一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法。本发明专利技术通过弱酸法提取珍珠粉水溶性蛋白，优化反应条件(pH、温度、反应时间等)，分析样品的羟基自由基清除效果，并测得蛋白得不同分子量占比情况，经测试证明该提取物具有良好的皮肤美白效果。本发明专利技术采用常温醋酸溶液辅助提取，获得了一个水溶性蛋白纯度较高(≥40.05％)的基质蛋白提取物，得到的蛋白均为10,000Da以下，0～2000Da的多肽含量占总蛋白的70％以上，更有利于人体吸收，其体外具有显著的羟基自由基清除效果；且工艺程序较为简单，无精细分离步骤，制备效率较高且成本较低，适合后续中试和工业化生产。适合后续中试和工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法
(一)

[0001]本专利技术涉及一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法。
(二)
技术介绍

[0002]珍珠具备解痘疗毒、美白皮肤以及清目肤翳等功效。珍珠粉在医药、材料、护肤品等领域应用较广，具有加速愈合伤口、防止伤口发炎的医用疗效(Hsin-Ling Yang,Antihemolytic and antioxidant properties of pearl powder agains2,2'-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride-induced hemolysis and oxidative damage to erythrocyte membrane lipids and proteins.Journal of Food and Drug Analysis,2017)。珍珠粉精深加工一般是将下层珠粉化、乳化以及液化，制成药品、保健品、美容化妆品和其它综合珍珠制品(Hui-Fang Chiu,Efficacy of protein rich pearl powder on antioxidant status in a randomized placebo-controlled trial,Journal of Food and Drug Analysis,2018)。现有的珍珠粉水解技术分为水溶性技术和非水溶性技术，水溶性技术通常采用乳酸水解法、酸-酶水解法、盐酸水解法、超声水解法、微波水解法、酶水解法、酸水解法等。非水溶性技术是以纳米珍珠粉为原料，采用低温减压真空干燥、超音速气流粉碎机粉碎、喷雾干燥等物理方法进行加工。如采用中性蛋白酶、乳酸水解珍珠粉,以水解度为指标,对加酶量、酶解温度、酶解时间、乳酸用量进行工艺参数优化制备水溶性珍珠粉,并测定其分子质量分布和清除超氧阴离子自由基能力(Yi-Chen Li,Pearl extract enhances the migratory ability of fibroblasts in a wound healing model,Pharmaceutical Biology,2013)。也可用纳米珍珠粉为原料，加入菠萝蛋白酶溶液和木瓜蛋白酶溶液进行溶解，低温减压真空干燥，超音速气流粉碎，得到富含活性肽的纳米珍珠粉。
[0003]珍珠粉水解技术影响着珍珠提取物的抗氧化及美白功效。“活性多肽”一般指含有2个至10个氨基酸的多肽，分子量在2kDa以下，是一类具有重要生理功能的活性物质，功能因子。以珍珠多肽为主的珍珠提取物，将其添加到B16黑色瘤细胞培养液中，研究珍珠提取物美白护肤的功效。在抑制黑色素方面，珍珠提取物较熊果苷能更显著抑制酪氨酸酶活性，珍珠提取物半抑制量为80mg/L(杨安全，珍珠提取物的美白功效研究，药物生物技术，2016)。研究发现，浓度为0.25％、0.5％、0.75％的珍珠水解液可以抑制黑色素细胞的黑色素合成，3种浓度下的珍珠水解液均可抑制相关基因TRP1 mRNA的表达(邓云云，珍珠水解液的美白作用机理研究，中国现代中药，2017)。
[0004]杨安全等人专利技术了“一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法”，声明了珍珠蛋白在皮肤美白护肤方面的作用。在珍珠蛋白溶液中加入磷酸盐缓冲液和中性蛋白酶，酶催化反应结束后在沸水浴灭酶即为珍珠活性多肽(公布号CN104911239A)。
[0005]龙凤娣的专利技术“一种纳米珍珠有机基质萃取与分子量分级的方法”，通过离心浓缩滤膜装置的离心浓缩分离方式，分离出分子量大于5kDa的第一珍珠有机基质萃取物及分子量小于5kDa的第二珍珠有机基质萃取物(公布号CN101381400A)。
[0006]吴婉莹等人专利技术了“珍珠蛋白的制备方法、由该方法制备的珍珠蛋白及其应用”，在珍珠粉末中加盐酸或醋酸，经搅拌离心得到沉淀，所得沉淀冻干即为角壳蛋白。该蛋白具有较好的抗酪氨酸酶的活性，可以作为美白产品的原料用于医药和化妆品(公布号CN106866807A)。
(三)
技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法，该方法不仅便捷、安全、低成本，而且有效提高了珍珠粉水溶性蛋白提取率，提取物具有良好的羟基自由基清除效果和皮肤美白作用。
