一种SARS-CoV-2的灭活疫苗纯度分析方法技术

本发明专利技术涉及一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS-CoV-2的灭活疫苗纯度分析方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体而言，涉及一种SARS-CoV-2的灭活疫苗纯度分析方法。

技术介绍

[0002]严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的COVID-19疫情，给人类身心健康造成巨大威胁，成为影响全球的重大公共卫生事件。SARS-CoV-2在分类学上属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)中的β类型冠状病毒，具有囊膜，以表面刺突蛋白为特征，基因组为线性单股正链的RNA((+)ss RNA)病毒
[1]。其主要结构蛋白包括表面棘突糖蛋白S、膜蛋白M、小包膜蛋白E、核衣壳蛋白N、辅助蛋白3a。这些结构蛋白的糖基化修饰，蛋白酶剪切、其他的翻译后修饰以及多聚体的形成对这些蛋白的功能至关重要。
[0003]糖基化后的S、M、E和多种形式的3a是SARS-CoV-2的膜蛋白，N蛋白与病毒基因组RNA结合。有文献报道，在感染SARS-CoV-1后这些结构蛋白都会诱导或强或弱的体液免疫反应，主要中和抗原是N-linked糖基化S蛋白。S蛋白被Furin-like蛋白酶切成S1和S2亚基，在病毒侵入细胞过程中分别介导受体结合和病毒与宿主细胞的膜融合。N蛋白与病毒RNA结合形成核衣壳，具有较强的免疫原性，在成熟病毒粒子中每14-19个核苷酸残基结合一个N蛋白。N蛋白常被用于制备重组蛋白疫苗，N蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生了高水平的T、B细胞免疫应答
[3]。M蛋白是病毒体的主要结构成份，摩尔分子在结构蛋白中占比高，可介导病毒颗粒的装配和出芽，另外本研究也证实了M为N-linked糖化蛋白。3a蛋白形成离子通道，可能成为重要的药物和疫苗靶点，通过调节离子通道可能抑制SARS-CoV-1的复制
[4-5]。本研究发现3a的摩尔分子与M蛋白的占比相当，且诱导更高的抗体反应。E蛋白是一种小跨膜蛋白，含量低，但在病毒颗粒的组装与释放过程中发挥着重要作用
[6]。这些结构蛋白决定着免疫原性，影响着免疫持久性，甚至决定着病毒侵入机体的方式
[7]。M和E共同表达，即可装配为病毒样颗粒。
[0004]目前针对COVID-19并无特效药，疫苗是控制COVID-19疫情的必要手段。武汉生物制品研究所有限责任公司和中科院武汉病毒研究所合作研发了SARS-CoV-2灭活全病毒疫苗(CN111569058A)，在已完成的灭活疫苗的I期和II期临床试验中的初步观察结果表明，该疫苗的接种能够产生高水平的中和抗体阳转率和滴度，同时具有良好的耐受性，仅有低级别、低百分比的不良反应，表明灭活疫苗具有很好的安全性、耐受性及免疫原性
[8]。
[0005]当然，对于疫苗产品而言，疫苗的纯度直接与接种后的安全性、免疫原性及疫苗保护效力相关。但目前并没有针对SARS-CoV-2灭活全病毒结构蛋白鉴定及分析方法，因此，建立SARS-CoV-2灭活全病毒疫苗结构蛋白的鉴定方法，对于评价疫苗产品的质量就显得格外重要。
[0006]综上，建立高灵敏度、高特异性的适合于SARS-CoV-2的灭活全病毒疫苗纯度分析方法，也是疫苗研发过程中急需解决的重要问题。
[0007]参考文献
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323.

技术实现思路

[0017]本专利技术涉及一种用于SARS-CoV-2的灭活疫苗纯度分析方法，所述的SARS-CoV-2灭活疫苗的制备方法参见CN202010559132.3；所述的方法包括如下步骤：
[0018](1)以4
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裂解-上样缓冲液处理灭活疫苗，所述的裂解-上样缓冲液以水为溶剂，其中含有：Tris-HCl(pH6.8，浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS-CoV-2的灭活疫苗纯度分析方法，所述的方法包括如下步骤：(1)以4
×
裂解-上样缓冲液处理灭活疫苗，所述的裂解-上样缓冲液以水为溶剂，其中含有：Tris-HCl(pH6.8)(终浓度250mM)、10％的十二烷基磺酸钠(W/V)、51％的甘油(V/V)、5％的β-巯基乙醇(V/V)、2％的乙基苯基聚乙二醇(V/V)，及必要的显色剂；(2)将步骤(1)获得的样品在4-20％的SDS-PAGE胶中进行电泳，在低温(4℃)低电流(20mA)的条件下，进行SDS-PAGE电泳；(3)电泳结束后，对PAGE胶进行银染，对银染结果使用如下公式进行半定量分析：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的显色剂为0.4％...

【专利技术属性】
技术研发人员：申硕，张小宇，周金戈，王泽鋆，郭靖，万鑫，靳卫平，杨安纳，吴杰，卢佳，王文辉，周艳萍，孟胜利，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：