一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法技术

本发明专利技术公开了一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，依次按以下步骤进行：（1）配制血红蛋白（Hb）和待测物溶液；（2）取相同体积的Hb溶液，分别向其中添加体积相同的待测物溶液或生理盐水，混匀，静置；（3）用酶标仪进行吸光度测定，比较待测物溶液组、生理盐水组的吸光度，得到

【技术实现步骤摘要】
一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法
本专利技术涉及药学检测领域，特别是一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法。
技术介绍
莪术油是从中药莪术（姜科植物蓬莪术CurcumaphaeocaulisVal.、广西莪术CurcumakwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang或温郁金CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling的干燥根茎）中提取出的挥发油成分。已有相关研究证明，莪术油具有免疫激活、抗癌、抗炎及抗病毒等作用；根据不同的治疗目的，临床上应用的剂型有栓剂、软膏剂和注射剂等。莪术油中的主要化学成分为倍半萜类成分，如莪术酮、莪术醇、榄香烯等。2004年12月17日国家药品监督管理局药品不良反应通报（第7期）莪术油注射液的不良反应中发布了关于含有莪术油的相关制剂的不良反应情况，呼吸困难是其不良反应之一。2007年发表于《中国药事》的《81例莪术油不良反应分析》中报道了莪术油引起的不良反应的临床表现主要为憋气，呼吸困难等。这些文献报道只是对莪术油临床的不良反应现象进行了现象分析，并未对其临床应用的安全性早期预警建立相应的评价方法，也未明确引起呼吸困难的物质基础（即未阐释莪术油中的什么成分会引起呼吸困难），导致临床上该问题仍未有效解决、未实现早期预警。2018年发表于《中国肺癌杂志》的《胸腔注射榄香烯致严重不良反应7例病例系列分析》中对榄香烯注射液引发的不良反应案例进行了分析，发现榄香烯注射液的不良反应主要表现为呼吸困难、憋喘，这与莪术油的不良反应相似，但同样只是表征或描述相关的临床不良反应表型，并未对其临床应用的安全性早期预警建立相应的评价方法，也未对其引起不良反应的作用机制或过程进行阐释。中国专利CN103242275A公开了莪术中愈创木烷型和桉烷型倍半萜类化合物的组合物可作为发病机制与一氧化氮的代谢异常有关的肿瘤、炎症、免疫等疾病的治疗，该专利只介绍了部分莪术油中倍半萜类化合物的药理活性，并未涉及引发呼吸困难不良反应这一现象。因鉴于此，特提出此专利技术。
技术实现思路
本专利技术提供了一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，用于为主要成分为莪术油中倍半萜类化合物的药物或相关制剂在临床上的安全用药提供早期预警。所述方法，依次按以下步骤进行：（1）配制血红蛋白（Hb）和待测物溶液；（2）取相同体积的Hb溶液，分别向其中添加体积相同的待测物溶液或生理盐水，混匀，静置；（3）用酶标仪进行吸光度测定，比较待测物溶液组、生理盐水组的吸光度，得到r值，若r＞1.5则说明该浓度待测物溶液有导致呼吸困难的不良反应的风险；其中，；式中OD是待测物溶液与Hb作用后，在波长280nm处的吸光度值；ODHb是生理盐水与Hb作用后，在波长280nm处的吸光度值。优选的，步骤（1）中，配制的Hb溶液浓度为2mg/mL。优选的，步骤（2）中，取用的待测物溶液和生理盐水的体积均为100μL。优选的，添加的Hb溶液体积为100μL。优选的，步骤（2）中采用在振荡器上震荡5s混匀。优选的，步骤（2）中的静置为25℃条件下静置10min。优选的，步骤（3）中吸光度测定的条件为37℃下，230-400nm光谱扫描，且步长为5nm。相比于现有技术，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了莪术油中倍半萜类化合物可以与血红蛋白结合，并引起血红蛋白的α-螺旋发生解螺旋，使血红蛋白载氧量降低，从而导致呼吸困难的不良反应的发生，并进一步公开了一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，为莪术油中倍半萜类化合物的药物或相关制剂在临床上的安全用药提供早期预警。