一种微载体培养细胞计数方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，涉及一种微载体培养细胞计数方法，包括：取样离心：取适量微载体培养细胞得到混悬液，离心后去上清获得沉淀物；释放重悬：所述沉淀物加适量溶解剂，和洗涤剂混液重悬后静置；染色计数：加染色剂染色后混匀计数。本发明专利技术中将难溶于水的微载体，在引入溶解剂和洗涤剂的情况下，微载体可以快速和细胞分离并且溶解，并且溶解剂和洗涤剂破坏细胞膜后使染色剂快速对细胞核染色。该计数方法原料成本低，方法温和，计数结果准确过程快捷，在微载体计数方面有极大应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种微载体培养细胞计数方法
本专利技术属于细胞培养领域，特别涉及微载体培养细胞的计数方法。
技术介绍
微载体培养是目前公认的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，容易放大，广泛用于培养各种类型细胞。为了解细胞的增殖情况，需要统计细胞数量。基于可溶解的微载体进行计数，需加入酶类等物质溶解微载体，然后将微载体和细胞分离后取细胞悬液进行计数。而对于酶不可溶解微载体，细胞在微载体上生长密集，不易脱落下来，使用二维(2D)平面培养方法中的传统酶消化方式，需要离心、磷酸缓冲盐溶液(PBS)重悬、离心、胰蛋白酶消化细胞、离心、以及台盼蓝或者结晶紫染色等多个步骤以实现微载体上生长细胞的计数，整个过程需大约40分钟，不仅耗时耗力，而且细胞释放不完全，很容易仍然贴在微载体上，消化下来的细胞容易结团成片，使计数得到的细胞数量与实际细胞数量有较大差别。而且，现有酶不可溶解微载体培养细胞计数方法，大多数采用荧光类染色测吸光率染色计数，这种技术方法往往需要专业的设备，且实验过程中需要提供标准曲线等指标作为参照，以及验证方法的准确性，这使得计数本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微载体培养细胞计数方法，其特征在于：包括：/n取样离心：取适量微载体培养得到细胞混悬液，离心后去上清获得沉淀物；/n释放重悬：所述沉淀物加适量溶解剂，和洗涤剂混液重悬后静置；/n染色计数：加染色剂染色后混匀计数。/n

【技术特征摘要】
1.一种微载体培养细胞计数方法，其特征在于：包括：
取样离心：取适量微载体培养得到细胞混悬液，离心后去上清获得沉淀物；
释放重悬：所述沉淀物加适量溶解剂，和洗涤剂混液重悬后静置；
染色计数：加染色剂染色后混匀计数。


2.根据权利要求1所述的微载体培养细胞计数方法，其特征在于：所述溶解剂为酸性试剂或碱性试剂，其中，酸性试剂选自柠檬酸、磷酸、柠檬酸盐、磷酸盐、马来酸盐、甘氨酸、苹果酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乙酸、氯化氢、甲酸、乳酸、苹果酸和抗坏血酸的生物缓冲剂中的至少一种；碱性试剂选自碳酸氢钠、三乙胺等胺类、吡啶、哌啶、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钙和氨中的至少一种。


3.根据权利要求1-2所述的微载体培养细胞计数方法，其特征在于：所述洗涤剂选自TritonX-15，TritonX-100，TritonX-114，TritonN-57，TritonN-101，TritonQS-15，IgepalCA630，NP-40和Brij96中的至少一种。


4.根据权利要求3所述的微载体培养细胞计数方法，其特征在于：所述微载体与细胞培养的时间为1-15天，优选3-6天。


5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙振华，左丽娜，黄哲，黄珂，
申请(专利权)人：江苏普瑞康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32