HCV重组抗原及应用制造技术

本发明专利技术涉及HCV重组抗原及应用。本发明专利技术提供一种HCV重组抗原，其包含至少2个NS3抗原，至少1个NS4抗原，和至少1个核心抗原。本发明专利技术还提供一种编码所述HCV重组抗原的核酸，包含所述核酸的表达载体，包含所述表达载体的宿主细胞，包含所的HCV重组抗原的缀合物，和包含所述HCV重组抗原的试剂盒等。HCV重组抗原的试剂盒等。

【技术实现步骤摘要】
HCV重组抗原及应用


[0001]本专利技术涉及HCV检测领域。具体而言，本专利技术涉及HCV重组抗原，其可以用于检测来自受试者的样品中的HCV抗体的存在等。本专利技术还涉及编码所述的HCV重组抗原及其突变体的核酸以及相关的载体、宿主细胞、免疫测定法和检测试剂盒等。

技术介绍

[0002]丙型病毒性肝炎，简称丙型肝炎或丙肝，是由丙型肝炎病毒(hepatits C virus，HCV)感染而引发的疾病，主要由血液或体液传播。据世界卫生组织估计，全球约有1.8亿人感染丙肝，全球HCV的感染率约为3％。在我国健康人群抗HCV阳性率为0.7％-3.1％，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，导致约80％的HCV感染者发展为慢性肝炎，其中10％-20％将发展成肝硬化，肝硬化患者中每年有1％-5％发展成为肝细胞癌症，因此，慢性HCV感染的流行成为世界各国一项重要的社会经济负担。
[0003]HCV为单股正链RNA病毒，基因组全长约9.5kb可分为3个区域，即5
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非编码区(5
’
UTR)、编码区(ORF)、3
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非编码区(3
’
UTR)，其排列顺序为5
′
UTR-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3
′
UTR。5
’
UTR为高度保守区，是病毒翻译的起始位点，在HCV复制过程中有非常重要的作用。开放读码框架(ORF)包括结构蛋白区C、E1、E2和非结构蛋白区P7、NS2-NS5。包膜区(E1、E2)和核心区(C)编码病毒颗粒，非结构蛋白区在病毒复制和病毒蛋白合成中起重要作用。其中核衣壳蛋白(Core)和非结构蛋白部分的NS2、NS3、NS4A、NS5A和NS5B等是目前主要的免疫诊断研究的重要靶点。
[0004]HCV核心蛋白(core蛋白)位于HCV基因组的第342-914核苷酸位点，编码191个氨基酸，氨基酸序列十分保守。HCV core蛋白是一种具有多种生物学功能的病毒蛋白，除了具有组装病毒颗粒的功能外，还在HCV增殖及致病机制中起重要作用，是HCV感染的重要标志。HCV core蛋白在HCV感染后体内抗体阳转前即可产生，是患者体内HCV复制和HCV病毒载量的重要指标。由于高度保守且有很强的免疫原性，使得其在HCV诊断和疫苗的研究中应用广泛。NS3基因位于HCV全基因组序列第3300-5200核苷酸位点，编码含有630个氨基酸。NS3蛋白具有蛋白酶功能，其N端的189个氨基酸具有丝氨酸蛋白酶活性，C端的442个氨基酸具有核苷三磷酸酶(NTPase)和RNA解旋酶的活性。抗NS3抗体最早出现，NS3蛋白具有很强的抗原性，几乎所有的HCV感染者都会产生高滴度特异性的抗NS3抗体。NS4基因位于HCV全基因组的第4974-5133位核苷酸，编码两个蛋白NS4A和NS4B。NS4A为54个氨基酸的短肽，NS4B是一个27kDa大小的定位于ER膜的跨膜蛋白，具有很强的疏水性，NS4区含有至少两个免疫优势序列位点，抗原性强，绝大多数HCV感染者能产生针对该区的抗体。NS5基因编码区为全长3117个核苷酸，编码两个蛋白NS5A和NA5B，是HCV基因组中最长的编码区。
[0005]随着基因工程技术的发展，对HCV病毒基因的分子生物学研究日趋成熟，并且应用于诊断试剂。HCV诊断试剂在不同检测平台上的主要使用core，NS3，NS4等基因片段，在诊断试剂中HCV诊断原料多以单独HCV-core、单独NS3、core+NS3嵌合、NS3+core嵌合、NS3+NS4嵌
1949位(例如终止位点在HCV氨基酸序列第1735、1740、1741、1749、1799、1931、1935、1949或其间的任意位点)的多肽，例如所述NS4抗原包含HCV氨基酸序列第1698-1735、1658-1949、1691-1749、1695-1741、1693-1740、1698-1931、1691-1799或1929-1935位；例如所述NS4抗原包含选自SEQ ID NO：15-22的序列；例如所述NS4抗原包含选自与SEQ ID NO：15-22具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同源性的序列；和/或
[0015]3)所述核心抗原包含选自HCV氨基酸序列第1-179位的多肽，例如所述多肽的长度可以为27-179个氨基酸，例如30、40、50、60、70、80、90、100、150个氨基酸，例如所述核心抗原包含起始位点在HCV氨基酸序列第1-8位(例如起始位点在HCV氨基酸序列第1、8或其间的任意位点)至终止位点在HCV氨基酸序列第34-179位(例如终止位点在HCV氨基酸序列第34、48、53、60、80、130、179或其间的任意位点)的多肽，例如所述核心抗原包含HCV氨基酸序列第1-34、8-34、1-179、1-130、1-80、1-53、1-48、或8-60位；例如所述核心抗原包含选自SEQ ID NO：24-34的序列；例如所述核心抗原包含选自与SEQ ID NO：24-34具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同源性的序列。
