技术还进一步提供了所述生物药肥的制备方法，包括以下步骤：(1)按配比将草炭、锯末混匀，粉碎后过60目筛，121℃湿热灭菌1h，冷却备用；(2)按配比将所述甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂加入步骤(1)所得物料中，混合均匀即可。本专利技术生物药肥施于花生根部(如稀释100倍)，能够防治花生白绢病和花生茎腐病，并能促进花生生长，具体能提高地上部鲜重、提高地下部鲜重、提高根长以及提高株高。本专利技术甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂对花生茎腐病菌和花生白绢病病原菌抑制率均达90％以上；利用本专利技术的生物药肥对花生进行灌根，对花生茎腐病和花生白绢病的防治效果达75％以上，并对花生生长具有明显的促进作用。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、制备生物药肥(1)制备甲基营养型芽孢杆菌发酵液1)菌种活化：将甘油管保藏的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)取一环划线接种于LB斜面培养基上，37℃下培养20h，然后挑取一环斜面菌接种于另一支LB斜面培养基上，37℃下培养20h后得到活化的菌种。所述LB斜面培养基的组成为：蛋白胨10g/L、YeastExtract5g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L、蒸馏水1L，pH7.3。2)种子液制备：挑取活化后的单菌落接种于LB液体培养基中，160rpm、37℃下振荡培养14h，得到种子液；所述LB液体培养基的组成为：蛋白胨10g/L、YeastExtract5g/L、氯化钠10g/L、蒸馏水1L，pH7.3。3)种子罐种子液培养：将制备好的种子液按接种量3％(体积比)接入种子罐中，37℃下培养14h。种子罐培养基组成为：黄豆饼粉15g/L、玉米粉10g/L、氯化钠10g/L、磷酸二氢钾8g/L、碳酸钙5g/L、pH6.0～7.0。4)发酵培养：将步骤(3)中所得的种子液按接种量5％(体积比)接入发酵罐中，37℃下培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物药肥，其质量百分含量组成如下：/n甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂5％～10％，草炭20％～30％，锯末60％～70％；/n所述生物药肥中有效活菌数≥100亿/g；/n所述甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂中的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12218。/n

【技术特征摘要】
1.一种生物药肥，其质量百分含量组成如下：
甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂5％～10％，草炭20％～30％，锯末60％～70％；
所述生物药肥中有效活菌数≥100亿/g；
所述甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂中的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12218。


2.根据权利要求1所述的生物药肥，其特征在于：所述甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂的质量百分含量组成如下：
甲基营养型芽孢杆菌母药粉10～30％、分散剂NNO1～20％、十二烷基硫酸钠0.1～5％、余量的高岭土。


3.根据权利要求2所述的生物药肥，其特征在于：所述甲基营养型芽孢杆菌母药粉的质量百分含量组成如下：
甲基营养型芽孢杆菌发酵液90～99％，硅藻土1～10％。


4.根据权利要求3所述的生物药肥，其特征在于：所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液按照下述方法制备得到：
1)将甲基营养型芽孢杆菌活化，然后接种于LB液体培养基中进行振荡培养，得到一级种子液；
2)将所述一级种子液接种于种子罐中进行培养，得到二级种子液；
3)将所述二级种子液接种于发酵罐中进行培养，当发酵液中90％以上的菌体转化为芽孢时，停止发酵，即得到所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液。


5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：尉莹莹，赵帅，雍道敬，祝帅，但丽霞，崔守东，
申请(专利权)人：青岛中达农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37