一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法技术

本发明专利技术公开了一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法，属于生物技术领域。本发明专利技术公开的一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法，包括接毒、铺板、固定、加一抗、加二抗、显色。本发明专利技术方法为感染CSFV猪的预防和疫苗评价、免疫评价提供一定技术支持；且血清中和试验可以用来检测CSFV抗体水平的高低以及对CSF疫苗免疫效果的评定，有望应用于实际疫苗的生产中。本发明专利技术方法利用全病毒和抗体相互作用后感染靶细胞，真实的反应了病毒与中和抗体相互作用的情况；具有特异性强、敏感性高、操作简单的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法
本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法。
技术介绍
猪瘟(ClassicalSwineFever)，早期称猪霍乱(HogCholera,HC)，是由猪瘟病毒(ClassicalSwineFeverVirus,CSFV)引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病，其特征为高热稽留和全身广泛性出血。猪瘟的发病率和死亡率都很高，主要分为急性型、亚急性型、慢性型、非典型猪瘟或温和型猪瘟，给全世界养猪产业造成巨大的经济损失。其在世界各地均有不同程度的流行，我国将此病列为一类动物疾病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病。猪瘟病毒(CSFV)属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)，是RNA病毒，具有感染性。在自然条件下，猪还可能感染与猪瘟病毒(CSFV)同属的牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrheaVirus，BVDV)和绵羊边界病病毒(BorderdiseaseVirus，BDV)，但是CSFV却只对猪有致病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)铺板：把PK15细胞消化离心后制备成含1.0×10

【技术特征摘要】
1.一种CSFV的IPMA中和抗体检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)铺板：把PK15细胞消化离心后制备成含1.0×105cells/mL的细胞悬液，每孔100μL铺到96孔板上，置于37℃5％CO2培养箱中培养12h；待细胞完全贴壁，将等体积的CSFV病毒和临床血清37℃孵育1h，接种到96孔板内的PK15细胞上；同时设立正常接毒细胞对照孔；
(2)固定：培养48h待细胞长满后取出96孔板，用预冷的无水乙醇固定；
(3)加一抗：把96孔板用PBS洗2-3次，加入100μL用0.01MPBS1:400稀释的CSFV阳性血清，置于37℃中作用1h；
(4)加二抗：加入100μL用0.01MPB...

【专利技术属性】
技术研发人员：李鹏，王利平，刘兴友，王选年，刘长忠，魏小兵，孙国鹏，岳锋，李红，张艳芳，
申请(专利权)人：新乡学院，
类型：发明
国别省市：河南;41