一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒及提取方法技术

一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒,该试剂盒包括工作液A、工作液B、磁珠结合液、工作液C和工作液D。利用所述试剂盒的提取方法简单，主要包括以下四个步骤：细菌裂解、磁珠吸附、洗涤、洗脱。本发明专利技术采用单分散、超顺磁性氧化硅纳米磁珠，所需其他试剂均为常规无毒试剂，成本低，提高了实验安全性，提取出来的革兰氏阴性菌基因组DNA片段完整性好、产率高、纯度高，适合于PCR检测、核酸杂交及构建DNA文库等下游分子生物学实验。等下游分子生物学实验。

【技术实现步骤摘要】
一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，特别涉及一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]食品安全是全球高度关注的、直接关系民生的公共卫生安全问题，而食源性致病细菌是导致食品安全问题事件频发的主要原因之一，及时准确地检测出食品中的致病菌，加强对有害病菌的筛选和检测，有效防止食品污染，是控制食品中病原菌污染和各类传染病蔓延的根本措施。
[0003]DNA提取技术是食源性致病细菌的生物传感器检测技术的第一步骤，也是最关键的步骤，是否获得高纯度的DNA，将直接关系下游实验的安全与成败。目前常用的细菌基因组DNA提取方法主要有碱裂解法、酚-氯仿法等，这些方法普遍存在产物不纯、操作繁琐等问题，且无法摆脱对高速离心机的依赖。生物磁珠以其颗粒小、比表面积大、偶联容量大、悬浮稳定性好、有利于偶联反应顺利进行等优点，在核酸提取中备受青睐。
[0004]常用的细菌基因组DNA提取方法多采用酚、氯仿等有机试剂进行抽提，该方法存在有机试剂污染，无法摆脱对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒，包括多种工作液，其特征在于，各工作液的具体配制如下：工作液A中CTAB质量浓度为0.5-1.0％，NaCl浓度为1.5-3.5mol/L，Triton-X-100质量浓度为1.0~2.0%，Tris-HCl的浓度为50-120mmol/L，其pH7.0-8.0，EDTA浓度为8-25mmol/L，聚乙烯吡咯烷酮PVP质量浓度为0.5~1％，溶剂为无菌去离子水；工作液B中NaCl浓度为1.0-2.0mol/L，异硫氰酸胍浓度为3-4.5mol/L，核糖核酸酶A浓度为0.3-0.45mg/mL，柠檬酸钠浓度为0.07-0.lmol/L，溶剂为无菌去离子水；工作液C为乙醇溶液，其体积分数为60-75％；工作液D中Tris-HCl浓度为10-15mmol/L，其pH7.0-8.0， 溶菌去离子水，工作液D的 pH为7.5-8.0；磁珠结合液中NaCl浓度为0.5-1.5mol/L、盐酸胍浓度为1.2~1.8mol/L、无水乙醇体积比为20~30%、异丙醇体积比为30~60%，聚乙二醇质量分数为3％~10％的，聚乙二醇分子量为6000至8000，将磁珠悬浮在其中，所述磁珠结合液的PH值为5.0～6.5。2.根据权利要求1所述的一种快速提取革兰氏阴性菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述磁珠为单...

【专利技术属性】
技术研发人员：马莉萍，李云霞，聂莹莹，左显维，冯治棋，马生龙，任文斌，
申请(专利权)人：甘肃省科学院传感技术研究所，
类型：发明
国别省市：