再生毛囊胚的制造方法技术

本发明专利技术的课题为提供一种再生毛囊胚的制造方法，相比于现有技术的制造方法，可简易且大量地制造再生毛囊胚。本发明专利技术的解决手段为提供一种再生毛囊胚的制造方法，其包括下述步骤：通过使含有上皮系细胞的第一细胞团与含有间充质系细胞的第二细胞团接触并同时培养而获得毛囊胚的步骤。本发明专利技术的制造方法中，前述第一细胞团及前述第二细胞团的至少任一者在前述接触前形成细胞凝集体，并且在使前述细胞凝集体接触另一细胞团时不使用培养支撑体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】再生毛囊胚的制造方法
本专利技术涉及一种再生毛囊胚(regenerativehairfolliclegerms)的制造方法，相比于现有技术的制造方法，可简易且大量地制造再生毛囊胚。
技术介绍
关于属于上皮性附属器官的牙齿或唾液腺、属于皮肤附属器官的毛囊，正在进行针对其器官胚的再生的研究。这些器官虽与生命维持无直接相关，但其丧失或功能不全会大幅影响QOL，故很期待由器官再生所带来的功能回复。关于毛囊再生，已尝试通过将间充质系细胞(毛乳头细胞及真皮毛根鞘细胞)进行取代而使毛囊可变区域再生、通过具有毛囊诱导能力的间充质系细胞而使毛囊新生、通过上皮/间充质系细胞而使毛囊再构筑等。本专利技术人等至今为止已提出：通过源自于成体小鼠须的隆突(bulge)区域上皮细胞及源自于成体小鼠须的培养毛乳头细胞，而使毛囊胚再生的方法(专利文献1)；一种再生毛囊胚的制造方法，其中，该再生毛囊胚具备用以辅助接触接受者组织及形成毛孔的引导物(guide)(专利文献2)；及经控制发毛毛色的移植用再生毛囊胚的制造方法(专利文献3)。[现有技术文献][专利文献]专利文献1：国际公开第2006/129672号专利文献2：国际公开第2012/108069号专利文献3：国际公开第2012/115079号。
技术实现思路
[专利技术所要解决的课题]为了实现毛发再生医疗，而需要大量制造再生毛囊胚的技术。专利文献1及专利文献2所记载的方法中，在培养源自于上皮系细胞的细胞集合体及源自于间充质系细胞的细胞集合体并制造毛囊胚的过程中，因被认为必须使上皮系细胞及间充质系细胞在维持高密度状态下接触，所以，在制造再生毛囊胚时，以往是使用培养支撑体，而可在其内部培养源自于上皮系细胞的细胞集合体及源自于间充质系细胞的细胞集合体。也就是说，现有技术方法是分别调制源自于上皮系细胞的细胞集合体及源自于间充质系细胞的细胞集合体，并使用微量移液器等而进行于培养支撑体内插入这些细胞集合体的操作，所以，为了制造一个一个的再生毛囊胚而需要细微操作，不适合大量制造生毛囊胚。另外，至今为止的方法中，在制造再生毛囊胚时所使用的上皮系细胞及间充质系细胞，在细胞培养后通过离心而获得高密度状态的细胞块，并从前述细胞块中对每一个毛囊胚以微量移液器等取出适当细胞数量的细胞块，再插入于培养支撑体内。因此，前述高密度状态的细胞块的内部的细胞以长时间维持于高密度状态，而会有细胞质量降低及不一致的隐忧。另外，就培养支撑体材料而言，至今为止是使用源自于异种生物的胶原蛋白凝胶等，为了临床应用于人类，而要求尽量不使用源自于异种生物的原料的方法。本专利技术对应于一个以上的上述课题。[用以解决课题的手段]本专利技术涉及一种毛囊胚的制造方法，其中，于含有上皮系细胞的细胞团或含有间充质系细胞的细胞团的至少任一者形成适当的细胞凝集体，据此可不调制高密度状态的细胞块而简便地制造个别的再生毛囊胚。本专利技术涉及一种再生毛囊胚的制造方法，其中不使用培养支撑体。本专利技术的制造方法具体上包括以下的实施方式：[1]一种再生毛囊胚的制造方法，其包括下述步骤：通过使含有上皮系细胞的第一细胞团与含有间充质系细胞的第二细胞团接触并同时培养而获得再生毛囊胚的步骤；其中，前述第一细胞团及前述第二细胞团的至少任一者在前述接触前形成细胞凝集体，在使前述细胞凝集体接触另一细胞团时不使用培养支撑体。[2]如[1]所述的制造方法，还包括下述步骤：在前述接触前，形成由前述上皮系细胞所凝集成的第一细胞凝集体作为前述第一细胞团的步骤。[3]如[2]所述的制造方法，其中，形成前述第一细胞凝集体的步骤包括：获得上皮系细胞的球体。[4]如[1]至[3]中任一项所述的制造方法，还包括下述步骤：在前述接触前，形成由前述间充质系细胞所凝集成的第二细胞凝集体作为前述第二细胞团的步骤。[5]如[4]所述的制造方法，其中，形成前述第二细胞凝集体的步骤包括：获得间充质系细胞的球体(spheroid)。[6]如[2]至[5]中任一项所述的制造方法，其中，形成前述第一细胞凝集体的步骤及形成前述第二细胞凝集体的步骤的至少一者包括：在以于底部累积前述上皮系细胞或前述间充质系细胞的方式构成的凹部中，使前述上皮系细胞或前述间充质系细胞凝集。[7]如[6]所述的制造方法，其中，前述凹部具有V状或U状的底部。[8]如[2]至[7]中任一项所述的制造方法，其中，通过以600xg以下的离心力(RCF)进行的离心处理而进行前述凝集体的形成。[9]如[6]至[8]中任一项所述的制造方法，其中，通过在配置于前述凹部的前述第二细胞凝集体上配置前述第一细胞凝集体而进行前述接触。[10]如[6]至[8]中任一项所述的制造方法，其中，通过对于配置于前述凹部的前述第二细胞凝集体供给含有前述第一细胞团的细胞悬浮液而进行前述接触。[11]如[1]至[10]中任一项所述的制造方法，其中，含有前述上皮系细胞的第一细胞团为将源自于隆突区域上皮的培养细胞进行单一细胞化处理而成的细胞的集团。[12]如[1]至[11]中任一项所述的制造方法，其中，含有前述间充质系细胞的第二细胞团为将源自于毛乳头的培养细胞进行单一细胞化处理而成的细胞的集团。[13]如[1]至[12]中任一项所述的制造方法，其中，前述上皮系细胞及前述间充质系细胞的至少一者源自于成体的毛囊。[14]如[1]至[13]中任一项所述的制造方法，还包括下述步骤：在前述接触前，于前述第一细胞团的细胞凝集体或前述第二细胞团的细胞凝集体配置引导物的步骤。[15]如[14]所述的制造方法，其中，前述引导物为丝状结构物。[16]如[14]或[15]所述的制造方法，其中，配置前述引导物的步骤包括：在前述第一细胞凝集体或前述第二细胞凝集体的形成开始前或形成过程中，于前述第一细胞团的细胞凝集体或前述第二细胞团的细胞凝集体的形成位置配置前述引导物。[17]如[14]至[16]中任一项所述的制造方法，其中，配置前述引导物的步骤包括：于前述第一细胞团的细胞凝集体或前述第二细胞团的细胞凝集体的任一者插入引导物。[18]如[14]至[17]中任一项所述的制造方法，还包括下述步骤：将配置有前述引导物的细胞凝集体及另一细胞团以使前述引导物至少贯穿前述第一细胞团或其细胞凝集体并突出至其外侧的方式接触的步骤。[19]如[1]至[13]中任一项所述的制造方法，还包括下述步骤：在前述接触后，以至少贯穿前述第一细胞团并突出至其外侧的方式插入引导物的步骤。[20]如[19]所述的制造方法，其中，前述引导物为丝状结构物。[21]如[14]至[20]中任一项所述的制造方法，其中，前述引导物为由合成聚合物或活体吸收性聚合物所制作的纤维、金属纤维、碳纤维、玻璃纤维、动物纤维、或植物纤维。[22]一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种再生毛囊胚的制造方法，其包括下述步骤：/n通过使含有上皮系细胞的第一细胞团与含有间充质系细胞的第二细胞团接触并同时培养而获得再生毛囊胚的步骤；/n其中，前述第一细胞团及前述第二细胞团的至少任一者在前述接触前形成细胞凝集体，/n在使前述细胞凝集体接触另一细胞团时不使用培养支撑体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180604 JP 2018-1066261.一种再生毛囊胚的制造方法，其包括下述步骤：
通过使含有上皮系细胞的第一细胞团与含有间充质系细胞的第二细胞团接触并同时培养而获得再生毛囊胚的步骤；
其中，前述第一细胞团及前述第二细胞团的至少任一者在前述接触前形成细胞凝集体，
在使前述细胞凝集体接触另一细胞团时不使用培养支撑体。


