一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法技术

本发明专利技术提供了一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法。该方法以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素。对按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的大建中汤制剂，采用本发明专利技术的方法制成供试品溶液，在本发明专利技术特定的色谱条件下，不仅可以有效排除糖类物质的干扰，还能够对大建中汤制剂中的多个黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性分析和定量测定。本发明专利技术的测定方法可以准确、全面评价大建中汤的质量，简便快速，稳定性和重复性好，有利于提高大建中汤质量标准，提高药物的安全性和可靠性，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法
本专利技术属于中药质量控制领域，具体涉及一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法。
技术介绍
大建中汤出自《金匮要略(汉·张仲景)腹满寒疝宿食病脉证治第十》：心胸中大寒痛，呕不能饮食，腹中寒，上冲皮起，出见有头足，上下痛而不可触近，大建中汤主之。大建中汤方：蜀椒二合(去汗)，干姜四两，人参二两；上三味，以水四升，煮取二升，去滓，内胶饴一升，微火煮取一升半，分温再服；如一炊顷，可饮粥二升，后更服。当一日食糜，温覆之。大建中汤主治脾胃虚寒之胸腹满痛之症，方中蜀椒味辛大热，温脾胃，助命火，并能散积杀虫；干姜辛热，温中助阳，散寒降逆；人参补益脾胃，扶助正气；重用饴糖建中缓急，并能缓和椒、姜燥烈之性。诸药合用，共奏温中补虚，降逆止痛之功。大建中汤制剂作为汉方制剂在日本上市，目前日本药局方对大建中汤制剂的质量标准仅对无糖处方中人参皂苷Rb1和6-姜酚进行含量测定。目前国内研究大建中汤制剂的质量标准也是针对无糖处方进行人参皂苷Rg1、Rb1、Re和6-姜辣素的含量测定。也就是说，现在国内外对大建中汤制剂的质量控制标准都是针对不含胶饴的无糖类大建中汤制剂，而且，尚无以大建中汤制剂中的水溶性黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)为指标性成分进行质量控制的方法。有研究表明，黄酮类化合物具有清除自由基、镇痛、解痉、抗炎、抗菌等多种作用。大建中汤制剂的制备方法为水煎提取，故其中可吸收的有效成分多为水溶性，而水溶性成分中，黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)是大建中汤中祛寒止痛的主要活性成分。因此，研究出一种能够同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分含量的方法，对大建中汤的质量控制具有非常重要的意义。随着中药经典名方开发成为当下中医药界研究的热点，相关管理部门已经规定经典名方需严格遵从古方的处方、剂量和制备工艺进行研究。2018年5月29日，国家药品监督管理局发布了《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》，明确了古代经典名方制剂研制的2个阶段：经典名方物质基准研制与制剂研制。其中，经典名方物质基准是指以古代医籍中记载的古代经典名方制备方法为依据制备而得的中药药用物质的标准，除成型工艺外，其余制备方法应当与古代医籍记载基本一致。因此，对经典名方大建中汤制剂的物质基准研究必须是在按照古方记载、加入胶饴所得制剂的基础上进行。但是，按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的大建中汤制剂中胶饴的质量占比较高，会对制剂中指标性成分含量的测定产生较大的干扰。所以，研究出一种能够排除制剂中糖类物质的干扰，同时准确测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)的方法，对经典名方大建中汤制剂的质量控制具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种经典名方大建中汤(含糖类物质)的黄酮类成分测定方法，同时对大建中汤中的黄酮类成分(包括芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性和定量的分析，为经典名方大建中汤的质量控制提供一种新的思路。本专利技术提供了一种同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分的方法，所述方法是以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素；包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取大建中汤制剂，加入水溶解，然后加入醇类试剂提取，收集醇类试剂层，干燥，然后用溶剂溶解，过滤，取滤液，即得供试品溶液；(2)注入高效液相色谱仪检测；色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为磷酸水溶液。进一步地，所述方法为定量测定芦丁、金丝桃苷和槲皮素的方法。进一步地，所述方法以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量；对照品溶液的制备方法如下：分别称取芦丁、金丝桃苷和槲皮素，加溶剂溶解，即得；优选的，所述溶剂为醇类溶剂，更优选为甲醇。