复杂序列壳二糖的制备方法技术

本发明专利技术属于海洋生物工程技术领域，具体涉及一种复杂序列壳二糖的制备方法。具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶与几丁二糖于缓冲体系内进行酶反应，而后脱盐、浓缩冻干，即得复杂序列壳二糖；其中，具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶为通过重组表达获得的NodB或VcCOD。本发明专利技术使用具有单点脱乙酰模式的几丁质脱乙酰酶对几丁二糖进行温和的酶解反应，避免了副产物的产生和对环境的污染，该方法简便快速。

【技术实现步骤摘要】
复杂序列壳二糖的制备方法
本专利技术属于海洋生物工程
，具体涉及一种复杂序列壳二糖的制备方法。
技术介绍
壳寡糖，是一种由D-氨基葡萄糖(GlcN)和N-乙酰-D氨基葡萄糖(GlcNAc)通过β-1,4糖苷键连接而成的线性寡糖。壳寡糖被发现具有多种生理活性，如抗肿瘤，抗菌，抗炎，抗氧化，促生长，调节血糖血脂，活化肠道菌群等。壳寡糖的活性与其结构密切相关，如聚合度DP、乙酰度DA、乙酰化模式PA等。目前壳寡糖的活性研究一般采用的都是混合物，很难知道具体是哪个或哪些分子在发挥作用，进而很难研究其生物机制。而且壳寡糖的生物活性不仅仅依赖于其聚合度和乙酰度，还受其序列的影响。目前已有报道证明同一聚合度，不同的异构体对促进血管生成的作用不同。因此壳寡糖的研究不再仅仅局限于聚合度和乙酰度，得到确定序列的壳寡糖对研究壳寡糖的生物活性机制十分必要。目前几丁二糖和壳二糖可以分离纯化得到，复杂序列壳二糖只能通过化学合成方法获知其活性，但糖链合成需要进行大量的羟基、氨基保护和脱保护反应，步骤非常复杂，产率很低。
技术实现思路
<br>本专利技术的目本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复杂序列壳二糖的制备方法，其特征在于：具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶与几丁二糖于缓冲体系内进行酶反应，而后脱盐、浓缩冻干，即得复杂序列壳二糖；其中，具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶为通过重组表达获得的NodB或VcCOD。/n

【技术特征摘要】
1.一种复杂序列壳二糖的制备方法，其特征在于：具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶与几丁二糖于缓冲体系内进行酶反应，而后脱盐、浓缩冻干，即得复杂序列壳二糖；其中，具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶为通过重组表达获得的NodB或VcCOD。


2.按权利要求1所述的复杂序列壳二糖的制备方法，其特征在于：所述具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶NodB和几丁二糖于缓冲体系内进行酶反应，在30-40℃下反应时间10-24h，脱盐后浓缩冻干，即得复杂序列壳二糖GlcN-GlcNAc，结构式如下:



其中，缓冲体系中NodB和几丁二糖的质量比例为1:20-1:30；
所述缓冲体系为15-25mM的Mops、8-10mM的DTT和0.5-1.5mM的MnSO4，pH6-8。


3.按权利要求1或2所述的复杂序列壳二糖的制备方法，其特征在于：所述具有特定脱乙酰基模式的几丁质脱乙酰酶VcCOD分别与几丁二糖或复杂序列壳二糖GlcN-GlcNAc混合后于10mM-20mM碳酸氢铵缓冲液，pH6-8，在30-40℃、反应10-24h，脱盐后浓缩冻干，...

【专利技术属性】
技术研发人员：于华华，郝文桐，李克成，李荣锋，马玉珍，邢荣娥，刘松，李鹏程，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37