一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法：采用氘代水(D2O)作内标，吡嗪作内标完成。选取左旋肉碱δ3.22(9H，s)及吡嗪δ8.57(4H，s)两处峰作定量分析。测试参数：温度298.15 K，zg30脉冲，谱宽(SW)设为13，脉冲激发中心频率(O1P)为5.5，弛豫时间D1为30S，采样次数NS为32，空采次数DS为0，其他参数默认。该方法具有良好的精密度和准确度，较低的检测限及定量限，左旋肉碱有效成份含量与定量峰面积之间具有良好的线性关系。通过该方法测得四种左旋肉碱类保健品种有效成份含量均达到了官方标称值。该方法准确，方便，高效，测试成本较低，可作为定量分析左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成分的方法


[0001]本专利技术属于保健品质量检测领域，具体涉及一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。

技术介绍

[0002]左旋肉碱(L-carnitine)，又称L-肉碱或音译卡尼丁，化学名称β-羟基-γ-三甲铵丁酸，化学式为C7H
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NO3，是一种帮助人体脂肪代谢的类氨基酸类物质。足量的左旋肉碱配合有氧运动可以显著提高脂肪代谢的效率，解决脂肪代谢困难带来的一系列健康问题，如脂肪肝，高血脂，高血压等，因此，很多保健食品中都会添加左旋肉碱。此外由于左旋肉碱具有比较高的安全性，目前国家已经允许在婴幼儿奶粉中添加左旋肉碱，用于防止婴幼儿体重超重。因为左旋肉碱自身荣易吸潮，所以一般将左旋肉碱制成其有机酸盐，目前市面上左旋肉碱类制剂主要有两类，分别为左旋肉碱富马酸盐及左旋肉碱酒石酸盐，其中左旋肉碱富马酸盐主要存在于一些进口左旋肉碱类保健品中(美国的GNC，普丽普莱等)，左旋肉碱酒石酸盐主要存在于国产左旋肉碱保健品(修正药业，汤臣倍健等企业生产的左旋肉碱茶多酚片)中。
[0003][0004]左旋肉碱类保健品中有效含量是衡量其质量的重要指标，准确测定保健食品中左旋肉碱含量具有重要意义。目前测定左旋肉碱主要通过高效液相色谱法，紫外分光光度法，离子色谱法，高效液相色谱-质联用法，酶反应试剂盒法等。国家标准中对左旋肉碱的测定方法为分光光度法，该方法存在样品回收困难，操作繁琐、耗费时间长、检测灵敏度不高等问题。而定量核磁共振(QNMR)通过峰面积和待测原子核数量之间严格的对应关系实现定量，具有无需高纯对照品，不破坏样品，操作较为简单，人为操作误差小，测试结果准确可靠等优势，因此，美国药典，英国药典及欧洲药典均将定量核磁法收录其中作为有效测定方法。2010年中国药典就将核磁共振定量法作为定量及定性测试方法收录其中，2020新版中国药典继续将定量核磁共振波谱法作为有效测定方法收录其中。本文以左旋肉碱富马酸盐
为例，采用吡嗪为内标，重水为溶剂，通过定量1H NMR测定市售进口左旋肉碱富马酸盐保健品中有效成分含量，该方法准确可靠，简便易行，可用于测定左旋肉碱保健品中有效成份含量。

