一种分离尿液中外泌体的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离尿液中外泌体的方法，包括如下步骤：S1采集、S2处理、S3混合、S4分离和S5沉淀。本发明专利技术与常规分离尿液中外泌体的方法相比，具有成本较低，而且提高了尿液中外泌体的提取量，通过将采集后的尿液经沉淀后提取上清液，并将上清液孵育完成后用的溶液进行磁分离，并用缓冲溶液洗涤得到基于外泌体的上清液，从而增加了外泌体的提取量，并且利用差速离心的方式对外泌体进行分离，提高了尿液中外泌体的分离效率，缩短了外泌体的分离时间。缩短了外泌体的分离时间。

【技术实现步骤摘要】
一种分离尿液中外泌体的方法


[0001]本专利技术涉及外泌体分离
，更具体地说，尤其涉及一种分离尿液中外泌体的方法。

技术介绍

[0002]外泌体是一种直径约30～300nm的双层膜囊泡状结构小体，可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、脑脊液、乳汁、腹水、羊水等体液中。
[0003]尿液作为临床上诊断的常用样本，与血清样本等比较，具有无创，容易大量获得等特征，因而为其临床应用的研究提供了极大的便利。目前，尿液外泌体的分离方法，主要是超高速离心法以及试剂盒法。超高速离心法的一个典型的不足之处是，外泌体的得率太低，很难获得足够量的用于后续的分析实验；而试剂盒法，如美国的Thermo公司以及SBI公司提供的相关的尿液外泌体的制备试剂，则是成本太过高昂。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种分离尿液中外泌体的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、采集，采集一名健康志愿者晨尿20-40mL；S2、处理，将采集后的尿液经离心除去1μm的杂质，再将去除杂质后的尿液经过氧化铝薄膜进行过滤，将过滤后的尿液进行沉淀，并且在沉淀之后保留尿液中的上清液(SN1)，用于尿液的二次沉淀；S3、混合，通过将沉淀后的尿液与焦碳酸二乙酯进行混合从而得到上清液(SN2)，再将上次沉淀后得到的上清液(SN1)与上清液(SN2)进行混合，再将混合后的上清液进行孵育，将孵育完成后用的溶液进行磁分离并用缓冲溶液洗涤，即可得到基于外泌体的上清液，在上清液中加入外泌体沉淀试剂；S4、分离，将上清液与外泌体沉淀试剂以低速离心的方式除去细胞和细胞凋亡碎片，再以高速离心的方式消除大囊泡和，然后再以反向高速离心以混合外泌体，在外泌体中加入磷酸盐缓冲液重悬外泌体沉淀；S5、沉淀，将沉淀过程中的外泌体静置过夜后，所得沉淀即为外泌体。2.根据权利要求1所述的一种分...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁小梅，
申请(专利权)人：深圳光彩生命工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：