一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒，试剂盒含有与EGFR基因T790M位点结合的探针结合预混液、酶促反应预混液和信号放大预混液；探针结合预混液包括特异性识别检测人类EGFR基因20号外显子上T790M突变位点并带有修饰的环锁核酸探针引物、RecA蛋白、单链结合蛋白以及促进探针结合缓冲液；环锁核酸探针引物包含与EGFR基因上可结合部分和非特异结合部分，环锁核酸探针引物序列如SEQ ID NO.1；酶促反应预混液包括高保真高温连接酶、四种随机脱氧核糖核苷酸dNTP和酶促反应缓冲液；信号放大预混液包括具有链置换活性的等温扩增酶、链置换等温扩增的引物dNTP、结合双链DNA的

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒
本专利技术涉及一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒，可在2小时内快速检测出EGFR突变位点，属于常见基因耐药性位点突变检测、等温扩增等

技术介绍
表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，是鸟类成红细胞白血病病毒(avianerythroblasticleukemiaviral,v-erb-b)致癌基因同源体，为HER/ErbB家族的四个成员之一。EGFR及其配体是细胞信号传导系统的一部分，EGFR基因拷贝数增加或者过度表达，均能促进正常细胞的转化和恶性肿瘤的转移。当EGFR20号外显子第790位点上的苏氨酸被蛋氨酸所取代，增强了ATP与EGFR-TK结合域的亲和力，导致EGFR-TKI不能有效阻断信号通路而产生耐药，极大的降低了受体酪氨酸激酶抑制剂EGFR-TKI等药物的治疗应答效果。目前，检测EGFR基因突变最常用的方法是聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有与EGFR基因T790M位点结合的探针结合预混液、酶促反应预混液和信号放大预混液；/n所述探针结合预混液包括特异性识别检测人类EGFR基因20号外显子上T790M突变位点并带有修饰的环锁核酸探针引物、RecA蛋白、单链结合蛋白以及促进探针结合缓冲液；所述环锁核酸探针引物包含与EGFR基因上可结合部分和非特异结合部分，环锁核酸探针引物序列如SEQ ID NO.1；/n所述酶促反应预混液包括高保真高温连接酶、四种随机脱氧核糖核苷酸dNTP和酶促反应缓冲液；/n所述信号放大预混液包括具有链置换活性的等温扩增酶、链置换等温扩增的引...

【技术特征摘要】
1.一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有与EGFR基因T790M位点结合的探针结合预混液、酶促反应预混液和信号放大预混液；
所述探针结合预混液包括特异性识别检测人类EGFR基因20号外显子上T790M突变位点并带有修饰的环锁核酸探针引物、RecA蛋白、单链结合蛋白以及促进探针结合缓冲液；所述环锁核酸探针引物包含与EGFR基因上可结合部分和非特异结合部分，环锁核酸探针引物序列如SEQIDNO.1；
所述酶促反应预混液包括高保真高温连接酶、四种随机脱氧核糖核苷酸dNTP和酶促反应缓冲液；
所述信号放大预混液包括具有链置换活性的等温扩增酶、链置换等温扩增的引物dNTP、结合双链DNA的Green荧光染料和促进酶反应活性缓冲液。


2.如权利要求1所述的一种快速检测EGFR基因耐药突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有纯合子阳性对照品、阴性对照品和标准品；
所述纯合子阳性对照品为浓度15ng/μL的与探针结合预混液中环锁核酸探针结合但不促进环锁探针成环的合成DNA双链片段；
所述阴性对照...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏子涵，王晓娜，李宏鑫，
申请(专利权)人：上海融享生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31