一种松树免疫诱抗剂的研制方法技术

本发明专利技术公开了一种松树免疫诱抗剂的研制方法，涉及植物免疫诱抗剂技术领域。本发明专利技术包括以下步骤，将大豆多肽粉进行降解，过滤，获得第一原料；将1‑正十二烷基氮杂环庚‑2‑酮用无水乙醇溶解，获得第二原料；将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得第三原料，将第一原料和第二原料和第三原料依次加入水中混合，将混合液在超声波辅助下于35‑50℃水浴加热10‑12小时，得到松树免疫诱抗剂。本发明专利技术通过将大豆多肽粉进行降解、过滤后，与其第二原料和第三原料混合后，方便透过植物的木质部而被高效吸收利用，通过大豆蛋白制取大豆多肽粉，降低制备成本，同时由大豆多肽粉为关键原料制备植物免疫诱抗剂能够显著提高植物的抗病、抗逆及增产能力。

【技术实现步骤摘要】
一种松树免疫诱抗剂的研制方法
本专利技术属于植物免疫诱抗剂
，特别是涉及一种松树免疫诱抗剂的研制方法。
技术介绍
植物免疫诱抗剂也叫植物疫苗，是继人用疫苗、动物疫苗后，疫苗工程技术出现的新领域，也是国际上生物农药创制较为热门的研究方向。当植物受到外界刺激或处于逆境条件时，能够通过调节自身的防卫和代谢系统产生免疫反应，植物的这种防御反应或免疫抗性反应，可以使植物延迟或减轻病害的发生和发展，减少化学农药与化学肥料的使用量，降低农产品残留，植物免疫诱抗剂对农作物病虫害却没有直接的杀灭作用，而是由外源生物或分子通过诱导或激活植物所产生的抗性物质，对某些病原物产生抗性或抑制病菌的生长。当其施用在农作物上后，通过诱导农作物产生抵御或防控农作物病虫害的物质，从而达到防治病虫害的目的。通过我们的研究发现，活性肽具有高渗透、高传导、吸收好的特点能够显著提高植物的抗病、抗逆及增产能力，因此可作为关键原料制备植物免疫诱抗剂，现有的以大豆多肽粉制备的植物免疫诱抗剂因其主要成分的分子量较大，不易透过植物的角质层而被高效吸收利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种松树免疫诱抗剂的研制方法，该松树免疫诱抗剂通过将大豆多肽粉进行降解、过滤后，与其第二原料和第三原料混合后，方便透过植物的角质层而被高效吸收利用，通过大豆蛋白制取大豆多肽粉，降低制备成本，同时由大豆多肽粉为关键原料制备松树免疫诱抗剂所需要的免疫诱导因子——有机活性小分子(活性肽)，可迅速渗透、传导至树体各部位，又可激活松树自身防卫反应，诱导树体产生抵抗线虫的物质。能够显著提高松树的抗病、抗逆能力，解决现有的多肽不易被吸收、功效低和制备成本高的问题。为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术为一种松树免疫诱抗剂的研制方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆多肽粉进行降解，过滤，获得第一原料；步骤二：将1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇溶解，获得第二原料，所述1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮与所述无水乙醇的重量比为1：3-1：5；步骤三：将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得第三原料，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与水的重量比为1：4-1：6；步骤四：将第一原料和第二原料和第三原料依次加入水中混合，将混合液在超声波辅助下于35-50℃水浴加热10-12小时，得到松树免疫诱抗剂。优选地，所述大豆多肽粉采用以下方法制得：将大豆水解物放入微波反应器中，加入200～4000ml的蒸馏水或纯净水中，搅拌均匀，用氢氧化钾调节其pH值到7.0～9.0，置于微波条件下保持10～30分钟，微波功率500～1000w，对大豆水解物进行变性处理，冷却，获得大豆分离蛋白水溶液；再取碱性蛋白酶，加入到上述所得的大豆蛋白水溶液中，开启微波发生器使温度升至30～70℃进行酶解，微波功率100～1000w，酶解期间微波能持续供应，微波酶解时间维持5～30分钟，获得大豆分离蛋白酶解液；将上述所得的大豆分离蛋白酶解液微波功率提高至500～2000w，90℃以上保持2～10分钟灭酶活性，然后将其冷却至30～50℃，进行微滤膜过滤，除去滤渣，获得大豆分离蛋白酶解滤液；将上述所得的大豆分离蛋白酶解滤液中加入占其体积1％～3％的活性炭粉，用草酸调节其pH值到3.0～7.0，维持其温度在30～80℃条件下进行脱色、脱苦处理1～3小时，然后将其进行过滤，去除废活性炭渣，得到大豆多肽精滤液；将上述所得的大豆多肽精滤液进行低温真空浓缩、喷雾干燥处理得到大豆多肽粉。优选地，所述缓冲溶液为乙酸-乙酸钠溶液，所述缓冲溶液的pH值为4-6之间。优选地，所述大豆水解物采用以下方法制得：在大豆蛋白中加入组织蛋白酶L，调节pH至5.5～8.5，室温搅拌20～60分钟后，再于35～42℃的水浴条件下反应2～24个小时，即得，其中，所述大豆蛋白和组织蛋白酶L的重量比为100～1000:1。优选地，所述各个原料的使用量为：所述第一原料为4-6重量份，所述第二原料为2-5重量份，所述第三原料为0.5-2重量份，所述水为85-95重量份。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术通过将大豆多肽粉进行降解、过滤后，与其第二原料和第三原料混合后，方便透过植物的角质层而被高效吸收利用。