一种重组酿酒酵母及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组酿酒酵母及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术首先构建了一株可以产蒎烯的菌株，通过基因操作同时敲除YPL062W和BTS1之后，菌株的生物量增加明显，对蒎烯的生物合成具有积极的作用，并通过融合表达蒎烯合酶基因Pt1和ERG20ww，使单位菌体产量达到最高1.15mg/L*OD。达到最高1.15mg/L*OD。达到最高1.15mg/L*OD。

【技术实现步骤摘要】
一种重组酿酒酵母及其应用


[0001]本专利技术涉及一种重组酿酒酵母及其应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]蒎烯是一种天然活性单萜烯，广泛用作调味剂、化学品和医药，特别是蒎烯二聚体可作为喷气燃料替代品的良好候选者，也是一种耐高温润滑剂。目前，在工业上大量获取蒎烯的方法还是利用高效精馏塔从脂松节油或粗硫酸盐松节油中进行分离提取。这类传统的获取蒎烯的方法存在着效率低、操作复杂繁琐、能源消耗大和设备技术要求高等缺点，同时破坏环境、消耗大量自然资源。因此，蒎烯的生物技术生产受到越来越多的关注。
[0003]酿酒酵母在生产萜类物质具有得天独厚的优势，酵母细胞在细胞色素P450酶的功能性表达方面比原核宿主具有优势，而细胞色素P450酶是合成更复杂的单萜类化合物所必需的。有文献报道酿酒酵母在生产倍半萜和多萜时的产量要高于大肠杆菌，证明了酿酒酵母更大的生产前景。到目前为止，虽然使用细菌宿主时,单萜生物生产更有效率。然而，在细菌底盘中设计单萜生物合成的下游步骤是具有挑战性的，因为其中几个步骤需要细胞色素p450酶的功能性表达，而这在细菌中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组酿酒酵母，其特征在于，强化表达了tHMG1，ERG20ww和IDI基因，敲除了YPL062W和BTS1基因，并融合表达了蒎烯合酶tPt1和ERG20ww；所述ERG20ww是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ERG20的基础上，将第96位的苯丙氨酸和第127位的天冬氨酸突变得到的。2.如权利要求1所述的一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述ERG20ww是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ERG20的基础上，将第96位的苯丙氨酸突变为色氨酸，并将第127位的天冬氨酸突变为色氨酸得到的。3.如权利要求2所述的一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述融合表达是将蒎烯合酶tPt1和ERG20ww通过linker融合连接后表达，所述linker序列为GSGSGSGS。4.如权利要求1
‑
3任一所述的一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述蒎烯合酶tPt1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；优选的，所述tHMG1的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；优选的，所述IDI的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。5.如权利要求1
‑
4任一所述的一种重组酿酒酵母，其特征在于，所述YPL062W的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；优选的，所述BTS1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。6.如权利要求1
‑
5任一所述的一种重组酿酒酵母，其特征在于，以S.cerevisiae w303或S.cerev...

【专利技术属性】
技术研发人员：诸葛斌，任全路，贺亚曦，陆信曜，宗红，马腾飞，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：