一种葛仙米混养方法技术

本发明专利技术涉及一种葛仙米混养方法，包括葛仙米藻种混养驯化、配制混养培养基、接种以及发酵罐混养等步骤。本发明专利技术采用Review生物活性水是一种全新的农业用水，具有营养丰富，抑菌杀菌效果，在混养中不仅可为葛仙米提供营养，还可起到预防杂菌污染效果。所用EOW(酸性氧化电位水)为光谱杀菌，且对葛仙米无毒害，对葛仙米伤害小，有效保护葛仙米藻细胞的活性，且对人体有益，不会带来食品安全风险。通过紫外线和有机碳源结合驯化培养，选育获得混养适应性强的葛仙米藻种。通过溶氧量指标作为警报信号，有效实现光暗交替培养调控，有效地避免溶氧量对混养葛仙米的毒害。异养碳源为水解酶解淀粉，增加异养对碳源存在形式的多样性。混养模式下，葛仙米光合自养生长，异养生长，异养全过程是相对无菌状态，受外界影响较小。受外界影响较小。

【技术实现步骤摘要】
一种葛仙米混养方法


[0001]本专利技术涉及葛仙米的培植
，具体为一种葛仙米混养方法。

技术介绍

[0002]葛仙米是念珠藻属(Nostoc Vauch)中球状念珠藻(Nostoc sphaeoides K
ü
tzing)的俗称，它属于蓝藻门(Cyanophyta)，蓝藻纲(Cyanophyceae)，念珠藻目(Nostocales)，念珠藻科(Nostocaceae)。葛仙米又称绿色燕窝，弥足珍贵，是食药两用的佳品。其干物质总蛋白含量为28.38％～52％，总糖为24.19％。含18种氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸；富含V
C
、V
E
和B族维生素，及多种矿质元素，特别是含钙量高的食用藻类。
[0003]微藻的培养模式有三种方式：自养、异养、混养。目前，葛仙米培养主要采用悬浮培养、跑道池搅拌培养、静置气相培养或浅层培养。综合以上培养模式，葛仙米的培养方式均属于开放式光合自养。光合自养的缺点是培养密度低、培养周期长，生长慢、开放式培养受外界环境因素影响大，且易于污染杂藻和微生物，因此，需要消耗大量人力物理进行清洗筛选，同时为了保证食用微生物风险，需采取灭菌方式。近年来，混养技术在其它微藻(如小球藻、裸藻、栅藻等)方面的应用，获得显著的效果，目前混养培养微藻数量极少，且无有关葛仙米混养的报道。因此，为规避葛仙米现有技术存在的不足，开发一种葛仙米混养方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种葛仙米混养方法，解决上述背景技术中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]一种葛仙米混养方法，具体步骤如下：
[0007]步骤1)葛仙米藻种混养驯化：
[0008](1)、驯化筛选混养藻种：选取球体圆润的葛仙米球体，在无菌操作台上，采用EOW(酸性氧化电位水)水浸泡处理20-30秒，洗净，制成藻浆，涂布于添加有0.5g/L的葡萄糖的BG-110固体培养基表面，在40W紫外灯下，距灯距离5cm处照射，24小时后，在2000lux，光暗比例8h/16h下，温度30℃下生化培养箱内培养出肉眼可见的小藻体；挑选小藻体，接于添加有葡萄糖0.5g/L的BG-110液体培养基中，通气培养，每7-10天更新一次培养基，在2000lux，光暗比例8h：16h下，温度30℃下生化培养箱内培养，获得可存活的且粒径达2mm以上的藻体，并保存；
[0009](2)、混养藻种扩繁：挑选2mm以上的藻体，采用EOW(酸性氧化电位水)水浸泡处理20-30秒，制成藻浆，接于扩添加有葡萄糖0.5g/L的BG-110液体培养基中，在2000lux，光暗比例8h：16h下，温度30℃下生化培养箱内通气培养出现小藻体后，每7-10天更新一次培养基分密度培养，扩繁获得小藻体，作为混养发酵罐培养的藻种；
[0010]步骤2)配制混养培养基：
[0011](1)培养基组分
[0012]Review生物活性水50-100份，淀粉20-30份、淀粉酶3-6份、生物素0.01-0.05份、维
生素B
12
0.01-0.08份、维生素B10.05-0.1份、氯化钠1.0-2.0份、氯化钾2-4份、硝酸钾10-15份，碳酸氢钠4-8份，消泡剂0.01-0.05份、抑菌剂1.0-2.0份，土壤浸出液20ml-40ml/L，去离子水1000-20000份；
[0013](2)培养基配制
[0014](2.1)稀释：采用去离子水，将Review生物活性水稀释200-300倍；
[0015](2.2)配制：在1.1中中添加，淀粉、淀粉酶、消泡剂；
[0016](2.3)酶解：通入过滤空气，将光合发酵罐温度设置110℃，处理10-20min，冷却至60℃，添加生物素、维生素B
12
、维生素B1、氯化钠、氯化钾、硝酸钾10-15份，碳酸氢钠、抑菌剂，土壤浸出液；
[0017](2.4)灭酶灭菌：通入过滤空气，将发酵罐温度设置为121℃灭菌30min，灭酶杀菌，冷却即得；