2、本专利技术通过大豆蛋白制取大豆多肽粉，降低制备成本；3、本专利技术由大豆多肽粉为关键原料制备植物免疫诱抗剂能够显著提高植物的抗病、抗逆及增产能力。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。图1为本专利技术大豆多肽分子量的MALDI质谱图。实施例一：本专利技术为一种松树免疫诱抗剂的研制方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆多肽粉进行降解，过滤，获得第一原料；步骤二：将1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇溶解，获得第二原料，1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮与所述无水乙醇的重量比为1：3-1：5；步骤三：将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得第三原料，脂肪醇聚氧乙烯醚与水的重量比为1：4-1：6；步骤四：将第一原料和第二原料和第三原料依次加入水中混合，将混合液在超声波辅助下于35-50℃水浴加热10-12小时，得到松树免疫诱抗剂。大豆多肽粉采用以下方法制得：将大豆水解物放入微波反应器中，加入200～4000ml的蒸馏水或纯净水中，搅拌均匀，用氢氧化钾调节其pH值到7.0～9.0，置于微波条件下保持10～30分钟，微波功率500～1000w，对大豆水解物进行变性处理，冷却，获得大豆分离蛋白水溶液；再取碱性蛋白酶，加入到上述所得的大豆蛋白水溶液中，开启微波发生器使温度升至30～70℃进行酶解，微波功率100～1000w，酶解期间微波能持续供应，微波酶解时间维持5～30分钟，获得大豆分离蛋白酶解液；将上述所得的大豆分离蛋白酶解液微波功率提高至500～2000w，90℃以上保持2～10分钟灭酶活性，然后将其冷却至30～50℃，进行微滤膜过滤，除去滤渣，获得大豆分离蛋白酶解滤液；将上述所得的大豆分离蛋白酶解滤液中加入占其体积1％～3％的活性炭粉，用草酸调节其pH值到3.0～7.0，维持其温度在30～80℃条件下进行脱色、脱苦处理1～3小时，然后将其进行过滤，去除废活性炭渣，得到大豆多肽精滤液；将上述所得的大豆多肽精滤液进行低温真空浓缩、喷雾干燥处理得到大豆多肽粉。缓冲溶液为乙酸-乙酸钠溶液，缓冲溶液的pH值为4-6之间。大豆水解物采用以下方法制得：在大豆蛋白中加入组织蛋白酶L，调节pH至5.5～8.5，室温搅拌20～60本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种松树免疫诱抗剂的研制方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤一：将大豆多肽粉进行降解，过滤，获得第一原料；/n步骤二：将1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇溶解，获得第二原料，所述1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮与所述无水乙醇的重量比为1：3-1：5；/n步骤三：将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得第三原料，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与水的重量比为1：4-1：6；/n步骤四：将第一原料和第二原料和第三原料依次加入水中混合，将混合液在超声波辅助下于35-50℃水浴加热10-12小时，得到松树免疫诱抗剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种松树免疫诱抗剂的研制方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一：将大豆多肽粉进行降解，过滤，获得第一原料；
步骤二：将1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮用无水乙醇溶解，获得第二原料，所述1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮与所述无水乙醇的重量比为1：3-1：5；
步骤三：将脂肪醇聚氧乙烯醚配制成水溶液，获得第三原料，所述脂肪醇聚氧乙烯醚与水的重量比为1：4-1：6；
步骤四：将第一原料和第二原料和第三原料依次加入水中混合，将混合液在超声波辅助下于35-50℃水浴加热10-12小时，得到松树免疫诱抗剂。


2.根据权利要求1所述的一种松树免疫诱抗剂的研制方法，其特征在于，所述大豆多肽粉采用以下方法制得：
将大豆水解物放入微波反应器中，加入200～4000ml的蒸馏水或纯净水中，搅拌均匀，用氢氧化钾调节其pH值到7.0～9.0，置于微波条件下保持10～30分钟，微波功率500～1000w，对大豆水解物进行变性处理，冷却，获得大豆分离蛋白水溶液；
再取碱性蛋白酶，加入到上述所得的大豆蛋白水溶液中，开启微波发生器使温度升至30～70℃进行酶解，微波功率100～1000w，酶解期间微波能持续供应，微波酶解时间维持5～30分钟，获得大豆分离蛋白酶解液；
将上述所得的大豆分离蛋白酶解液微波功率提高...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙学书，王永春，
申请(专利权)人：杭州益森键生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33