木霉属丝状菌的突变株和蛋白质的制造方法技术

本发明专利技术是具有β‑衔接蛋白大亚基的功能缺损或降低的突变、或者构成β‑衔接蛋白大亚基的氨基酸序列中具有突变的木霉属丝状菌的突变株，以及使用该突变株在将培养中的培养液的粘度保持得较低的同时生产蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】木霉属丝状菌的突变株和蛋白质的制造方法
本专利技术涉及能够将培养液的粘度保持得较低的木霉属丝状菌的突变株和使用该突变株的蛋白质的制造方法。
技术介绍
已知木霉属丝状菌具有高的蛋白质制造能力，一直以来进行了使用木霉属丝状菌的蛋白质的制造的研究。具体地，木霉属丝状菌以纤维素、乳糖、纤维二糖等作为诱导物质，在蛋白质之中特别是制造被分类为糖化酶的纤维素酶。为了强化纤维素酶制造量，自古以来对于以控制纤维素酶制造的因子的过表达、缺损为代表的基因的改变、培养条件的最适化等进行了大量研究。另一方面，木霉属丝状菌属于生长繁殖、蛋白质的制造需要氧的好氧性丝状菌。另外，木霉属丝状菌具有如果在液体培养基中培养，则随着增殖而培养液的粘度提高这样的特征。如果培养液的粘度提高，则氧、营养素的分布变得不均匀，在培养木霉属丝状菌时，需要搅拌培养液、增加氧供应量来防止培养中的溶解氧饱和度的降低，将其维持在一定以上。另外，如果培养槽大型化，则氧体积传递系数降低，因此为了将培养中的溶解氧饱和度保持在一定以上，需要进一步增加搅拌数、氧供应量。然而，如果增加搅拌数，则存在付与菌体以大的剪切损伤这样的课题，还存在为了增加氧供应量而需要大的能量这样的课题。专利文献1～6中分别公开了通过使木霉属丝状菌的Sfb3、Mpg1、Gas1、Seb1、Crz1和Tps1的蛋白质的破坏或生成减少，与亲本株相比能够以更低的搅拌数维持深层培养中的好氧性发酵时的溶解氧量。另外，专利文献7中记载，如果破坏木霉属丝状菌的BXL1基因，则能够抑制培养液的溶解氧饱和度的降低。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特表2013-533751号公报专利文献2:日本特表2014-513529号公报专利文献3:日本特表2014-513530号公报专利文献4:日本特表2014-513531号公报专利文献5:日本特表2014-513532号公报专利文献6:日本特表2014-513533号公报专利文献7:国际公开第2017/170917号
技术实现思路
专利技术要解决的课题如上所述，使用木霉属丝状菌制造蛋白质时，抑制培养液中的溶解氧浓度的降低、将其保持在一定以上是非常重要的。本专利技术中，考虑到如果在使用木霉属丝状菌利用液体培养制造蛋白质时，能够将培养液的粘度保持得较低，则即使在将培养规模大型化的情况下，也能够降低搅拌所需的能量，并能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低，因此本专利技术以获得使培养液的粘度降低的木霉属丝状菌的突变株和提供使用该木霉属丝状菌的突变株的蛋白质的制造方法为课题。用于解决课题的手段本专利技术者为了特定能够将培养液的粘度保持得较低的木霉属丝状菌的基因而进行了深入研究，结果发现，β-衔接蛋白大亚基(beta-adaptinlargesubunit)的突变能够将培养液的粘度保持得较低，进而能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低，从而完成了本专利技术。即，本专利技术由以下(1)～(8)构成。(1)木霉属丝状菌突变株，其特征在于，具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变，该突变株的培养液的粘度与不具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变的亲本株相比降低。(2)木霉属丝状菌突变株，其特征在于，构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列中具有突变，该突变株的培养液的粘度与构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列中不具有突变的亲本株相比降低。(3)根据(2)所述的木霉属丝状菌突变株，所述氨基酸序列的突变是构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列的从N末端侧起第300位的谷氨酰胺残基向除谷氨酰胺以外的氨基酸残基的突变。(4)根据(3)所述的木霉属丝状菌突变株，所述除谷氨酰胺以外的氨基酸残基是赖氨酸。(5)根据(1)～(4)的任一项所述的木霉属丝状菌突变株，所述构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列是序列号2～10所示的氨基酸序列的任一者。