附图说明图1是莪术油中倍半萜类化合物β-榄香烯（BE）结构式；图2是β-榄香烯对大鼠动脉氧分压的影响结果图；图3是β-榄香烯对大鼠动脉二氧化碳分压的影响结果图；图4是β-榄香烯对大鼠动脉血pH的影响结果图；图5是β-榄香烯对大鼠动脉血氧饱和度的影响结果图；图6是β-榄香烯对大鼠总血红蛋白的影响结果图；图7是β-榄香烯对大鼠氧合血红蛋白的影响结果图；图8是β-榄香烯与血红蛋白的相互作用结果图；图9是β-榄香烯与血红蛋白相互作用的拟合结果图；图10是β-榄香烯对血红蛋白结构的影响结果图。图11是β-榄香烯对血红蛋白紫外吸光度的影响结果图。具体实施方式为进一步阐述本专利技术为达成预定专利技术目的所采取的技术手段及结果，本专利技术以莪术油中β-榄香烯为例，以下以较佳实施例，对依据本专利技术申请的具体实施方式、技术方案及特征，详细说明如后。下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。专利技术以下实施例选用的主要材料及来源分别如下：莪术油中倍半萜类化合物β-榄香烯（β-elemene，(1S,2S,4R)-1-乙烯基-甲基-2,4-二(1-甲基乙烯基)环己烷），BE，结构式如图1所示，纯度≥98%，购自成都曼斯特生物科技有限公司，CAS：33880-83-0）；槲皮素（quercetin，3,3’,4’,5,7-五羟基黄酮，纯度≥98%，购自成都曼斯特生物科技有限公司，CAS：117-39-5）；血红蛋白（hemoglobin，Hb，购自美国Sigma公司，货号：H7379）；生理盐水（北京双鹤制药有限公司）；手术器械、G3+血气片（北京市斑珀斯技贸有限责任公司）；雅培i-STAT300便携式手执血气分析仪（美国i-STAT公司）；BL-420E+生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；水合氯醛（大连美仑生物科技有限公司）；96孔板（美国Corning公司）；微孔滤膜（0.22μm，德国SartoriusStedimBiotech公司）；1.5mL/50mL/10mL离心管（美国Corning公司）；DMSO（D8418，美国Sigma公司）；吐温80（Tween80，美国Sigma公司）；PBS-P10×（GEhealthcare）；涡旋混合器（VortexGenie2，美国ScientificIndustries公司）；酶标仪（美国Bio-Tek）；微孔板恒温振荡器（MB100-4A）；CM5传感器芯片（美国BR100530）；超纯水机（美国Milli-QIntegral5.5Kit）；表面等离子体共振检测仪（美国BiacoreT2000）；圆二色光谱仪（英国Chirascan）。实施例一β-榄香烯（BE）致大鼠呼吸困难时对血气的影响配制BE溶液：精密称取BE对照品，用8.8%Tween80水溶液溶解，配置成浓度为1.5mg/mL的BE溶液。取12只SPF级SD雄性大鼠（6周龄，体重200±25g）购自北京维通利华实验动物技术有限公司，其生产许可证编号为：SCXK（京）2016-0006。研究过程所涉及的动物实验均经过伦理委员会批准。实验大鼠饲养条件为标准光照-黑暗周期为12h，温度为22±1℃，相对湿度为60±5%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，其特征在于，依次按以下步骤进行：/n（1）配制血红蛋白（Hb）和待测物溶液；/n（2）取相同体积的Hb溶液，分别向其中添加体积相同的待测物溶液或生理盐水，混匀，静置；/n（3）用酶标仪进行吸光度测定，比较待测物溶液组、生理盐水组的吸光度，得到

【技术特征摘要】
1.一种评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，其特征在于，依次按以下步骤进行：
（1）配制血红蛋白（Hb）和待测物溶液；
（2）取相同体积的Hb溶液，分别向其中添加体积相同的待测物溶液或生理盐水，混匀，静置；
（3）用酶标仪进行吸光度测定，比较待测物溶液组、生理盐水组的吸光度，得到r值，若r＞1.5则说明该浓度待测物溶液有导致呼吸困难的风险；其中，；式中OD是待测物溶液与Hb作用后，在波长280nm处的吸光度值；ODHb是生理盐水与Hb作用后，在波长280nm处的吸光度值。


2.根据权利要求1所述评价莪术油中倍半萜类化合物不良反应的方法，其特征在于，步骤（1）中，配制的Hb溶液浓度为2mg/mL。


3.根据权利要求1所述评价莪术油中...

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢丹，闫琰，王晓芳，王真真，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京;11