免疫提取物及生产方法技术

本发明专利技术涉及从可食用燕窝中制备提取物的方法、燕窝提取物及燕窝提取物的用途。该方法包括制备可食用燕窝(EBN)混合物；以及将该混合物与提取溶液接触以结合该混合物中的分子，其中该提取溶液包括至少一种结合部分，该结合部分选自包括以下的组：调理素结合部分、补体蛋白结合部分、凝集素结合部分、纤胶凝蛋白结合部分、胶原凝集素结合部分和正五聚蛋白结合部分。部分。部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫提取物及生产方法


[0001]本专利技术涉及从包含燕窝原料和任选的其他材料的混合物中制备免疫提取物的方法，以及可从这些方法获得的提取物。

技术介绍

[0002]可食用燕窝(EBN)是由东南亚地区天然存在的金丝燕的唾液制成的巢。这些被遗弃的鸟巢是从野外或从专门为金丝燕建造的房屋中收获的。据报道，EBN表现出多种生物活性和营养价值，包括促有丝分裂反应的潜能、表皮生长因子(EGF)样活性、抗流感病毒、血细胞凝集抑制活性、凝集素结合活性、改善骨强度和真皮厚度以及激素水平。根据应用，EBN的加工可以不同。为了阐明可食用燕窝的生物学功能和医学功能，人们正在进行研究。
[0003]目前，EBN是以汤或其他饮品的形式使用的，通过将EBN于水中煮沸并食用。在这种情况下，EBN的分子是人体很难消化和吸收的大的生物大分子。因此，以这种方式制备的EBN的有益成分的生物利用度低，且EBN的有益效果没有被最大化。
[0004]然而，食用整个EBN可能会导致免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏反应(Goh等人,2001,J.Allergy Clin.Immun.,107(6),1082
–
1088)，并且EBN被认为是食物诱发过敏反应的最常见原因，这种过敏反应在儿童中可能危及生命。
[0005]粗EBN的另一问题是由于自然原因或加工期间有意添加而存在不良化合物。EBN的掺杂通常会降低EBN的质量。使用的掺杂物包括猪皮、琼脂、红海藻和卡拉亚胶。为了掩盖掺杂物和废物，经常添加漂白剂。
[0006]尤其值得关注的是亚硝酸盐的存在，其主要来源于金丝燕的粪便。亚硝酸盐也可能在加工期间被添加到白色燕窝中，以使其变成更具有商业价值的红色燕窝。过量亚硝酸盐的摄入已经与癌症相关联(Bryan等人，Food Chem.Toxicol.2012，50(10)，3646
‑
3654)。
[0007]病毒、细菌和真菌可能在野外或在工厂中在加工期间污染EBN。对野生鸟类禽流感的担忧可能导致整个EBN本身的进口受到限制。
[0008]因此，需要改进EBN的加工，以提高整体质量和对消费者有益的性质。通过从EBN中提取和分离所需的化合物，避免或最小化有害影响，同时最大化EBN的治疗效益。
[0009]此外，生物活性分子，如调理素、补体蛋白、凝集素、纤胶凝蛋白(ficolin)、胶原凝集素和正五聚蛋白，主要是从动物部分或在生物反应器中克隆的遗传修饰微生物中提取的。对于提取的产物的纯度和产量以及安全性方面缺乏一致性标准。本文所述的工艺解决了安全性和可持续性问题，因为可食用燕窝(EBN)或含有雪蛤膏(hasma)或珊瑚海藻(coral seaweed)的EBN混合物是此类生物活性因子的非常丰富且大量的来源。
[0010]在本说明书中列出或讨论明显在先公布的文件不一定被视为承认该文件是本领域现有技术的一部分或是公知常识。
[0011]本文提及的任何文件均通过援引在此整体并入本文。