技术实现思路

[0005]解决的技术问题：针对上述现有的分析测试方法存在样品回收困难，操作繁琐、耗费时间长、需要待测组分高纯对照品等技术问题，为了解决这个问题，本专利技术开发了一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。
[0006]技术方案：
[0007]一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成分的方法，步骤为：
[0008]第一步，氘代试剂的选择：称取20mg左旋肉碱类化合物，选择D2O作为氘代溶剂，选用topspin2.1软件自带Proton标准参数分别测定1H NMR谱，活泼氢均被氘代；
[0009]第二步，定量峰及内标物的选择：采用Topspin 2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱的1H NMR谱，用D2O残余溶剂峰标定化学位移，选择吡嗪为内标，其定量峰为δ8.57(4H，s)；
[0010]第三步，测试参数优化：选择zg30脉冲采样，设定采样时间(aq)为4.15s，弛豫时间D1为30S，采样次数NS为32，空采次数DS为0，谱宽SW为13.00，中心频率o1p为6.1，其他参数默认；
[0011]第四步，样品测试及数据处理：采用第三步优化后的测试参数测定样品的1H NMR谱；以吡嗪δ8.57(4H，s)处单峰为基准，准确积分δ3.19(9H，s)处峰面积，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取其平均值作为实际积分面积。
[0012]第五步：方法学验证包括线性关系验证、精密度实验、重复性实验及稳定性实验。
[0013]进一步的，所述按照样品及内标物及氘代试剂取用量，依据下式计算所取样品中左旋肉碱富马酸盐质量：
[0014][0015]上式中，m
左旋肉碱
，m
吡嗪
分别表示左旋肉碱盐和吡嗪的质量，M
左旋肉碱
表示左旋肉碱分子量，S
左旋肉碱
、S
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪定量峰峰面积。
[0016]进一步的，采购两款进口左旋肉碱富马酸盐类保健品，各取一片药片，称取质量，以研钵研成粉末，准确称取20-30mg样品，以1000μL标准溶液溶解，超声10min使有效成份充分溶解，静置3h使上层澄清，准确移取600μL上层清液转加入核磁管中，采用优化好的测试参数测定其1H NMR谱，根据峰面积通过权利要求2中公式计算溶液中左旋肉碱有效成份含量。
[0017]进一步的，所述第五步中线性关系验证测试：样品制备：准确称取280.2mg吡嗪样品，以重水溶解后转移至10mL容量瓶中，以重水定容至刻度线，摇匀备用，作为标准溶液；称取35.9mg左旋肉碱富马酸盐，装入一次性PE管中，加入1.5mL标准溶液，超声20min使样品完全溶解，得到均一、澄清、透明溶液，依次取100μL，150μL，200μL，250μL，300μL，450μL加入
1.5mL一次性PE管中，以标准溶液稀释至600μL，超声10min使其完全溶解，转移至1-6号核磁管中，得到1-6号待测溶液，按照第四步方法测试并处理数据；以左旋肉碱定量峰峰面积与吡嗪定量峰面积比值为纵坐标，样品中左旋肉碱富马酸盐实际质量为横坐标作图，得工作曲线，对工作曲线进行线性拟合得回归方程，表明样品质量与峰面积之间具有良好的线性关系。
[0018]进一步的，所述重复性测试：样品制备：称取左旋肉碱盐40-50mg，吡嗪270-400mg，以重水溶解后转移至10mL容量瓶中，用重水定容至刻度线，摇匀，取6份0.6mL样品加入1`-6`号核磁管中，得到1`-6`号待测液；按照第四步方法测试并处理数据；根据左旋肉碱富马酸盐定量峰面积与吡嗪定量峰面积比值计算RSD小于1％，表明该方法具有良好的可重复性。
[0019]进一步的，所述精密度测试：取线性测试的1号样品，按照第四步方法测试并处理数据，平行测试5次，通过左旋肉碱富马酸盐定量峰与内标定量峰面积比值计算标准偏差，计算所得RSD小于0.5％，说明样品及内标物在室温溶液状态下具有良好的精密度。
[0020]有益效果：
[0021]1、本专利技术专利建立了一种高效，准确，方便的通过核磁共振氢谱定量分析左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。
[0022]2、本专利技术建立的方法具有较好的普适性，可以用于左旋肉碱类保健品中左旋肉碱酒石酸盐，左旋肉碱富马酸盐，左旋肉碱原型化合物等有效成份的定量分析。
[0023]3、本专利技术建立方法具有和高效液相色谱(HPLC)法相近的测试准确度，与HPLC法相比，无需待测组分的高纯对照品，无需酸化，萃取，过滤等繁复的样品前处理过程，大大节约测试成本。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法，其特征在于，步骤为：第一步，氘代试剂的选择：称取20mg左旋肉碱类化合物，选择D2O作为氘代溶剂，选用topspin2.1软件自带Proton标准参数分别测定1H NMR谱，活泼氢均被氘代；第二步，定量峰及内标物的选择：采用Topspin 2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱的1H NMR谱，用D2O残余溶剂峰标定化学位移，左旋肉碱定量峰为δ3.22(9H，s)，选择吡嗪为内标，其定量峰为δ8.57(4H，s)；第三步，测试参数优化：选择zg30脉冲采样，设定采样时间(aq)为4.15s，弛豫时间D1为30S，采样次数NS为32，空采次数DS为0，谱宽SW为13.00，中心频率o1p为6.1，其他参数默认；第四步，样品测试及数据处理：采用第三步优化后的测试参数测定样品的1H NMR谱；以吡嗪δ8.57(4H，s)处单峰为基准，准确积分δ3.19(9H，s)处峰面积，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取其平均值作为实际积分面积。第五步：方法学验证包括线性关系验证、精密度实验、重复性实验及稳定性实验。2.根据权利要求1所述的一种核磁共振氢谱通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱保健品中有效成份的方法，其特征在于：所述按照样品及内标物及氘代试剂取用量，依据下式计算所取样品中左旋肉碱富马酸盐质量：上式中，m
左旋肉碱
，m
吡嗪
分别表示左旋肉碱盐和吡嗪的质量，M
左旋肉碱
表示左旋肉碱分子量，S
左旋肉碱
、S
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪定量峰峰面积。3.根据权利要求1所述的一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法，其特征在于：所述采购两款进口左旋肉碱富马酸盐类保健品，各取一片药片，称取质量，以研钵研成粉末，准确称取20-30mg样品，以1000μL标准溶液溶解，超声10min使有效...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡正松，卢明祝，阙玉和，
申请(专利权)人：淮阴师范学院，
类型：发明
国别省市：