一种细胞冻存液制造技术

本发明专利技术公开一种细胞冻存液，所述冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：50～100份：20～30份：10～15份：1～5份：10～15份,细胞冻存液通过以下步骤配制而成：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质,将步骤一制备的冻存液基质加入碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成细胞冻存液。本发明专利技术能够防止冻存过程中的细胞损伤、保持细胞复苏后的高活率及其功能，冻存液能够降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，提升细胞活率，制备方法简单易操作，制备成本较低，易于产业化生产。易于产业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞冻存液


[0001]本专利技术涉及一种细胞冻存
，具体是一种细胞冻存液。

技术介绍

[0002]细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术，细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用，细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验，而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用，除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞，细胞冻存时向培养基中加入保护剂
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终浓度5％.15％的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤，采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活，标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)，现提出一种细胞冻存液，适合临床使用、能够提高免疫效应细胞活率和增殖水平以及副作用小。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种细胞冻存液，能够防止冻存过程中的细胞损伤、保持细胞复苏后的高活率及其功能，冻存液能够降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，提升细胞活率，冻存液的制备方法，方法简单易操作，制备成本较低，易于产业化生产，避免了血清传播动物源性病原体的风险。
[0004]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0005]一种细胞冻存液，所述冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：50～100份：20～30 份：10～15份：1～5份：10～15份。
[0006]进一步地，所述细胞冻存液通过以下步骤配制而成：
[0007]步骤一：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质；
[0008]步骤二：将步骤一制备的冻存液基质加入碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成细胞冻存液。
[0009]进一步地，所述细胞冻存液使用时，包括以下步骤：
[0010]S1:将需要冻存的细胞利用离心机1500rmp离心5min，离心结束后，去上清后，缓慢加入细胞冻存液，轻轻吹打混匀后，分装；
[0011]S2：步骤一分装的冻存液每管为1.5mL，放入-80℃冰箱中冻存8-24h后，次日移入液氮罐，冻存密度为1～10
×
10/mL。
[0012]S3：进行细胞复苏，并进行存活细胞的测量，从液氮罐中取出冻存管，快速置于38℃水浴锅中，轻轻震荡冻存管，直至细胞悬液完全融化，对细胞存活数量进行检测，存活数
量在99％以上。
[0013]本专利技术的有益效果：
[0014]1、本专利技术细胞冻存液能够防止冻存过程中的细胞损伤、保持细胞复苏后的高活率及其功能；
[0015]2、本专利技术冻存液能够降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，提升细胞活率；
[0016]3、本专利技术冻存液的制备方法，方法简单易操作，制备成本较低，易于产业化生产；
[0017]4、本专利技术避免了血清传播动物源性病原体的风险。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]一种细胞冻存液，冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：50～100份：20～30份： 10～15份：1～5份：10～15份。
[0020]一种细胞冻存液通过以下步骤配制而成：
[0021]步骤一：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质；
[0022]步骤二：将步骤一制备的冻存液基质加入碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成细胞冻存液。
[0023]一种细胞冻存液使用时，包括以下步骤：
[0024]S1:将需要冻存的细胞利用离心机1500rmp离心5min，离心结束后，去上清后，缓慢加入细胞冻存液，轻轻吹打混匀后，分装；
[0025]S2：步骤一分装的冻存液每管为1.5mL，放入-80℃冰箱中冻存8-24h后，次日移入液氮罐，冻存密度为1～10
×
10/mL。
[0026]S3：进行细胞复苏，并进行存活细胞的测量，从液氮罐中取出冻存管，快速置于38℃水浴锅中，轻轻震荡冻存管，直至细胞悬液完全融化，对细胞存活数量进行检测，存活数量在99％以上。
[0027]实施例1
[0028]一种细胞冻存液，冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：50份：20份：10份： 1份：10份。
[0029]一种细胞冻存液通过以下步骤配制而成：
[0030]步骤一：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质；
[0031]步骤二：将步骤一制备的冻存液基质加入碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成细胞冻存液。
[0032]一种细胞冻存液使用时，包括以下步骤：
[0033]S1:将需要冻存的细胞利用离心机1500rmp离心5min，离心结束后，去上清后，缓慢
加入细胞冻存液，轻轻吹打混匀后，分装；
[0034]S2：步骤一分装的冻存液每管为1.5mL，放入-80℃冰箱中冻存8h后，次日移入液氮罐，冻存密度为1～10
×
10/mL。
[0035]S3：进行细胞复苏，并进行存活细胞的测量，从液氮罐中取出冻存管，快速置于38℃水浴锅中，轻轻震荡冻存管，直至细胞悬液完全融化，对细胞存活数量进行检测，存活数量在99％以上。
[0036]实施例2
[0037]一种细胞冻存液，冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：60份：25份：12份：3份：12份。
[0038]一种细胞冻存液通过以下步骤配制而成：
[0039]步骤一：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质；
[0040]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液包含以下成分：基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，基质为DMEM/F12,基质、白蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO按质量份比为：50～100份：20～30份：10～15份：1～5份：10～15份。2.根据权利要求1所述的一种细胞冻存液,其特征在于，所述细胞冻存液通过以下步骤配制而成：步骤一：将基质、白蛋白进行混合，制得冻存液基质；步骤二：将步骤一制备的冻存液基质加入碱性成纤维细胞生长因子、异硫氰酸苯乙酯、DMSO，制成细胞冻存液。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊志军，王慧，刘文，
申请(专利权)人：安徽惠恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：