技术实现思路

[0012]在本专利技术的第一方面中，提供了从可食用燕窝中制备提取物的方法，该方法包括：制备可食用燕窝(EBN)混合物；以及将该混合物与提取溶液接触以结合该混合物中的分子，其中该提取溶液包括至少一种结合部分，该结合部分选自包括以下的组：调理素结合部分、补体蛋白结合部分、凝集素结合部分、纤胶凝蛋白结合部分、胶原凝集素结合部分和正五聚蛋白结合部分。
[0013]术语“接触”是指EBN混合物和提取溶液的成分相互作用，优选地，该相互作用应导致结合部分和靶标分子之间形成可逆的键。
[0014]术语“结合部分”是指任何分子和/或官能团，其选择性地靶向并结合于感兴趣的分子。例如，调理素结合部分是结合于调理素分子的任何分子。合适的结合部分的实例可包括抗体、抗体片段、抗体模拟物、具有受体的细胞以及模拟受体的结合功能的分子。例如，“凝集素结合部分”可以是在细胞表面表达凝集素结合受体的细胞，等等。在其他实例中，“凝集素结合部分”包括结合凝集素的抗体，或抗体、抗体片段或抗体模拟物的凝集素(抗原)结合位点，等等。结合部分应优选地结合于K
D
在微摩尔或更低区域中的分子。例如，结合部分可结合于具有小于10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7、10
‑8、10
‑9、10
‑
10
、10
‑
11
、10
‑
12
或更小的K
D
的分子。K
D
值越低，结合亲和力越强。提取溶液的结合部分优选地能够以是其结合于其他非靶标分子的亲和力的至少二倍、10倍、50倍、100倍或更大的亲和力结合于其靶标。
[0015]要使用的结合部分可以是天然存在的、半合成的或合成的，例如可以使用能够促进将结合部分从EBN混合物中分离的带标签的结合部分。此外，用于提取靶标分子的结合部分可以结合于固体支撑体。该固体支撑体可由铁磁性材料或常规惰性支撑材料制成。该结合部分可以是商购的，并且可以这样使用。如果需要对结合部分进行修饰，则有许多如文献中通常所知的方法来修饰以获得所需的特性。
[0016]图9示出了具有所需受体的细胞可以是如何产生的。在图9图片(a)中，所有的mRNA都是从正常表达感兴趣的受体的细胞中提取的，并反转录成双链cDNA。整个cDNA群体被插入到质粒表达载体中，在强启动子和转录终止子之间。质粒被转染到通常不表达感兴趣受体的细菌细胞中。得到的cDNA库被分成多个池，每个包含约1000个不同的cDNA。图9的图片(b)进一步示出了，每个池中的质粒被转染到缺乏感兴趣受体的培养细胞(例如，COS细胞)的群体中。含有编码所需受体的cDNA的转染细胞才合成它；其他转染细胞产生不相关的蛋白质。为了检测产生所需受体的少数细胞，向含有转染细胞的培养皿中添加特异于该受体的放射性标记配体；将该细胞固定并经受放射自显影。合成特异性受体的阳性细胞将覆盖有许多粒。可替换地，转染的细胞可以用荧光标记的配体处理，并通过荧光激活的细胞分选仪。表达受体的细胞将与荧光标记结合，并与不表达的那些细胞分离。产生阳性信号的质粒cDNA池保持在细菌中，并细分为更小的池，每个更小的池通过转染到培养的细胞中而被再次筛选。经过几个周期的筛选和细分阳性cDNA池之后，获得了编码所需受体的纯cDNA克隆。详细的方法可以在A.Aruffo和B.Seed，Molecular Cloning of a CD28 cDNA by a high
‑
efficiency COS cell expression system,Proc.Nat
’
l.Acad.Sci.USA,1987,84,8573；以及A.D
’
Andrea、H.F.Lodish和G.Wong,Expression Cloning of the murine erythropoietin recept本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从可食用燕窝中制备提取物的方法，所述方法包括：(a)制备可食用燕窝(EBN)混合物；以及(b)将所述混合物与提取溶液接触以结合所述混合物中的分子，其中所述提取溶液包括至少一种结合部分，所述至少一种结合部分选自包括以下的组：调理素结合部分、补体蛋白结合部分、凝集素结合部分、纤胶凝蛋白结合部分、胶原凝集素结合部分和正五聚蛋白结合部分。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述混合物进一步包括海藻和/或雪蛤膏。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，所述调理素结合部分具有10kDa至750kDa的分子量。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述调理素结合部分包括SEQ ID No.1。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述补体蛋白结合部分具有20kDa至7000kDa的分子量。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述补体蛋白结合部分包括SEQ ID No.2。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述凝集素结合部分具有20kDa至1000kDa的分子量。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述凝集素结合部分包括SEQ ID No.3。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述纤胶凝蛋白结合部分具有15kDa至900kDa的分子量。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述纤胶凝蛋白结合部分包括SEQ ID No.4。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，所述胶原凝集素结合部分具有15kDa至900kDa的分子量。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述胶原凝集素结合部分包括SEQ ID No.5。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述正五聚蛋白结合部分具有20kDa至1000kDa的分子量。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述正五聚蛋白结合部分包括SEQ ID No.6。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中，所述至少一种结合部分包括选自以下中的任一种：i)凝集素结合部分和调理素结合部分；ii)凝集素结合部分、补体蛋白结合部分、调理素结合部分、纤胶凝蛋白结合部分、胶原凝集素结合部分和正五聚蛋白结合部分；iii)凝集素结合部分、补体蛋白结合部分和调理素结合部分；iv)调理素结合部分和正五聚蛋白结合部分；v)纤胶凝蛋白结合部分、胶原凝集素结合部分和正五聚蛋白结合部分；
vi)补体蛋白结合部分、纤胶凝蛋白结合部分和胶原凝集素结合部分；以及vii)凝集素结合部分、调理素结合部分和胶原凝集素结合部分。16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述至少一种结合部分包括选自以下中的任一种：i)70％凝集素结合部分和30％调理素结合部分；ii)20％凝集素结合部分、20％补体蛋白结合部分、20％调理素结合部分、20％正五聚蛋白结合部分、10％纤胶凝蛋白结合部分和10％胶原凝集素结合部分；iii)50％补体蛋白结合部分、25％凝集素结合部分和25％调理素结合部分；iv)50％调理素结合部分和50％正五聚蛋白结合部分；v)40％纤胶凝蛋白结合部分、30％胶原凝集素结合部分和30％正五聚蛋白结合部分；vi)10％纤胶凝蛋白结合部分、20％胶原凝集素结合部分和70％补体蛋白结合部分；以及vii)70％胶原凝集素结合部分、20％调理素结合部分和10％凝集素结合部分。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中，制备EBN混合物包括洗涤所述混合物，以及过滤洗涤的混合物。18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述洗涤步骤包括将所述混合物暴露于第一酶溶液，以及将所述混合物和所述第一酶溶液浸泡在水中。19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述第一酶溶液包括亚硝酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：林家明，
申请(专利权)人：林家明，
类型：发明
国别省市：