进一步地，步骤(1)中，所述大建中汤制剂是通过以下方法制得的：取人参、干姜、蜀椒，加水提取，过滤，取滤液，加入糖类物质，浓缩或干燥，即得。进一步地，所述人参、干姜、蜀椒的质量比为(25～35)：(55～65)：9，优选为30：60：9；所述人参与水的质量体积比为1:(20～35)g/ml，优选为1：27g/ml；所述提取方式为煎煮，煎煮时间为煎煮至体系的体积减少至原来的一半；所述糖类物质为麦芽糖；所述人参与糖类物质的质量比为1：(8～12)，优选为1:10。进一步地，步骤(1)中，所述提取方式为振摇提取；所述大建中汤制剂与水的质量体积比为1：(3～5)，优选为1:4g/ml；所述醇类试剂为正丁醇，优选为水饱和的正丁醇；所述振摇提取的次数为2～4次，优选为4次，每次振摇提取加入的醇类试剂与大建中汤制剂的体积质量比为(3～5):1ml/g，优选为5:1ml/g；所述用溶剂溶解时采用的溶剂为醇类溶剂，优选为甲醇。进一步地，步骤(2)中，所述磷酸水溶液的质量浓度为0.05％～0.10％，优选为0.10％。进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件为梯度洗脱，洗脱条件如下表所示：时间流动相A％流动相B％0109051585151585161882301882322575402575419010489010表中时间的单位为分钟，％A表示A相占流动相的体积，％B表示B相占流动相的体积。进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件中的检测波长为340～380nm，优选为360nm。进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件中的柱温为25～35℃，优选为35℃；流速为0.8～1.2ml/min，优选为0.8ml/min。本专利技术中，蜀椒经基源考证为现代芸香科花椒属植物花椒ZanthoxylumbungeanumMaxim.的干燥果皮。古代供药用自《神农本草经》因生长地区分为“秦椒”(下品)，“蜀椒”(中品)，其性状有一定差异。《本草纲目》蜀椒释名：巴椒，汉椒，川椒，南椒，蓎藙，点椒。蜀，古国名。汉，水名。今川西成都、广汉、潼川诸处是矣。巴亦国名，又水名。今川东重庆、夔州、顺庆、阆中诸处是矣。川则巴蜀之总称，因岷、沱、黑、白四大水，分东、西、南、北为四川也。本专利技术中所使用“蜀椒”均产于四川汉源。胶饴为古方说法，又名饴糖、软糖、饧、饧糖等，为粳米、糯米、大麦、小麦、栗、玉蜀黍、薏苡仁及各种富含淀粉的可食物质经发酵糖化制成的糖类食品。现代将胶饴称为饴糖或麦芽糖。续滤液是指初滤液倒掉之后继续采集到的滤液。本专利技术中，0.10％磷酸指质量浓度为0.10％(g/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述方法是以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素；包括如下步骤：/n(1)供试品溶液的制备：取大建中汤制剂，加入水溶解，然后加入醇类试剂提取，收集醇类试剂层，干燥，然后用溶剂溶解，过滤，取滤液，即得供试品溶液；/n(2)注入高效液相色谱仪检测；/n色谱条件如下：/n色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；/n流动相：由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为磷酸水溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述方法是以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素；包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取大建中汤制剂，加入水溶解，然后加入醇类试剂提取，收集醇类试剂层，干燥，然后用溶剂溶解，过滤，取滤液，即得供试品溶液；
(2)注入高效液相色谱仪检测；
色谱条件如下：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为磷酸水溶液。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为定量测定芦丁、金丝桃苷和槲皮素的方法。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量；对照品溶液的制备方法如下：分别称取芦丁、金丝桃苷和槲皮素，加溶剂溶解，即得；优选的，所述溶剂为醇类溶剂，更优选为甲醇。


4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述大建中汤制剂是通过以下方法制得的：取人参、干姜、蜀椒，加水提取，过滤，取滤液，加入糖类物质，浓缩或干燥，即得。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述人参、干姜、蜀椒的质量比为(25～35)：(55～65)：9，优选为30：60：9；所述人参与水的质量体积比为1:(20～35)g/ml，优选为1：27g/ml；所述提取方式为...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈立，杨军，杨安东，杨强，芮旭东，程亮，胥勤，
申请(专利权)人：四川升和药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51