比伐卢定的合成方法技术

活性药物成分(API)比伐卢定(Bivalirudin)是20个氨基酸的肽，其含有一个碱基和5个氨基酸残基。化学式为C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】比伐卢定的合成方法


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，并且本专利技术特别是涉及比伐卢定的合成方法。
[0002]常规比伐卢定合成方法耗时且工艺复杂，并且不能大规模实现，且因此本领域技术人员致力于开发新的比伐卢定合成方法。

技术介绍

[0003]固相肽合成(SPPS)是用于多肽合成的快速方法。然而，用于合成大量长肽如比伐卢定的常规SPPS既费时，又产生大量溶剂浪费。作为广泛使用的活性药物成分，比伐卢定是被指定用作抗凝剂的直接凝血酶抑制剂。开发用于制备大量高纯度比伐卢定的高效且经济的SPPS方法具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供比伐卢定的制备方法。
[0005]根据本专利技术的第一方面，提供用于生产比伐卢定的方法，比伐卢定通过使用固相肽合成(SPPS)来制备，其中该方法使用Fmoc-Leu-Wang树脂或Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂作为载体进行多肽的固相合成。
[0006]此外，多肽固相合成方法中使用的偶联剂选自由2-肟氰乙酸乙酯、N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N-二异丙基乙胺组成的组。
[0007]此外，在Fmoc脱保护方法中，加入哌啶/N,N-二甲基甲酰胺/甲酸(优选1/4体积的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺，甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪，且加热条件优选借助于水浴、油浴或微波加热反应进行2至5分钟。
[0008]此外，在反应完成之后，用N,N-二甲基甲酰胺将多肽的固相合成反应中的反应物中的每个洗涤2-3次。
[0009]此外，在树脂上的多肽固相合成反应中的氨基酸缩合反应在50至120℃的温度下进行；反应时间根据温度优选为10至30分钟。
[0010]此外，进行在固相合成反应中的多肽的氨基酸缩合反应，并在进行裂解反应之前用氮气吹扫树脂。
[0011]此外，反应中加入的三氟乙酸的纯度为95％，温度为10-50℃，且裂解反应时间为1-3小时。
[0012]此外，在多肽的固相合成反应中，所使用的氨基酸的当量是树脂的摩尔量的两倍。
[0013]此外，将粗制的比伐卢定通过Pre-HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。
[0014]此外，将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时。
附图说明
[0015]图1是比伐卢定分子结构的示意图。
[0016]图2是制备的比伐卢定的HPLC分析。
[0017]图3是制备的比伐卢定的质谱。
具体实施方式
[0018]图1所示的比伐卢定是20个氨基酸的合成肽。现在将参考具体实施例描述本专利技术。必须理解的是，这些实例仅是对本专利技术的说明，而无意于限制本专利技术的范围。除非另有说明，否则百分比和份数均以重量计。除非另有说明，否则以下实例中使用的实验材料和试剂可从商业来源获得。
[0019]表1氨基酸缩写的列表
[0020][表1][0021]名称三字母符号单字母符号精氨酸ArgR天冬酰胺AsnN天冬氨酸acidD苯丙氨酸PheF谷氨酸acidE甘氨酸GlyG异亮氨酸IleI亮氨酸LeuL苯丙氨酸PheF脯氨酸ProP酪氨酸TyrY
[0022]表2化学试剂缩写的列表
[0023][表2][0024][0025][0026]表3中间体和Fmoc保护的氨基酸的列表
[0027][表3][0028][0029][0030]本专利技术提供通过固相肽合成的使用Fmoc-Leu-wang树脂的比伐卢定合成方法，包括以下步骤：
[0031]步骤1，芴基甲氧基羰基-亮氨酸-Wang树脂可直接购买(西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich))，它可减少第一步的合成并加快合成效率；
[0032]步骤2：在氮气下将树脂于DMF中溶胀5至15分钟；
[0033]步骤3：在以下条件下，除去芴基甲氧基羰基氯保护基：甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪在50℃至120℃下于DMF中保持2分钟。
[0034]步骤4：制备芴基甲氧基羰基-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂：将步骤1中获得的芴基甲氧基羰基-亮氨酸-Wang树脂脱保护，用DMF洗涤，且使Fmoc-L-Tyr-(叔丁基)-OH在多肽偶联剂的条件下经缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
[0035]步骤5：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂：将步骤2中获得的Fmoc-二肽脱保护并洗涤，且然后使之在肽偶联剂的条件下与Fmoc-L-谷氨酸(叔丁氧基)-OH反应，得到芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
[0036]步骤6：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将所得的芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁
基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并加入Fmoc-L-谷氨酸(叔丁氧基)-OH，且然后在肽偶联剂的条件下反应，得到芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁基(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-吡啶(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
[0037]步骤7：制备芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤，且然后在多肽偶联剂的条件下与芴基甲氧基羰基-脯氨酸-OH反应，获得芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。谷氨酸-(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
[0038]步骤8：制备芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸-(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
[0039]步骤9：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤6中获得的芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤，且在肽偶联剂的存在下加入Fmoc-L-Glu(Otbu)-OH并使之反应，得到芴基甲氧基羰基谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种合成方法，其特征在于使用固相肽合成生产比伐卢定，其中，所述方法使用Fmoc-Leu-Wang树脂、Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂作为载体进行所述多肽的所述固相合成。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽固相合成方法中使用的多肽连接剂选自由2-肟氰乙酸乙酯、N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二异丙基乙胺、二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)和甲酸组成的组。3.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述Fmoc-Leu-Wang树脂、Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂用作用于所述多肽的所述固相合成反应的载体。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽固相肽合成方法通过Fmoc脱保护方法进行。5.根据权利要求4所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊万，
申请(专利权)人：上海胜泽泰医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：