牛鞭草青贮乳酸菌添加剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及一种牛鞭草青贮乳酸菌添加剂。所述牛鞭草青贮乳酸菌添加剂包括组分A和组分B，组分A和组分B均为鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意一种，且组分A与组分B不相同，所述组分A和组分B的质量比为1

【技术实现步骤摘要】
牛鞭草青贮乳酸菌添加剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种牛鞭草青贮乳酸菌添加剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]青贮是指把鲜棵植物压实封闭起来，使贮存的青饲料与外部空气隔绝造成内部缺氧，致使厌氧发酵的一种贮存技术或方法。青贮有助于提高饲料的利用价值，扩大饲料来源，调整饲草供应时期，使单位面积收获的总养分达到最高值，减少营养物质的浪费，减少劳动强度，提高工作效率，治疗病虫害。
[0003]青贮饲料实质上就是乳酸菌发酵饲料，自然青贮是利用自然界植物上存在的乳酸菌进行发酵。然而，由于自然界植物上的乳酸菌含量少，仅占细菌总数的0.01％
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1％。所以在发酵过程中，乳酸菌难以迅速形成优势菌群，不能在短时间内降低pH值，从而造成各种细菌都在生长繁殖致使温度迅速上升，使得预备发酵期延长，并且，预备发酵过程中，青贮料因发热造成大量的营养成分和能量的损失，还会造成气味刺鼻、适口性差；此外，发酵过程中霉菌和腐败菌的大量繁殖，造成青贮料局部发霉和腐烂；再者，大量杂菌存在，在青贮料开窖时，易形成二次发酵，在取食截面上新发生霉斑或成片发霉。
[0004]因此，一般采用外源性的添加乳酸菌，提高青贮质量。如公开号为CN108265016A的专利文献公开了一种狼尾草属牧草青贮乳酸菌添加剂，其包括组分A和组分B，组分A和组分B的容积比为1
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2，所述组分A选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，所述组分B选自戊糖片球菌、食窦魏斯氏菌和植物乳杆菌中的一种，且组分和组分B不相同，所述戊糖片球菌保藏编号为CGMCC No.15074；所述食窦魏斯氏菌保藏编号为CGMCC No.15075；所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCC No.15073。该乳酸菌添加剂能够快速降低狼尾草属牧草青贮pH值，使乳酸菌成为优势菌群，加快发酵成熟，减少氨态氮的产生以及增加了有机酸含量，提高了青贮饲料的发酵品质。
[0005]然而，采用该乳酸菌添加剂进行狼尾草属牧草青贮，液态氮的含量仍然较高；此外，不同的青贮物料的发酵特性并不相同(CN108265016A)，该方案所采用的乳酸菌添加剂仅对狼尾草属牧草青贮有效，对牛鞭草属牧草青贮无效。因此，需要探索适用于牛鞭草属牧草青贮的乳酸菌添加剂。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种牛鞭草青贮乳酸菌添加剂。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0008]牛鞭草青贮乳酸菌添加剂，包括组分A和组分B，组分A和组分B均为鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意一种，且组分A与组分B不相同，所述组分A和组分B的质量比为1
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2，其中，鼠李糖乳杆菌753于2019年07月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学
院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18233，唾液乳杆菌358于2019年07月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.18232；植物乳杆菌LP694于2017年12月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.15073。
[0009]进一步，所述牛鞭草青贮乳酸菌添加剂，还包括组分C，所述组C为鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意一种，且组分A、组分B和组分C不相同，组分A、组分B和组分C的质量比为1
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2。
[0010]本专利技术的目的之二在于保护所述牛鞭草青贮乳酸菌添加剂的制备方法，包括以下步骤：
[0011]将组分A和组分B混合。
[0012]进一步，所述牛鞭草青贮乳酸菌添加剂的制备方法，包括以下步骤：
[0013]1)取牛鞭草牧草样品，稀释后吸取涂布至MRS固体培养基培养，挑出单菌落继续培养后，连续传代培养至少2次，得到纯化的菌落；
[0014]2)将步骤1)得到的纯化的菌落在乳酸菌固体培养基上恒温厌氧条件下培养后，通过革兰氏染色和过氧化氢酶接触反应，进行乳酸菌的鉴定，将鉴定后的乳酸菌加入含灭菌甘油的液体营养培养基中，并储存，得到分离纯化的乳酸菌；
[0015]3)将步骤2)得到的所述分离纯化的乳酸菌进行菌种活化后，接种到MRS液体培养基中培养，得到菌液；测定所述菌液pH与OD值，根据测定结果进行筛选；筛选pH＝3.82，OD值＝1.384的菌液，得到初步筛选后的菌株A；筛选pH＝3.73，OD值＝1.428的菌液，得到初步筛选后的菌株B；筛选pH＝3.80，OD值＝1.493的菌液，得到初步筛选后的菌株C；
[0016]4)将菌株A厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增，得到的扩增产物即为鼠李糖乳杆菌753；
[0017]将菌株B厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增，得到的扩增产物即为唾液乳杆菌358；
[0018]将菌株C厌氧培养后，进行单株菌的DNA提取，以提取的DNA为模板进行PCR扩增，得到的扩增产物即为植物乳杆菌LP694；
[0019]然后将鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意两种混合。
[0020]进一步，将鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694混合。
[0021]进一步，所述PCR扩增的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0022]表1扩增引物
[0023]上游扩增引物5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
下游扩增引物5
’‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
[0024]进一步，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min后，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸90s，循环30次，再72℃延长5min。
[0025]本专利技术的目的还在于保护乳酸菌添加剂的使用方法，将乳酸菌添加剂接种到MRS液体培养基，然后将得到的菌株添加液均匀喷洒在牛鞭草中，混合均匀，袋装青贮，抽真空封口，于27
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37℃条件下发酵45天至1年。
[0026]进一步，接种量为0.3wt％
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3wt％。
[0027]本专利技术的有益效果在于：
[0028]本专利技术的乳酸菌添加剂生长速率快，产酸效率高。
[0029]本专利技术的乳酸菌添加剂能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛鞭草青贮乳酸菌添加剂，其特征在于，包括组分A和组分B，组分A和组分B均为鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意一种，且组分A与组分B不相同，所述组分A和组分B的质量比为1
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2，其中，鼠李糖乳杆菌753的保藏编号为CGMCC No.18233，唾液乳杆菌358的保藏编号为CGMCC No.18232，植物乳杆菌LP694的保藏编号为CGMCC No.15073。2.根据权利要求1所述的牛鞭草青贮乳酸菌添加剂，其特征在于，还包括组分C，所述组C为鼠李糖乳杆菌753，唾液乳杆菌358和植物乳杆菌LP694中的任意一种，且组分A、组分B和组分C不相同，组分A、组分B和组分C的质量比为1
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2。3.权利要求1所述的牛鞭草青贮乳酸菌添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将组分A和组分B混合。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取牛鞭草牧草样品，稀释后吸取涂布至MRS固体培养基培养，挑出单菌落继续培养后，连续传代培养至少2次，得到纯化的菌落；2)将步骤1)得到的纯化的菌落在乳酸菌固体培养基上恒温厌氧条件下培养后，通过革兰氏染色和过氧化氢酶接触反应，进行乳酸菌的鉴定，将鉴定后的乳酸菌加入含灭菌甘油的液体营养培养基中，并储存，得到分离纯化的乳酸菌；3)将步骤2)得到的所述分离纯化的乳酸菌进行菌种活化后，接种到MRS液体培养基中培养，得到菌液；测定所述菌液pH与OD值，根据测定结果进行筛选；筛选pH＝3.82，OD值＝1.384的菌液，得到初步...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉启凡，高武超，徐远东，何玮，范彦，蒋林峰，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：