[0008]本专利技术采用的技术方案是：
[0009]一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物，由如下方法制备获得：
[0010](1)纳米珍珠粉40～60℃真空干燥后，称取珍珠粉，按照固液质量比1:10～1:30加入2～3mol/L醋酸水溶液，60～80rpm/min磁力搅拌2～5h，过滤，取上清得粗蛋白提取物；固液比如果太低，易导致珍珠粉溶解不充分；醋酸浓度如果过高，易导致蛋白失活；醋酸pH值范围2.1～2.2，加入珍珠粉反应完全，溶液pH值范围6.5～7.0，免去碱液调节pH值的步骤；
[0011](2)步骤(1)所得粗蛋白提取物旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，500Da透析袋透析24～36h，每2～3h换水一次(由于样品中盐浓度过高，透析样品体积膨胀到原来的3～4倍)；
[0012](3)步骤(2)透析后的样品旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，冷冻干燥，即得所述具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物。
[0013]采用本专利技术方法，保留了珍珠蛋白的初始结构，为后期分析蛋白活性及结构奠定基础。提取保留的为水溶性酸性珍珠蛋白，上清液为可溶性蛋白提取液，沉淀为不可溶性蛋白提取物，相比于传统的酶解沉淀处理方法，本方法更多的保留了水溶性蛋白成分。
[0014]本专利技术还涉及制备所述具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物的方法，所述方法包括：
[0015](1)纳米珍珠粉40～60℃真空干燥后，称取珍珠粉，按照固液质量比1:10～1:30加入2～3mol/L醋酸水溶液，60～80rpm/min磁力搅拌2～5h，过滤，取上清得粗蛋白提取物；
[0016](2)步骤(1)所得粗蛋白提取物旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，500Da透析袋透析24～36h，每2～3h换水一次；由于样品中盐浓度过高，透析样品体积膨胀到原来的3～4倍；
[0017](3)步骤(2)透析后的样品旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，冷冻干燥，即得所述具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物。
[0018]优选的，步骤(2)和(3)中所述旋转蒸发在40～50℃，真空度0.05～0.1Mpa条件下进行。本方法反应条件温和(常温20～30℃)，浓缩过程温度40～50℃，充分保证了酶活性。各组分最后冻干前的浓缩，醋酸有刺鼻气味，醋酸溶剂蒸发完全，留有部分的水备后续冻干，不影响后续应用。
[0019]具体的，所述方法如下：
[0020](1)纳米珍珠粉40～60℃真空干燥后，称取珍珠粉，按照固液质量比1:10～1:30加入2～3mol/L醋酸水溶液，60～80rpm/min磁力搅拌2～5h，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物，由如下方法制备获得：(1)纳米珍珠粉40～60℃真空干燥后，称取珍珠粉，按照固液质量比1:10～1:30加入2～3mol/L醋酸水溶液，60～80rpm/min磁力搅拌2～5h，过滤，取上清得粗蛋白提取物；(2)步骤(1)所得粗蛋白提取物旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，500Da透析袋透析24～36h，每2～3h换水一次；(3)步骤(2)透析后的样品旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，冷冻干燥，即得所述具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物。2.制备权利要求1所述具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物的方法，所述方法包括：(1)纳米珍珠粉40～60℃真空干燥后，称取珍珠粉，按照固液质量比1:10～1:30加入2～3mol/L醋酸水溶液，60～80rpm/min磁力搅拌2～5h，过滤，取上清得粗蛋白提取物；(2)步骤(1)所得粗蛋白提取物旋转蒸发浓缩至原体积的1/8～1/10，500Da透析袋透析24～36h，每2h换水一次；(3)步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：王龑，裴晶莹，孙培龙，阮华君，罗贤俊，唐长明，邹仙果，魏狄兰，廖杰，
申请(专利权)人：浙江长生鸟健康科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：