海洋生物碱类CDK2抑制剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及海洋生物及医药技术领域，具体地说，涉及一种制备海洋生物碱类CDK2抑制剂的方法及应用。将冷冻保存的海绵Aaptos suberitoides样品用粉碎机粉碎后，在室温下用甲醇动态冷浸提取3次，每次浸泡5天；合并3次提取液，40℃温度条件下减压浓缩；然后，用无水甲醇溶解脱盐3次，制得浸膏；再经硅胶柱层析、ODS柱层析、高效液相色谱分离所制备的化合物A、B、C对CDK2激酶具有显著的抑制活性，通过抑制CDK2激酶的活性阻止肿瘤细胞的有丝分裂，进一步起到抗肿瘤作用。同时，该类生物碱结构简单，人工合成也易于实现，可以作为新型CDK2激酶抑制剂，对于开发CDK2抑制剂类抗肿瘤药物具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】
海洋生物碱类CDK2抑制剂的制备方法及其应用
本专利技术涉及海洋生物及医药
，具体地说，涉及一种从海洋海绵Aaptossuberitoides中分离制备海洋生物碱类CDK2抑制剂的方法及应用。
技术介绍
肿瘤是危害人类生命健康的全球性问题，近年来在全球范围内呈现逐渐上升趋势，预计未来20年每年新发癌症病例将达到2200万，同期癌症死亡数将上升到1300万例，研发有效的抗癌药物仍然是肿瘤治疗的首要任务。肿瘤的根本特征在于细胞的无限增殖，究其原因在于细胞周期调控的紊乱，通过对细胞周期调控的干预，限制肿瘤细胞的无限增殖是治疗肿瘤的重要手段之一。细胞周期的主要调控者周期蛋白依赖性激酶(cyclindependentkinases,CDKs)作为细胞内重要的信号转导分子，在细胞周期调控中发挥关键作用，近年来受到研发人员的高度关注。CDKs已发现13种亚型，但只有CDK1、CDK2、CDK4和CDK6直接参与细胞周期的调控，其中CDK2控制细胞周期由G1向S期转化，是细胞周期调控的核心元件。当长期不利因素刺激时，CDK2会表达异常，进而引起细胞周期紊乱、细胞异常增殖，最终导致肿瘤的发生。CDK2的过度活化在乳腺癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤中普遍存在，CDK2-cyclin激酶活性的上调还可以推动肿瘤的发生和发展。越来越多的研究证明，抑制CDK2激酶活性可以诱导肿瘤细胞凋亡，但对正常细胞几乎没有损伤。鉴于CDK2与肿瘤细胞发生发展的密切关联性和至关重要性，以CDK2作为抗癌靶标已成为抗肿瘤药物研发的热点，目前约有上百种的CDK2抑制剂相继被合成，但是由于特异性差、副作用大以及自身理化性质的局限性等缺陷，至今还没有真正应用于临床的CDK2抑制剂。海绵Aaptossuberitoides属于寻常海绵纲(Demospongiae)，韧海绵目(Hadromerida)，皮海绵科(Suberitidae)，Aaptos属。其主要特征性的成分为aaptamine类生物碱，该类生物碱具有具有显著的抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗氧化等生物活性。因此，深入研究海绵Aaptossuberitoides中的活性成分，挖掘具有抗肿瘤活性的aaptamine类生物碱，有利于该种海绵的开发利用及抗肿瘤新药的研发。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种制备海洋生物碱类CDK2抑制剂的方法，第二目的在于提供所述海洋生物碱类CDK2抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术的第一目的采用以下技术方案实现：一种制备海洋生物碱类CDK2抑制剂的方法，其特征在于：包括以下步骤：1、原料处理：将冷冻保存的海绵Aaptossuberitoides样品用粉碎机粉碎后，在室温下用甲醇动态冷浸提取3次，每次浸泡5天；合并3次提取液，40℃温度条件下减压浓缩；然后，用无水甲醇溶解脱盐3次，制得浸膏；2、硅胶柱层析：将浸膏溶解于1.5-3倍重量的纯甲醇中，再用浸膏重量1-3倍的100-200目硅胶拌样后上硅胶柱；再分别用石油醚与丙酮体积配比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚丙酮溶液和二氯甲烷与甲醇体积配比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1的二氯甲烷甲醇溶液进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；3、ODS柱层析：取步骤2中体积配比为20:1的二氯甲烷甲醇溶液洗脱得到的组分，过ODS柱，再分别用甲醇与水配比为1:4、3:7、4:6、5:5、6:4的甲醇水进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；4、高效液相色谱分离：4A、取步骤3中甲醇与水配比为4:6的甲醇水洗脱得到的组分通过高效液相分析，用ODSC18柱制备可得化合物A，保留时间为23.7分钟；4B、取步骤3中甲醇与水配比为6:4的甲醇水洗脱得到的组分通过高效液相分析，用ODSC18柱制备可得两种化合物，即：化合物B，保留时间为38.2分钟；化合物C，保留时间为42.0分钟。进一步地说，步骤4A中，所述化合物A的分子式为：C18H19N3O4，分子量为341，结构式为：所述ODSC18柱采用YMCODSC18柱，型号为10×250mm,填料粒径为5μm，流动相为乙腈/水40:60v/v，流速为1.5mL/min。进一步地说，步骤4B中，所述化合物B的分子式为：C20H17N3O2，分子量为331，结构式为：所述化合物C的分子式为：C17H19N3O2，分子量为297，结构式为：所述ODSC18柱采用YMCODSC18柱，型号为10×250mm,填料粒径为5μm，流动相为乙腈/水23:77v/v，流速为1.5mL/min。