[0016]3.项目1-2任一项所述的HCV重组抗原，其中NS3抗原中的至少任意一位半胱氨酸突变为其他氨基酸，例如突变为G、A或S；例如NS3抗原在对应HCV氨基酸1305/1315/1318/1394/1400/1454中至少一个(例如至少1、2、3、4、5、或6个)任意一位半胱氨酸突变为其它氨基酸，例如突变为G、A或S。
[0017]4.项目1-3中任一项所述的HCV重组抗原，其中所述NS3抗原，NS4抗原，和核心抗原之间直接连接或任选地通过一个或多个接头连接，例如所述接头可以是(G)n，(GS)n、(SG)n、(GGGS)n或(GGGGS)n，其中n可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大的整数。
[0018]5.项目1-4中任一项所述的HCV重组抗原，其中所述HCV重组抗原包含N和/或C端修饰，例如组氨酸标签、生物素化和/或可检测标记修饰。
[0019]6.项目1-5中任一项所述的HCV重组抗原，其中所述丙型肝炎病毒包括HCV基因型1a，1b，2a，2b，2c，2d，3a，3b，3c，3d，3e，3f，4a，4b，4c，4d，4e，4f，4g，4h，4i，4j，5a或6a。
[0020]7.项目1-6中任一项所述的HCV重组抗原，其中包含的抗原按N端到C端以NS3抗原，NS4抗原，核心抗原的顺序融合。例如，在所述HCV重组抗原包含2个NS3抗原，2个NS4抗原，和1个核心抗原的情况下，其中包含的抗原可以以第一NS3抗原，第二NS3抗原，第一NS4抗原，第二NS4抗原，核心抗原的顺序融合，在所述HCV重组抗原包含其它抗原组合的情况下以此类推。
[0021]8.一种编码项目1-7中任一项所述的HCV重组抗原的核酸。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HCV重组抗原，其包含至少2个NS3抗原，至少1个NS4抗原，和至少1个核心抗原；例如所述HCV重组抗原可以包含至少2个NS3抗原，至少2个NS4抗原，和至少1个核心抗原；例如所述HCV重组抗原可以包含至少2个NS3抗原，至少3个NS4抗原，和至少1个核心抗原；例如所述HCV重组抗原中的NS3抗原个数可以是2个、3个或更多个，例如其中所述2个、3个或更多个NS3抗原可以相同或不同，优选不同；例如所述HCV重组抗原中的NS4抗原个数可以是1个、2个、3个或更多个，例如优选其中2个、3个或更多个NS4抗原不同。2.权利要求1所述的HCV重组抗原，其中1)所述NS3抗原包含选自HCV氨基酸序列第1075-1657位的多肽，例如所述多肽的长度可以为41-583个氨基酸，例如50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550个氨基酸，例如所述NS3抗原包含起始位点在HCV氨基酸序列第1075-1380位(例如起始位点在HCV氨基酸序列第1075、1192、1201、1230、1377、1380、或其间的任意位点)至终止位点在HCV氨基酸序列第1420-1657位(例如终止位点在HCV氨基酸序列第1420、1443、1451、1465、1478、1657、或其间的任意位点)的多肽，例如所述NS3抗原包含HCV氨基酸序列第1380-1420、1075-1657、1230-1465、1377-1443、1192-1451、1192-1478、1377-1443、1201-1465，1192-1608或1192-1517位；例如所述NS3抗原包含选自SEQ ID NO：1-14的序列；例如所述NS3抗原包含选自与SEQ ID NO：1-14具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同源性的序列；2)所述NS4抗原包含选自HCV氨基酸序列第1658-1949位的多肽，例如所述多肽的长度可以为38-292个氨基酸，例如40、50、60、70、80、90、100、150、200、250个氨基酸，例如所述NS4抗原包含起始位点在HCV氨基酸序列第1658-1698位(例如起始位点在HCV氨基酸序列第1658、1691、1693、1695、1698、或其间的任意位点)至终止位点在HCV氨基酸序列第1735-1949位(例如终止位点在HCV氨基酸序列第1735、1740、1741、1749、1799、1931、1935、1949或其间的任意位点)的多肽，例如所述NS4抗原包含HCV氨基酸序列第1698-1735、1658-1949、1691-1749、1695-1741、1693-1740、1698-1931、1691-1799或1929-1935位；例如所述NS4抗原包含选自SEQ ID NO：15-22的序列；例如所述NS4抗原包含选自与SEQ ID NO：15-22具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同源性的序列；和/或3)所述核心抗原包含选自HCV氨基酸序列第1-179位的多肽，例如所述多肽的长度可以为27-179个氨基酸，例如30、40、50、60、70、80、90、100、150个...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，魏钟杰，岑静，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：