一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，包括以下步骤：1）从外周血中分离提取单核细胞PBMC；2）选择对应体积的培养瓶，将步骤1）提取的单核细胞PBMC进行铺瓶培养；3）将步骤2）培养中的细胞在D1天和D4天进行换液；4）将步骤3）培养中的细胞在D7天进行收获，得到多能修复细胞MDMC。多能修复细胞MDMC。多能修复细胞MDMC。

【技术实现步骤摘要】
800
‑
1000ng/ml。
[0011]优选地，步骤4）中，采用以下方法收获：4
‑
1) 将T175培养瓶中上清液弃掉，加入5ml PBS清洗细胞，弃去细胞洗液；4
‑
2) 向培养瓶中加入1ml胰蛋白酶（优选0.25% Trypsin
‑
EDTA），置37℃，5%CO2条件下孵育培养5min；4
‑
3) 向培养瓶内加入5ml胰蛋白酶抑制剂；4
‑
4) 使用细胞刮刀刮下贴壁细胞并收集到50ml离心管中，加入PBS定容至45ml，1000rpm，离心10min；4
‑
5) 弃上清，加入10ml PBS将细胞沉淀吹打混匀，经100
µ
m细胞筛过滤至新的250ml离心管内补加PBS至200ml；4
‑
6) 1000rpm，离心10min后，弃上清，沉淀即多能修复细胞MDMC。
[0012]本专利技术的有益效果如下：本专利技术提供的无血清培养成分明确，安全性高，单个核细胞经过本专利技术工艺诱导培养后，获得了以往传统培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，包括以下步骤：1） 从外周血中分离提取单核细胞PBMC；2） 选择对应体积的培养瓶，将步骤1）提取的单核细胞PBMC进行铺瓶培养；3） 将步骤2）培养中的细胞在D1天和D4天进行换液；4） 将步骤3）培养中的细胞在D7天进行收获，得到多能修复细胞MDMC。2.根据权利要求1所述的一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，其特征在于，步骤1）中，采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离提取单核细胞PBMC。3.根据权利要求1所述的一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，其特征在于，步骤2）中，根据实验计划或细胞总量计算结果选择对应体积的培养瓶。4. 根据权利要求1所述的一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，其特征在于，步骤2）中，加入培养基1，37℃，5% CO2条件下孵育培养，并标记为D0天；培养基1的配方为：RPMI 1640加入M
‑
CSF因子5
‑
20μg/L，IL
‑
3因子0.5
‑
1.5μg/L，10%灭活自体血清以及10μl/L巯基乙醇。5.根据权利要求4所述的一种多能修复细胞MDMC的提取制备工艺，其特征在于，步骤2）中，采用以下标准进行铺瓶培养：a. 每个T25培养瓶细胞总数：2.0
‑
5.0
×
106，培养基1用量：5ml；b. 每个T175培养瓶细胞总数：11.5
‑
15.0
×
106，培养基1用量：10ml；c. 每个T175培养瓶细胞总数：30.0
‑
35.0
×
106，培养基1用量：30ml。6. 根据权利要求4所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈力坚，徐云龙，郎辰宇，任卓亚，孙佳冬，
申请(专利权)人：北京博奥体质宝健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：