基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法技术

本发明专利技术涉及化妆品制备技术领域，且公开了基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，包括以下步骤：S1：间充质干细胞的组织成分液获取步骤；S2：向细胞培养工厂中继续加入蛋白培养基P1和含双抗的PBS缓冲液继续进行培养；S3：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质的溶液等。本发明专利技术中，提供了包含间充质干细胞分泌因子、藏红花干细胞提取物、蚯蚓激酶、透明质酸的组合物。提供了高达100余种活性物质，通过透明质酸良好的构架体使其保持良好的吸收状态，组合物对皮肤、该组合物对皮肤、粘膜无过敏反应，无刺激与反应性皮炎。

【技术实现步骤摘要】
基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法
本专利技术涉及化妆品制备
，具体为基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法。
技术介绍
水性化妆品(water-basedcosmetic)，例如包括精华液，爽肤水，清面乳，面霜，喷雾，面膜，保湿霜，防晒霜，沐浴液，收敛剂，剃须用品，洗发素，护发素，粉底液，粉底霜和其他护肤品。应用于人的皮肤，头部、面部、颈部、胸部、背部、腹部、会阴部、四肢，干细胞分泌因子中还含各型胶原蛋白(如i、ii、iii、iV型胶原蛋白)以及各种溶菌酶等对机体的作有及修复损伤中都是必不可少的。表皮干细胞是一种单能干细胞，也是皮肤更新的种子细胞。人类表皮每天都有大量的表皮细胞死亡脱落，也会有相应数量的新生表皮细胞加以补充。随着人们年龄的增加，干细胞数量逐渐枯竭，以及干细胞再生能力下降。皮肤出现斑点，折皱也逐渐增多，这就是表皮干细胞再生能力的减退，如何使表皮干细胞保持旺盛的新陈代谢能力，是保持皮肤健康的关键，藏红花，为鸢尾科植物番红花CrocussativusL的干燥柱头。味甘，性平。归心、肝经。具有忧郁痞闷，解郁安神，惊悸发狂，温毒发斑，凉血解毒，活血化瘀，产后瘀阻功效。为此，我们提出基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了具体为基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法。(二)技术方案为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，包括以下步骤：S1：间充质干细胞的组织成分液获取步骤；S2：向细胞培养工厂中继续加入蛋白培养基P1和含双抗的PBS缓冲液继续进行培养；S3：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质的溶液；S4：间充质干细胞的干细胞分泌因子液获取；S5：取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养；S6：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，经再次灭菌处理，获得物为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质，所制得液体也是间充质干细胞分泌素；S7：藏红花干细胞以及提取内容物的制备。作为优选，所述S1中，取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养，获得目标数量的间充质干细胞，然后用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，然后将收集的间充质干细胞放置与加入不含丙酮，不含酚红，不含二甲基亚砜制剂的细胞培养基细胞培养基(无菌蒸馏水1000ml，60％低糖DMEM，40％MCDB201为基础培养源，然后添加(按体积计算)1％～3％胎牛血清、维生素B1(单独灭菌)1μg/ml，维生素B6(单独灭菌)2mg/ml，5～15μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10～25μg/L血小板生长因子、5～15μg/L内皮细胞生长因子，5～15μg/L表皮细胞生长因子，0.25～0.5g/L胎盘白蛋白，NaCl(氯化钠)0.5g，完全培养基和含双抗的PBS缓冲液体积比为1∶3～5，总PH值缓冲至7.2土0.2可由碳酸氢钠或磷酸二氢钠调节，)中的新容器内，此时采用酶溶细胞破壁法，在细胞培养基中加入溶壁酶，所需浓度为1-2％(W/V)，酶解温度为25-35℃，酶解时间为1-2小时，用倒置显微镜观察细胞破碎程度，满意后所制得液体为间充质干细胞的组织成分液。作为优选，所述S2中，通过蛋白反应测试，达到目标蛋白浓度后，吸取细胞培养工厂中的上清液，放置与新的容器内，在上清液中加入PCFT聚合铁阳离子高分子聚合絮凝剂，使所吸取的上清液中蛋白质发生沉淀，然后将含有沉淀的上清液通过纤维滤纸或滤膜进行过滤，将过滤沉淀的蛋白质转移到半透膜中，用无菌蒸馏水对半透膜中的沉淀物质进行数次清洗，将以蛋白质为主要成分的沉淀从半透膜上收集至新容器中，所制得液体为间充质干细胞的组织成分的蛋白加强培养液。作为优选，所述S4中，取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养，获得目标数量的间充质干细胞，然后用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，移出含间充质干细胞的A液前体后，继续向原有细胞培养工厂中再次添加蛋白培养基P1(P1：无菌蒸馏水1000ml，甘氨酸0.5g，天冬酰胺0.5g，天冬酰胺0.5g，丝氨酸0.5g，苏氨酸0.5g，半胱氨酸0.5g，Na2HPO4(磷酸氢二钠)2.0g，KH2PO4(磷酸二氢钾)3.0g，NaCl(氯化钠)0.5g，NH4Cl(氯化铵)0.5g,葡萄糖(单独灭菌)10.0g，维生素B1(单独灭菌)1μg/ml.)和含双抗的PBS缓冲液，继续进行培养，通过蛋白反应测试，达到目标蛋白浓度后，吸取细胞培养工厂中的上清液，放置与新的容器内，在上清液中加入PCFT聚合铁阳离子高分子聚合絮凝剂，使所吸取的上清液中蛋白质发生沉淀，然后将含有沉淀的上清液通过纤维滤纸或滤膜进行过滤，将过滤沉淀的蛋白质转移到半透膜中，用去离子水对半透膜中的沉淀物质进行数次清洗，将以蛋白质为主要成分的沉淀从半透膜上收集至新容器中，所制得液体为间充质干细胞分泌素。作为优选，所述S5中，用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，移出含间充质干细胞的A液前体后，继续向原有细胞培养工厂中再次添加蛋白培养基P2(P2：无菌蒸馏水1000ml，胰蛋白胨5.0g,Na2HPO4(磷酸氢二钠)2.0g，KH2PO4(磷酸二氢钾)3.0g，NaCl(氯化钠)0.5g，NH4Cl(氯化铵)0.5g,葡萄糖(单独灭菌)10.0g，维生素B1(单独灭菌)1μg/ml.)和含双抗的PBS缓冲液，继续进行培养，通过蛋白反应测试，达到目标蛋白浓度后，吸取细胞培养工厂中的上清液，放置与新的容器内，在上清液中加入PCFT聚合铁阳离子高分子聚合絮凝剂，使所吸取的上清液中蛋白质发生沉淀，然后将含有沉淀的上清液通过纤维滤纸或滤膜进行过滤，将过滤沉淀的蛋白质转移到半透膜中，用去离子水对半透膜中的沉淀物质进行数次清洗，将以蛋白质为主要成分的沉淀从半透膜上收集至新容器中，所制得液体也是间充质干细胞分泌素。作为优选，所述S7中的具体步骤为：第一步，取藏红花未开花花苞，以及茎叶连接处，活性最强，冲洗去除周围的土，从母株上切下，立即避光、避热、在20℃清洗，医用碘伏浸泡0.5min，立即用无菌蒸馏水清洗干净，5～20％的NaHCO3浸泡3min(7≦PH设定值≦11，10≦最佳PH值≦11)，无菌镊子取出藏红花根，无菌滤纸吸干，4℃保存备用，全过程避光、避热；第二步，在无菌条件下，在工作台将藏红花花苞、茎叶切成厚度0.5～2mm的薄片，无菌50％葡萄糖注射液高渗处理，使藏红花内正常的分化细胞脱水坏死，仅藏红花的细胞形成层能保留生命力。作为优选，所述S7中的具体步骤为：第三步，从藏红花形成层中分离细胞，经固体或半固体培养基培养后，获得藏红花形成层来本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：间充质干细胞的组织成分液获取步骤；/nS2：向细胞培养工厂中继续加入蛋白培养基P1和含双抗的PBS缓冲液继续进行培养；/nS3：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质的溶液；/nS4：间充质干细胞的干细胞分泌因子液获取；/nS5：取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养；/nS6：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，经再次灭菌处理，获得物为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质，所制得液体也是间充质干细胞分泌素；/nS7：藏红花干细胞以及提取内容物的制备。/n

【技术特征摘要】
1.基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：间充质干细胞的组织成分液获取步骤；
S2：向细胞培养工厂中继续加入蛋白培养基P1和含双抗的PBS缓冲液继续进行培养；
S3：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质的溶液；
S4：间充质干细胞的干细胞分泌因子液获取；
S5：取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养；
S6：纤维滤纸或滤膜进行过滤后不沉淀的溶解液，收集至新容器内，经再次灭菌处理，获得物为细胞内可溶性的大量粘多糖，脂肪小体等小分子物质，所制得液体也是间充质干细胞分泌素；
S7：藏红花干细胞以及提取内容物的制备。


2.根据权利要求1所述的基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，所述S1中，取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养，获得目标数量的间充质干细胞，然后用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，然后将收集的间充质干细胞放置与加入不含丙酮，不含酚红，不含二甲基亚砜制剂的细胞培养基细胞培养基(无菌蒸馏水1000ml，60％低糖DMEM，40％MCDB201为基础培养源，然后添加(按体积计算)1％～3％胎牛血清、维生素B1(单独灭菌)1μg/ml，维生素B6(单独灭菌)2mg/ml，5～15μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10～25μg/L血小板生长因子、5～15μg/L内皮细胞生长因子，5～15μg/L表皮细胞生长因子，0.25～0.5g/L胎盘白蛋白，NaCl(氯化钠)0.5g，完全培养基和含双抗的PBS缓冲液体积比为1∶3～5，总PH值缓冲至7.2土0.2可由碳酸氢钠或磷酸二氢钠调节，)中的新容器内，此时采用酶溶细胞破壁法，在细胞培养基中加入溶壁酶，所需浓度为1-2％(W/V)，酶解温度为25-35℃，酶解时间为1-2小时，用倒置显微镜观察细胞破碎程度，满意后所制得液体为间充质干细胞的组织成分液。


3.根据权利要求1所述的基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，所述S2中，通过蛋白反应测试，达到目标蛋白浓度后，吸取细胞培养工厂中的上清液，放置与新的容器内，在上清液中加入PCFT聚合铁阳离子高分子聚合絮凝剂，使所吸取的上清液中蛋白质发生沉淀，然后将含有沉淀的上清液通过纤维滤纸或滤膜进行过滤，将过滤沉淀的蛋白质转移到半透膜中，用无菌蒸馏水对半透膜中的沉淀物质进行数次清洗，将以蛋白质为主要成分的沉淀从半透膜上收集至新容器中，所制得液体为间充质干细胞的组织成分的蛋白加强培养液。


4.根据权利要求1所述的基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，所述S4中，取设定的间充质干细胞加入到细胞培养工厂中进行培养，获得目标数量的间充质干细胞，然后用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，移出含间充质干细胞的A液前体后，继续向原有细胞培养工厂中再次添加蛋白培养基P1(P1：无菌蒸馏水1000ml，甘氨酸0.5g，天冬酰胺0.5g，天冬酰胺0.5g，丝氨酸0.5g，苏氨酸0.5g，半胱氨酸0.5g，Na2HPO4(磷酸氢二钠)2.0g，KH2PO4(磷酸二氢钾)3.0g，NaCl(氯化钠)0.5g，NH4Cl(氯化铵)0.5g,葡萄糖(单独灭菌)10.0g，维生素B1(单独灭菌)1μg/ml.)和含双抗的PBS缓冲液，继续进行培养，通过蛋白反应测试，达到目标蛋白浓度后，吸取细胞培养工厂中的上清液，放置与新的容器内，在上清液中加入PCFT聚合铁阳离子高分子聚合絮凝剂，使所吸取的上清液中蛋白质发生沉淀，然后将含有沉淀的上清液通过纤维滤纸或滤膜进行过滤，将过滤沉淀的蛋白质转移到半透膜中，用去离子水对半透膜中的沉淀物质进行数次清洗，将以蛋白质为主要成分的沉淀从半透膜上收集至新容器中，所制得液体为间充质干细胞分泌素。


5.根据权利要求1所述的基于藏红花干细胞提取物等组合物的水性化妆品制备方法，其特征在于，所述S5中，用含有双抗的PBS缓冲液反复对细胞培养工厂中的目标间充质干细胞进行清洗，移出含间充质干细胞的A液前体后，继续向原有细胞培养工厂中再次添加蛋白培养基P2(P2：无菌蒸馏水1000ml，胰蛋白胨5.0g,Na2HPO4(磷酸氢二钠)2.0g，KH2PO4(磷酸二氢钾)3.0g，NaCl(氯化钠)0.5g，NH4Cl(氯化铵)0.5g,葡萄糖(单独灭菌)10.0g，维生素B1(单独灭菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，
申请(专利权)人：刘哲，
类型：发明
国别省市：陕西;61