一种合成大豆基高F值寡肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种合成大豆基高F值寡肽的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术在无细胞体系中，利用重组菌无细胞提取物酶解大豆蛋白，获得高F值大豆蛋白肽。与添加商品酶不同，该体系利用分子手段，提高微生物的产酶量，极大的降低了制备高F值蛋白肽的成本，并且可以做到定向水解有效提高蛋白肽的F值。并且，与常规的全细胞催化方式不同，该物细胞体系不需额外添加辅酶或其他的醇脱氢酶和羰基还原酶，是一种具有广泛使用性的经济的、方便的、有效的生物催化系统。

【技术实现步骤摘要】
一种合成大豆基高F值寡肽的方法
本专利技术属于食品生物
，具体设计一种以大豆蛋白为原料通过无细胞体系制备高F值寡肽的方法。
技术介绍
无细胞生物催化系统，又称无细胞代谢工程，是在体外设计组装一系列酶及辅酶或细胞提取物，构建生化代谢网络获得目标产物的过程。其核心思想是基于合成生物学和代谢工程，来设计许多化合物的更高效的合成路线及人工生物合成体系，被称为下一代生物制造平台。高F值寡肽（F值＞20）是由2-9个氨基酸残基组成的低聚肽混合物，F值是低聚肽混合物中支链氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸、和缬氨酸简称BCAA）与芳香氨基酸（苯丙氨酸和酪氨酸简称AAA）的物质的量比值。支链氨基酸在高F值寡肽内占比极高，此独特的氨基酸组成可以赋予高F值寡肽独特的生理功能，如保肝、护肝、辅助治疗肝性脑病；治疗苯丙酮尿症；抗疲劳；抗氧化、抗衰老；解醉酒等。制备寡肽的方法大体分为分离提取法、化学合成法、和蛋白酶解法，其中酶解法因其反应条件温和且稳定性较好等优点而广泛应用。但是，酶解法所用的酶通常为商品酶，商品酶活性高但价格昂贵成本高昂，并且无法定向水解其中芳香族本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种合成大豆基高F值寡肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)、将枯草芽孢杆菌168中的

【技术特征摘要】
1.一种合成大豆基高F值寡肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)、将枯草芽孢杆菌168中的aprE基因片段进行扩增，导入到载体中得到重组质粒，再转入枯草芽包杆菌168中，将枯草芽包杆菌168进行培养后，离心，所得上清液为枯草杆菌蛋白酶E无细胞体系；
2）、将枯草芽孢杆菌168中的apr基因片段进行扩增，导入到载体中得到重组质粒，再转入枯草芽包杆菌168中，将枯草芽包杆菌168进行培养后，离心，所得上清液为枯草杆菌蛋白酶C无细胞体系；
3）、将枯草芽孢杆菌168中的ypwA基因片段进行扩增，导入到载体中得到重组质粒，再转入枯草芽包杆菌168中，将枯草芽包杆菌168进行培养后，离心，所得上清液为羧肽酶无细胞体系；
4）、将步骤1）得到的枯草杆菌蛋白酶E无细胞体系预热，将大豆分离蛋白粉加入到无细胞提取物中，调节pH进行第一阶段水解；
5）、步骤4）第一阶段水解完成后，加入枯草杆菌蛋白酶C无细胞体系和羧肽酶无细胞体系进行第二阶段水解，灭酶后得到酶解液；
6）、使用活性炭脱除酶解液中芳香族氨基酸、离心过滤得大豆基高F值寡肽。


2.根据权利要求1所述的合成大豆基高F值寡肽的方法，其特征在于，枯草杆菌蛋白酶E无细胞体系的加入量为500~10000U/g。


3.根据权利要求1所述的合成大豆基高F值寡肽的方法，其特征在于，第一阶段水解pH为8-...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝宁，庞靖瀛，郭格格，李涛，刘兆星，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32