[0018]步骤3)、接种：
[0019]将步骤1中藻种按5-10g/L，接于步骤2中装有培养基的光合发酵罐中，通入经过滤的空气，搅拌。
[0020]步骤4)、发酵罐混养：
[0021](1)光合适应培养：打开光合发酵罐外周，补充8000lux的光强，初期培养5-7天，让葛仙米适应，光合发酵的培养液；
[0022](2)暗适应培养：从第6天开始，光合适应和暗适应结束后，调节光照在8000lux，光暗比例8h：16h，培养5天；
[0023](3)光暗交替培养：在光合发酵罐中光暗交替培养；
[0024]根据光合发酵罐内溶氧量，当溶氧量超过15-25mg/L时，停止供光，进行暗培养，当溶氧量超过2-5mg/L时，打开补光灯，进行光合培养，暗培养温度为30℃，光合培养温度为25℃；
[0025]根据背光面侧的透光率，调节光合培养时的光照强度，当透光率500-600lux，8000lux，透过光率为300-500lux时，光强调至15000lux，透过光率为100-200lux，光强调至20000lux，当光透过率为50-100lux，采取分罐培养，或采收获得大量葛仙米藻种。
[0026]优选地，所述消泡剂为植物油。
[0027]本专利技术中所述Review生物活性水为日本KUMAMOTO SUIKEN公司采购设备，制备而得。
[0028]本专利技术中所述土壤浸出液按现有技术制备而得。
[0029]本专利技术中所述EOW(酸性氧化电位水)为市售或购买设备制备而得。
[0030]本专利技术中所述光合发酵罐为市售。
[0031]本专利技术中所述BG-110固体培养基和BG-110液体培养基按照现有技术配制而成。
[0032]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0033]1、采用Review生物活性水是一种全新的农业用水，具有营养丰富，抑菌杀菌效果，在混养中不仅可为葛仙米提供营养，还可起到预防杂菌污染效果。
[0034]2、所用EOW(酸性氧化电位水)为光谱杀菌，且对葛仙米无毒害，对葛仙米伤害小，有效保护葛仙米藻细胞的活性，且对人体有益，不会带来食品安全风险。
[0035]3、通过紫外线和有机碳源结合驯化培养，选育获得混养适应性强的葛仙米藻种。
[0036]4、通过溶氧量指标作为警报信号，有效实现光暗交替培养调控，有效地避免溶氧量对混养葛仙米的毒害。
[0037]5、异养碳源为水解酶解淀粉，增加异养对碳源存在形式的多样性。
[0038]6、混养模式下，葛仙米光合自养生长，异养生长，异养全过程是相对无菌状态，受外界影响较小。
具体实施方式
[0039]下面结合具体实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葛仙米混养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)葛仙米藻种混养驯化：(1)、驯化筛选混养藻种：选取球体圆润的葛仙米球体，在无菌操作台上，采用EOW(酸性氧化电位水)水浸泡处理20-30秒，洗净，制成藻浆，涂布于添加有0.5g/L的葡萄糖的BG-110固体培养基表面，在40W紫外灯下，距灯距离5cm处照射，24小时后，在2000lux，光暗比例8h/16h下，温度30℃下生化培养箱内培养出肉眼可见的小藻体；挑选小藻体，接于添加有葡萄糖0.5g/L的BG-110液体培养基中，通气培养，每7-10天更新一次培养基，在2000lux，光暗比例8h：16h下，温度30℃下生化培养箱内培养，获得可存活的且粒径达2mm以上的藻体，并保存；(2)、混养藻种扩繁：挑选2mm以上的藻体，采用EOW(酸性氧化电位水)水浸泡处理20-30秒，制成藻浆，接于扩添加有葡萄糖0.5g/L的BG-110液体培养基中，在2000lux，光暗比例8h：16h下，温度30℃下生化培养箱内通气培养出现小藻体后，每7-10天更新一次培养基分密度培养，扩繁获得小藻体，作为混养发酵罐培养的藻种；步骤2)配制混养培养基：(1)培养基组分Review生物活性水50-100份，淀粉20-30份、淀粉酶3-6份、生物素0.01-0.05份、维生素B
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0.01-0.08份、维生素B10.05-0.1份、氯化钠1.0-2.0份、氯化钾2-4份、硝酸钾10-15份，碳酸氢钠4-8份，消泡剂0.01-0.05份、抑菌剂1.0-2.0份，土壤浸出液20ml-40ml/L，去离子水1000-20000份；(2)培养基配制(2....

【专利技术属性】
技术研发人员：王卫，易思富，周丰，田云，文戈，郭小玲，彭锦桃，侯丽华，杨胜辉，
申请(专利权)人：湖南炎帝生物工程有限公司常德炎帝牧源农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：