进一步地说，步骤2中，所述硅胶柱的填料硅胶的规格为200-300目或者300-400目。本专利技术的第二目的采用以下技术方案实现：所述的海洋生物碱类CDK2抑制剂，具体地说，是采用上述制备方法制备的化合物A、B、C在制备抗肿瘤药物中的应用。有益效果：本专利技术所述方法所制备的化合物A、B、C对CDK2激酶具有显著的抑制活性，通过抑制CDK2激酶的活性阻止肿瘤细胞的有丝分裂，进一步起到抗肿瘤作用。同时，该类生物碱结构简单，人工合成也易于实现，可以作为新型CDK2激酶抑制剂，对于开发CDK2抑制剂类抗肿瘤药物具有重要的指导意义。附图说明图1为本专利技术所述化合物的制备方法工艺流程图；图2为本专利技术化合物A的核磁共振氢谱(1HNMR)图；图3为本专利技术化合物A的核磁共振碳谱(13CNMR)图；图4为本专利技术化合物B的核磁共振氢谱(1HNMR)图；图5为本专利技术化合物B的核磁共振碳谱(13CNMR)图；图6为本专利技术化合物C的核磁共振氢谱(1HNMR)图；图7为本专利技术化合物C的核磁共振碳谱(13CNMR)图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步说明。实施例：参照图1所示，本实施例所述制备海洋生物碱类CDK2抑制剂的方法，包括以下步骤：1、原料处理：海绵Aaptossuberitoides于2012年采自于西沙永兴岛海域，并将其于-20℃冷冻保存；将冷冻保存的海绵Aaptossuberitoides样品(湿重2.5kg)用粉碎机粉碎后，在室温下用甲醇动态冷浸提取3次，每次浸泡5天；合并3次提取液，40℃温度条件下减压浓缩；然后，用无水甲醇溶解脱盐3次，制得浸膏162.5g。2、硅胶柱层析：将浸膏溶解于1.5-3倍重量的纯甲醇中，再用浸膏重量1-3倍的100-200目硅胶拌样后上硅胶柱(填料硅胶的规格为200-300目或者300-400目)；再分别用石油醚与丙酮体积配比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚丙酮溶液和二氯甲烷与甲醇体积配比为20:1、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海洋生物碱类CDK2抑制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)原料处理：将冷冻保存的海绵Aaptos suberitoides样品用粉碎机粉碎后，在室温下用甲醇动态冷浸提取3次，每次浸泡5天；合并3次提取液，40℃温度条件下减压浓缩；然后，用无水甲醇溶解脱盐3次，制得浸膏；/n(2)硅胶柱层析：将浸膏溶解于1.5-3倍重量的纯甲醇中，再用浸膏重量1-3倍的100-200目硅胶拌样后上硅胶柱；再分别用石油醚与丙酮体积配比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚丙酮溶液和二氯甲烷与甲醇体积配比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1的二氯甲烷甲醇溶液进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；/n(3)ODS柱层析：取步骤(2)中体积配比为20:1的二氯甲烷甲醇溶液洗脱得到的组分，过ODS柱，再分别用甲醇与水配比为1:4、3:7、4:6、5:5、6:4的甲醇水进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；/n(4)高效液相色谱分离：/n(4A)取步骤(3)中甲醇与水配比为4:6的甲醇水洗脱得到的组分通过高效液相分析，用ODS C18柱制备可得化合物A，保留时间为23.7分钟；/n(4B)取步骤(3)中甲醇与水配比为6:4的甲醇水洗脱得到的组分通过高效液相分析，用ODS C18柱制备可得两种化合物，即：化合物B，保留时间为38.2分钟；化合物C，保留时间为42.0分钟。/n...

【技术特征摘要】
1.一种海洋生物碱类CDK2抑制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)原料处理：将冷冻保存的海绵Aaptossuberitoides样品用粉碎机粉碎后，在室温下用甲醇动态冷浸提取3次，每次浸泡5天；合并3次提取液，40℃温度条件下减压浓缩；然后，用无水甲醇溶解脱盐3次，制得浸膏；
(2)硅胶柱层析：将浸膏溶解于1.5-3倍重量的纯甲醇中，再用浸膏重量1-3倍的100-200目硅胶拌样后上硅胶柱；再分别用石油醚与丙酮体积配比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚丙酮溶液和二氯甲烷与甲醇体积配比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1的二氯甲烷甲醇溶液进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；
(3)ODS柱层析：取步骤(2)中体积配比为20:1的二氯甲烷甲醇溶液洗脱得到的组分，过ODS柱，再分别用甲醇与水配比为1:4、3:7、4:6、5:5、6:4的甲醇水进行梯度洗脱，分别收集各部分的洗脱液并浓缩，用TLC薄层色谱监测并合并相同的部分；
(4)高效液相色谱分离：
(4A)取步骤(3)中甲醇与水配比为4:6的甲醇水洗脱得到的组分通过高效液相分析，用ODSC18柱制备可得化合物A，保留时间为23.7分钟；
(4B)取步骤(3)中甲醇与水配比为6:4的甲醇水洗脱得到的组分通过高...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫凯凯，贺倩倩，苗双，满玉清，
申请(专利权)人：滨州医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37