2.根据权利要求1所述的制造方法，还包括下述步骤：
在前述接触前，形成由前述上皮系细胞所凝集成的第一细胞凝集体作为前述第一细胞团的步骤。


3.根据权利要求2所述的制造方法，其中，形成前述第一细胞凝集体的步骤包括：获得上皮系细胞的球体。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的制造方法，还包括下述步骤：
在前述接触前，形成由前述间充质系细胞所凝集成的第二细胞凝集体作为前述第二细胞团的步骤。


5.根据权利要求4所述的制造方法，其中，形成前述第二细胞凝集体的步骤包括：获得间充质系细胞的球体。


6.根据权利要求2至5中任一项所述的制造方法，其中，形成前述第一细胞凝集体的步骤及形成前述第二细胞凝集体的步骤的至少一者包括：
在以于底部累积前述上皮系细胞或前述间充质系细胞的方式构成的凹部中，使前述上皮系细胞或前述间充质系细胞凝集。


7.根据权利要求请求项6所述的制造方法，其中，前述凹部具有V状或U状的底部。


8.根据权利要求请求项2至7中任一项所述的制造方法，其中，通过以600xg以下的离心力(RCF)进行的离心处理而进行前述凝集体的形成。


9.根据权利要求6至8中任一项所述的制造方法，其中，通过在配置于前述凹部的前述第二细胞凝集体上配置前述第一细胞凝集体而进行前述接触。


10.根据权利要求6至8中任一项所述的制造方法，其中，通过对于配置于前述凹部的前述第二细胞凝集体供给含有前述第一细胞团的细胞悬浮液而进行前述接触。


11.根据权利要求1至10中任一项所述的制造方法，其中，含有前述上皮系细胞的第一细胞团为将源自于隆突区域上皮的培养细胞进行单一细胞化处理而成的细胞的集团。


12.根据权利要求1至11中任一项所述的制造方法，其中，含有前述间充质系细胞的第二细胞团为将源自于毛乳头的培养细胞进行单一细胞化处理而成的细胞的集团。


13.根据权利要求1至12中任一项所述的制造方法，其中，前述上皮系细胞及前述间充质系细胞的至少一者源自于成体的毛囊。

【专利技术属性】
技术研发人员：辻孝，森悠，豊岛公栄，
申请(专利权)人：株式会社器官再生工学，国立研究开发法人理化学研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP