本发明专利技术公开了一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒，所述的试剂盒包括针对DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的如SEQ ID NO.1～235所示探针组成的探针库，将该探针库制备成检测试剂盒可用于DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的检测。使用该探针库对待分析的目标DNA片段进行富集，然后再对富集后的DNA片段通过测序手段进行测序，从而实现对基因检测的有效性。DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因可用于预测肿瘤发生的倾向性、评估肿瘤恶性程度和临床预后、指导新药筛选与研发，因此，本发明专利技术对基因功能性的研究方向起到重要的指导意义。重要的指导意义。重要的指导意义。
【技术实现步骤摘要】
一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒
[0001]
[0002]本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒。
技术介绍
[0003]异常的DNA损伤修复通路与肿瘤、神经性疾病发生倾向性及诱导DNA损伤类抗肿瘤药物对细胞的敏感性关系密切。DNA核苷酸切除修复通路主要修复內源性氧自由基损伤的核苷酸、紫外线照射引起的DNA链内交联损伤、顺铂等烷化剂类抗肿瘤药物引起的DNA损伤， 是DNA修复机制中最重要的途径之一。修复过程具体分为全基因组的核苷酸切除修复（global genome nucleotide excision repair , GG-NER）以及伴随转录的核苷酸切除修复（transcription-coupled nucleotide excision repair , TC-NER）两种方式，除损伤位点的识别方式有差异外，两种修复过程基本相同。在GG-NER通路中，XPC作为损伤感应元件在UV-DDB复合体的帮助下，与RAD23B、CETN2蛋白形成复合体并持续查找损伤位点，当XPC复合体结合在DNA损伤位点时候，RAD23B脱离复合体。在TC-NER通路中，损伤位点的识别是由 RNA聚合酶Pol II在转录过程中遇到损伤位点后停滞转录而间接完成的。转录过程中，RNA Pol II与UVSSA、USP7及CSB形成功能复合体，当遇到损伤位点并转录停滞后，RNA Pol II与 CSA-CSB形成复合体并导致RNA Pol II反向移位，为DNA损伤的修复提供空间。DNA损伤位点被识别后，转录起始因子TFIIH复合体被招募到损伤位点，而CAK亚复合体从中脱离。TFIIH 复合体紧接着利用其解旋酶活性解开损伤附近的双螺旋结构，单链DNA结合蛋白RPA将单链非损伤DNA封闭起来，并招募XPF-ERCC1对损伤位置的5
’
端进行剪切，之后XPG利用内切酶活性剪切损伤位置的3
’
端，造成一段22-30个核苷酸的剪切缺口。接下来，PCNA直接载入到 XPF-ERCC1剪切位置并招募DNA合成相关蛋白复合体对缺口进行填补、缝合，完成DNA的损伤修复过程。
[0004]合成致死（Synthetic Lethality）的策略近年来在肿瘤的研究中得到广泛应用。合成致死在肿瘤研究中的概念为：当将两个不在同一修复通路中的重要基因的功能抑制掉其中之一时，细胞不会致死，但是将这两个基因的功能都抑制掉后，细胞死亡。在临床上，如果肿瘤细胞中存在其中之一的突变，而正常细胞中该基因正常，我们可以将另外一个基因作为靶点，并将其功能抑制住，达到特异性杀死肿瘤细胞，个体化治疗的目的。
[0005]前期研究发现，DNA核苷酸切除修复通路参与的基因发生胚系遗传突变、特异组织中体细胞突变不仅与肿瘤的发生、治疗效果高度相关，也与神经发育缺陷及早衰等非肿瘤疾病的发生存在因果关系。其中，XPA、XPC等基因的突变与紫外线照射敏感性、皮肤癌的发生高度相关；XPA、XPC基因的多态性与肺癌及膀胱癌的发生高度相关；另外，ERCC2基因的多态性与皮肤癌及肺癌高度相关。这些基因的突变导致DNA核苷酸切除修复通路修复效率的改变（减弱或缺失），对肿瘤、神经性疾病的发生、预后、治疗策略的制定都具有重要意义。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于提供一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒，所述的试剂盒包括针对DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的如SEQ ID NO .1～235所示探针组成的探针库。
[0008]进一步的，DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因包括ERCC2、ERCC4、XPA、XPC。
[0009]进一步的，所述基因ERCC2对应的探针序列如SEQ ID NO .1～55所示，所述基因ERCC4对应的探针序列如SEQ ID NO .56～144所示，所述基因XPA对应的探针序列如SEQ ID NO .145～182所示；所述基因XPC对应的探针序列如SEQ ID NO .183～235所示。
[0010]一种检测以上所述的DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的方法，包括以下步骤：（1）获得受试者的DNA样本库；（2）将以上所述的试剂盒中SEQ I DNO .1～235所示的全部探针与所述DNA样本库进行杂交；（3）分离步骤（2）的杂交产物，并释放出与试剂盒中探针杂交的基因片段，采用测序技术对分离出的基因片段进行测序从而检测基因的突变情况。
[0011]进一步的，所述步骤（1）中的DNA样本库由双链DNA 片段组成；所述步骤（1）包括以下步骤：提取全基因组DNA，然后将其片段化；或者提取mRNA，将其片段化，然后以该经片段化的mRNA为模板合成双链cDNA。
[0012]进一步的，所述步骤（2）中的探针进行选择性标记。
[0013]进一步的，所述步骤（2）中的探针进行生物素标记。
[0014]有益效果：本专利技术开发了一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的探针库、检测方法和试剂盒，其主要具有以下几方面的意义：1. 通过对DNA核苷酸切除修复通路相关突变基因的变异情况分析，评估人体组织或细胞中DNA核苷酸切除修复通路的有效性（减弱或缺失），预测肿瘤、神经性疾病发生的倾向性，并指导患者采取相应的预防措施。
[0015]2. 通过对DNA核苷酸切除修复通路相关突变基因的变异情况分析，评估肿瘤患者细胞中DNA核苷酸切除修复通路的有效性（减弱或缺失），对肿瘤恶性程度、临床预后的评估具有重要的指导意义。
[0016]3. 通过对DNA核苷酸切除修复通路相关突变基因的变异情况分析，评估肿瘤患者细胞中DNA核苷酸切除修复通路的有效性（减弱或缺失），对放射、化疗药物选择及治疗策略的制定（如，合成致死方案等）具有重要指导意义。
[0017]4. 通过对DNA核苷酸切除修复通路相关突变基因的变异情况分析，评估肿瘤患者细胞中DNA核苷酸切除修复通路的有效性（减弱或缺失），对新的治疗靶点选择、靶向药物研发等具有重要指导意义。
附图说明
[0018]图1 为本专利技术所述检测方法的流程图。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0020]本专利技术提供了一种与DNA碱基切除修复通路相关的基因的方法，主要包括以下步骤：（1）获得受试者的DNA样本库；提取全基因组DNA，然后将其片段化；或者提取mRNA，将其片段化，然后以该经片段化的mRNA为模板合成双链cDNA；（2）针对要检测的基因片段设计与该基因杂交的DNA探针，从中本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括针对DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的如SEQ ID NO .1～235所示探针组成的探针库。2.根据权利要求1所述的一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒，其特征在于，DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因包括ERCC2、ERCC4、XPA、XPC。3.根据权利要求1所述的一种检测DNA核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒，其特征在于，所述基因ERCC2对应的探针序列如SEQ ID NO .1～55所示，所述基因ERCC4对应的探针序列如SEQ ID NO .56～144所示，所述基因XPA对应的探针序列如SEQ ID NO .145～182所示；所述基因XPC对应的探针序列如SEQ ID NO .183～235所示。4.一种检测权利要求1-3任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘松柏，杜佳慧，
申请(专利权)人：苏州卫生职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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