一种从齿叶黄皮中分离纯化佛手柑内酯的方法技术

本发明专利技术公开了一种从齿叶黄皮中分离纯化佛手柑内酯的方法，步骤为：S1，提取物粗品的制备：将齿叶黄皮的干燥枝叶加入乙醇水溶液提取，过滤，减压浓缩得浸膏；浸膏加水混悬，石油醚萃取，回收溶剂，得提取物粗品；S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为6:4:1:5:5的环己烷/乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，主机转速为850r/min，流动相流速为2mL/min，待两相平衡后，进样，同时开始记录色谱图，收集140min～165min洗脱液，减压浓缩至干。该方法步骤简单且充分利用了齿叶黄皮的原料优势。了齿叶黄皮的原料优势。了齿叶黄皮的原料优势。

【技术实现步骤摘要】
一种从齿叶黄皮中分离纯化佛手柑内酯的方法


[0001]本专利技术属于化学领域，具体涉及一种从齿叶黄皮中分离纯化佛手柑内酯的方法。

技术介绍

[0002]佛手柑内酯是一种香豆素类化合物，广泛存在于天然植物中，具有抗癌、镇痛等多种药理活性。佛手柑内酯的化学结构如下。
[0003][0004]胡利锋等提供了一种硅胶柱色谱-高速逆流色谱法分离纯化羌活中佛手柑内酯的方法(硅胶柱色谱-高速逆流色谱法分离纯化羌活中佛手柑内酯，中草药，第44卷第6期2013年3月)，但是该方法仍需借助于繁琐不易大生产使用的硅胶柱色谱。而且，以羌活为原料成本较高。
[0005]高速逆流色谱是一种连续高效的液-液分配色谱技术。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异而实现，因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题，样品回收率高，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然产物中有效成分的分离。
[0006]齿叶黄皮(Clausena dunniana)为芸香科黄皮属植物，主要分布于我国海南、广东、广西、云南、贵州、四川及湖南省区。枝叶民间入药，有疏风解表，行气止痛，截疟杀虫的功能，用于上感、疟疾、腹痛以及胃炎等。陈启胜等研究发现，齿叶黄皮中也含有佛手柑内酯(齿叶黄皮中香豆素类化学成分研究，广东化工，2016年第11期)。该研究依赖于硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和制备型高效液相等多种繁琐手段，难以推广使用。
[0007]如果以齿叶黄皮为原料制备佛手柑内酯可以发挥成本优势。但是，是否能采用高速逆流色谱将齿叶黄皮中的佛手柑内酯与齿叶黄皮所含有的其他化合物分离开从而制备得到高纯度的佛手柑内酯尚是未知数。

技术实现思路

[0008]本专利技术旨在提供一种从齿叶黄皮中分离纯化佛手柑内酯的方法。
[0009]实现本专利技术目的的技术方案为：
[0010]一种制备佛手柑内酯的方法，步骤如下：
[0011]S1，提取物粗品的制备：将齿叶黄皮的干燥枝叶粉碎，加入乙醇水溶液热回流提取，过滤，减压浓缩得浸膏；浸膏加水混悬，用石油醚萃取，回收溶剂，得提取物粗品；
[0012]S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为6:4:1:5:5的环己烷/乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置，将上相、下相分开，超声脱气；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离
管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取用流动相溶解的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，收集140min～165min洗脱液，减压浓缩至干即得。
[0013]优选地，热回流提取的溶剂为90％乙醇水溶液。
[0014]优选地，热回流提取步骤中料液比为1kg/5L。
[0015]优选地，热回流提取步骤中提取3次，每次2h。
[0016]优选地，HSCCC分离的紫外检测波长为254nm。
[0017]优选地，HSCCC分离温度为30℃。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供的方法借助于溶剂萃取—高速逆流色谱即可从齿叶黄皮中分离得到高纯度的佛手柑内酯，比现有技术步骤简单，且充分利用了齿叶黄皮的原料优势。
附图说明
[0020]图1为高速逆流色谱图；
[0021]图2为HPLC色谱图。
具体实施方式
[0022]一、仪器和试剂
[0023]TBE-300B型高速逆流色谱仪为上海同田生物技术有限公司产品。
[0024]Agilent-1260型高效液相色谱仪为安捷伦公司产品。
[0025]色谱柱Diamonsil C18(250mm
×
4.6mm，5μm)为迪马科技产品。
[0026]高速逆流所用有机溶剂均为常规的分析纯溶剂，高效液相色谱所用有机溶剂均为常规的色谱纯溶剂，水为去离子水。
[0027]佛手柑内酯对照品购自上海源叶生物，纯度≥98％。
[0028]二、方法和结果
[0029]1、提取物粗品的制备
[0030]将齿叶黄皮的干燥枝叶粉碎过40目筛，按照料液比1kg/5L加入90％乙醇水溶液，热回流提取2h，重复提取2次，合并3次提取液，过滤，减压浓缩得浸膏。浸膏加水混悬，用石油醚等体积萃取3次，合并石油醚萃取液，回收溶剂，得提取物粗品。
[0031]2、提取物粗品HSCCC分离
[0032]以体积比为6:4:1:5:5的环己烷/乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置12h，将上相、下相分开，超声脱气30min备用。
[0033]以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取10mL用流动相溶解的、浓度为30mg/mL的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，紫外检测波长为254nm，分离温度为30℃。
[0034]根据HSCCC色谱图(如图1所示)收集140min～165min洗脱液，减压浓缩至干，得佛手柑内酯。mp.190-193℃；HR-ESI-MS m/z:217.0511[M+H]+
，根据HR-ESI-MS确定分子式为C
12
H8O4。
13
CNMR(CDCl3,125MHz)δppm:160.9(s,C-2),113.6(d,C-3),139.6(d,C-4),146.8
(s,C-5),114.0(s,C-6),159.2(s,C-7),94.7(d,C-8),153.5(s,C-9),106.2(s,C-10),150.7(d,C-2'),106.5(d,C-3'),61.2(q,-OMe).
[0035]使用HPLC测定佛手柑内酯的纯度，HPLC色谱条件如下：
[0036]色谱仪：Agilent-1260型高效液相色谱仪
[0037]色谱柱：Diamonsil C18(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0038]流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)，二元梯度洗脱(0～60min，5％A
→
100％A)；
[0039]流速：1.0mL/min；
[0040]检测波长：320nm；
[0041]柱温：30℃；
[0042]进样量：10μL。供试品溶液为HSCCC制备的佛手柑内酯，浓度为1mg/mL；对照品溶液为佛手柑内酯对照品，浓度为0.1mg/mL。
[0043]HPLC色谱图如图2所示，供试品溶液与对照品溶液于相同保留时间出峰，基本未见杂质峰，HPLC归一化纯度99.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备佛手柑内酯的方法，其特征在于，步骤如下：S1，提取物粗品的制备：将齿叶黄皮的干燥枝叶粉碎，加入乙醇水溶液热回流提取，过滤，减压浓缩得浸膏；浸膏加水混悬，用石油醚萃取，回收溶剂，得提取物粗品；S2，提取物粗品HSCCC分离：以体积比为6:4:1:5:5的环己烷/乙酸乙酯/正丁醇/甲醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置，将上相、下相分开，超声脱气；以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪其昌，
申请(专利权)人：淮安市厚沐医疗技术咨询中心，
类型：发明
国别省市：