(6)根据(1)～(5)的任一项所述的木霉属丝状菌突变株，所述木霉属丝状菌是里氏木霉(Trichodermareesei)。(7)蛋白质的制造方法，包括：培养(1)～(6)的任一项所述的木霉属丝状菌突变株的工序。(8)纤维素酶的制造方法，包括：培养(1)～(6)的任一项所述的木霉属丝状菌突变株的工序。专利技术的效果本专利技术的木霉属丝状菌突变株与突变导入前的亲本株相比能够将培养液的粘度保持得较低，还能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低。进而，还得到了蛋白质、特别是纤维素酶的制造量也提高这样的预料外的效果。附图说明图1-1：构成木霉属丝状菌所具有的β-衔接蛋白大亚基的全长氨基酸序列的比较。图1-2：构成木霉属丝状菌所具有的β-衔接蛋白大亚基的全长氨基酸序列的比较。图2：将里氏木霉(Trichodermareesei)QM9414株和QM9414突变株I使用ArbocelB800培养时的培养液中的溶解氧饱和度的经时变化。图3：将里氏木霉(Trichodermareesei)QM9414株和QM9414突变株I使用ArbocelB800培养时的培养液中的粘度的经时变化。图4：将里氏木霉(Trichodermareesei)QM9414株和QM9414突变株II使用ArbocelB800培养时的培养液中的溶解氧饱和度的经时变化。图5：将里氏木霉(Trichodermareesei)QM9414株和QM9414突变株II使用ArbocelB800培养时的培养液中的粘度的经时变化。具体实施方式本专利技术具有通过在作为本来蛋白质的制造能力优异的微生物的木霉属丝状菌的亲本株中导入突变，而能够将培养液的粘度保持得较低的特征。因此，本专利技术中使用的木霉属丝状菌的亲本株不限于野生株，以蛋白质制造能力提高的方式进行了改良的木霉属丝状菌的突变株也优选作为亲本株使用。例如，木霉属丝状菌的突变株中，可以利用通过诱变剂、紫外线照射等施加突变处理从而蛋白质的制造性提高了的突变株作为上述亲本株。作为所述亲本株的具体例，可列举相当于里氏木霉(Trichodermareesei)的祖先的Trichodermaparareesei(ATCCMYA-4777)、作为属于里氏木霉(Trichodermareesei)的公知的突变株的QM6a株(NBRC31326)、QM9123株(ATCC24449)、QM9414株(NBRC31329)、PC-3-7株(ATCC66589)、QM9123株(NBRC31327)、RutC-30株(ATCC56765)、CL-847株(Enzyme.Microbiol.Technol.10,341-346(1988))、MCG77株(Biotechnol.Bioeng.Symp.8,89(1978))、MCG80株(Biotechnol.Bioeng.12,451-459(1982))、橘绿木霉(Trichodermacitrinoviride)(ATCC249本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.木霉属丝状菌突变株，其特征在于，具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变，该突变株的培养液的粘度与不具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变的亲本株相比降低。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180730 JP 2018-1424251.木霉属丝状菌突变株，其特征在于，具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变，该突变株的培养液的粘度与不具有β-衔接蛋白大亚基的功能缺失或降低的突变的亲本株相比降低。


2.木霉属丝状菌突变株，其特征在于，构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列中具有突变，该突变株的培养液的粘度与构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列中不具有突变的亲本株相比降低。


3.根据权利要求2所述的木霉属丝状菌突变株，所述氨基酸序列的突变是构成β-衔接蛋白大亚基的氨基酸序列的从N末端侧起第300位的谷氨酰胺残基向除谷氨酰胺以外的氨基酸残...

【专利技术属性】
技术研发人员：加川雄介，平松绅吾，山田胜成，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP