一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品技术

本发明专利技术公开了一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品，方法的步骤为：脱脂南极磷虾粉溶于pH6.5～7.5的磷酸缓冲液得脱脂南极磷虾粉溶液；将脱脂南极磷虾粉溶液超声波处理，而后加入包括内切酶、外切酶和风味酶的复合蛋白酶，摇匀得酶解体系；酶解体系在pH6.5～7.5的条件下酶解；将酶解产物灭酶后冷却、离心，取上清液即为分子量3000u以下多肽占比≥90％的酶解液；对酶解液依次进行超滤、浓缩、干燥即得脱脂南极磷虾粉降血糖肽。本发明专利技术的方法，采用特定的复合蛋白酶实现了对脱脂南极磷虾粉蛋白的针对性酶切，不仅提高产品的降血糖效果，而且提高了产品收率，同时工艺简单，生产效率高，极具应用前景。极具应用前景。极具应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品


[0001]本专利技术属于降血糖肽制备
，涉及一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品，特别涉及一种利用超声波辅助蛋白质酶解技术以脱脂南极磷虾粉为原料制备降血糖肽的方法及其产品。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种严重威胁人类健康的疾病，主要特征是由胰高血糖素或胰岛素缺乏或两者都有导致身体中糖分代谢混乱，并伴有脂肪、蛋白质、水、电解质等代谢障碍。根据世界卫生组织统计，全球约有4亿多人饱受糖尿病痛苦的折磨，我国糖尿病人约占全世界糖尿病人口的三分之一。由于该疾病的复杂发病机制和众多影响因素，目前尚无有效的防治措施。
[0003]二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV，DPP-IV)是一种非常稳定的在细胞表面的丝氨酸蛋白酶，在肠中高度表达，部分以可溶形式存在于循环血液中，作用于组织和器官。DPP-IV也可以作用于生理激素，如胰高血糖素样肽(GLP-1)等，目前的研究发现，GLP-1可通过结合相应的受体来减缓胃排空，抑制食欲，增加胰岛素的分泌和降低胰高血糖素的分泌。抑制DPP-IV的活性可以促进胰岛素分泌，从而降低体内的血糖浓度。近十年来，DPP-IV抑制肽得到普遍的认可，具有较好的辅助降糖作用，因此开发一种具有DPP-IV抑制活性的降血糖肽具有很大的应用价值。
[0004]南极磷虾被喻为“人类未来的蛋白资源仓库”。南极磷虾氨基酸种类齐全，富含成人所需的8种必需氨基酸及婴儿所需的9种必需氨基酸。以干重计南极磷虾肌肉组织中氨基酸总量约达57.21％，必需氨基酸占总氨基酸含量约40.2％，富含活性物质和药用原料，因此对其活性物质进行功能研究和开发利用具有实际意义。目前，研究人员已经从南极磷虾体内提取了磷虾油、蛋白水解酶、磷虾肽等物质，其中南极磷虾蛋白肽的开发空间巨大，但是其利用尚不够广泛，因而需要进一步开发研究。
[0005]因此，开发一种基于南极磷虾制备降血糖肽的方法极具现实意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服目前针对南极磷虾开发不充分的缺陷，提供一种基于南极磷虾制备降血糖肽的方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，包括如下步骤：
[0009](1)将脱脂南极磷虾粉溶于pH6.5～7.5的磷酸缓冲液制得脱脂南极磷虾粉溶液；
[0010](2)将脱脂南极磷虾粉溶液超声波处理(辅助酶解)，而后加入复合蛋白酶，摇匀即得酶解体系，所述复合蛋白酶包括内切酶、外切酶和风味酶；
[0011](3)所述酶解体系在pH保持在6.5～7.5的条件下酶解得到酶解产物；
[0012](4)将所述酶解产物灭酶后冷却、离心，取上清液即为酶解液，所述酶解液中相对
分子质量小于3000u的多肽占比≥90％；
[0013](5)对所述酶解液依次进行超滤、浓缩、干燥即得脱脂南极磷虾粉降血糖肽。
[0014]本专利技术的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，采用特定的复合蛋白酶实现了对脱脂南极磷虾粉蛋白的针对性酶切，能够将脱脂南极磷虾粉蛋白酶解为分子量3000u以下且含有DPP-IV抑制肽的多肽，这不仅能够大大提高最终产品(脱脂南极磷虾粉降血糖肽)的降血糖效果，而且大大提高了产品收率(超滤处理正是滤除酶解产物中分子量较大的产物)，其在实现靶向酶切的同时还大大提高了酶解效率，为南极磷虾
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降血糖肽提供了整套可靠的制备工艺。此外，本专利技术还采用超声波等技术手段辅助酶解，能够大大缩短工艺所需时长，提高生产效率便于工业化生产。同时，本专利技术的工艺条件简单，设备要求低，极具应用前景。
[0015]作为优选的技术方案：
[0016]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(1)中，所述脱脂南极磷虾粉蛋白和磷酸缓冲液的料液比为1g:4～8mL。本专利技术的保护范围并不仅限于此，此处仅给出一种可行的技术方案而已，料液比本领域技术人员可根据实际情况在一定范围内调整但调整幅度不宜过大，料液比过大，脱脂南极磷虾粉不能完全被酶酶解，造成原料浪费；料液比过小，过量的溶剂添加使酶浓度降低，影响酶与底物的充分结合，降低酶解效率。
[0017]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(2)中，所述复合蛋白酶的添加量是脱脂南极磷虾粉质量的6～8％。复合蛋白酶的添加量本领域技术人员可根据实际情况在一定范围内进行调整但调整幅度不宜过大，复合蛋白酶的添加量过多，造成复合蛋白酶的浪费，大大增大了成本，复合蛋白酶的添加量过少，脱脂南极磷虾粉蛋白难以充分酶解。
[0018]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(2)中，所述超声波处理的功率为240～600W，时长为5～20min。
[0019]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(3)中，所述酶解体系是在恒温磁力搅拌的条件下发生酶解反应的；
[0020]所述酶解反应的温度为45～60℃，时长为5～7h。酶解反应的具体条件本领域技术人员可根据实际情况在一定范围内进行调整但调整幅度不宜过大，酶解反应温度过高，酶逐渐失去活性，酶解速度变慢，酶解液中释放的多肽量减少，DPP-IV抑制率逐渐减小。酶解反应温度过低，酶活性较小，酶解速度较慢，降低酶解效率。酶解反应时间过长，酶液中的多肽会被进一步水解，抑制肽的数量也随之减少。酶解反应时间过短，底物难于被酶充分酶解，影响酶解液中多肽的含量。
[0021]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(4)中，所述灭酶为高温灭酶，其温度为90～100℃，时长为5～15min；
[0022]所述离心是在4℃下进行的，离心的转速为5000～10000rpm，时长为10～25min。
[0023]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(5)中，所述超滤是使用超滤膜进行操作的，超滤膜的截留分子质量为3kD。超滤膜是根据产品的实际需要进行选择的。
[0024]如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，步骤(5)中，所述干燥为真空冷冻干燥。
[0025]本专利技术还提供采用如上所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法制得的脱脂南极磷虾粉降血糖肽。
[0026]有益效果：
[0027](1)本专利技术的利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，采用特定的复合蛋白酶实现了对脱脂南极磷虾粉蛋白的针对性酶切，能够将脱脂南极磷虾粉蛋白酶解为分子量3000u以下多肽，这不仅能够大大提高最终产品(脱脂南极磷虾粉降血糖肽)的降血糖效果，而且大大提高了产品收率(超滤处理正是滤除酶解产物中分子量较大的产物)；
[0028](2)本专利技术的利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，在实现靶向酶切的同时还大大提高了酶解效率，为南极磷虾
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降血糖肽提供了整套可靠的制备工艺；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将脱脂南极磷虾粉溶于pH6.5～7.5的磷酸缓冲液制得脱脂南极磷虾粉溶液；(2)将脱脂南极磷虾粉溶液超声波处理，而后加入复合蛋白酶，摇匀即得酶解体系，所述复合蛋白酶包括内切酶、外切酶和风味酶；(3)所述酶解体系在pH保持在6.5～7.5的条件下酶解得到酶解产物；(4)将所述酶解产物灭酶后冷却、离心，取上清液即为酶解液，所述酶解液中相对分子质量小于3000u的多肽占比≥90％；(5)对所述酶解液依次进行超滤、浓缩、干燥即得脱脂南极磷虾粉降血糖肽。2.根据权利要求1所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述脱脂南极磷虾粉蛋白和磷酸缓冲液的料液比为1g:4～8mL。3.根据权利要求1所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述复合蛋白酶的添加量是脱脂南极磷虾粉质量的6～8％。4.根据权利要求1所述的一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋益善，郎蒙，李燕，向熙，惠婷婷，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：