【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒检测领域。具体而言，涉及一种多表位hcv core抗体组合及检测试剂盒。
技术介绍
1、根据who统计，全世界多达1.7亿人被丙型肝炎病毒(hepatitis c virus, hcv)感染，即肝脏的一种病毒性感染。75％-85％的感染者会发展成慢性感染，这些病例中大约20％会发展慢性丙型肝炎的并发症，包括肝硬化或肝癌。当前推荐hcv感染的治疗是干扰素和利巴韦林药物的结合，但是，该治疗并不是所有情况下都是有效的，并且在丙型肝炎相关的末期肝病中指示肝移植。因此，及早检出hcv对于hcv感染者来说非常重要。
2、hcv是一种小包膜rna病毒，属黄病毒科，基因组含一条约9.6kb长的单股、正链rna分子。病毒有一脂质包膜，结合着宿主来源的脂质或免疫球蛋白。包膜内部是密度较高的核心颗粒，由核心蛋白(core)和病毒核酸相结合构成。hcv基因组只有一个开放阅读框，位于基因组中央，编码一条约3000个aa的病毒前体多肽；后经宿主细胞信号肽酶和病毒自身蛋白酶的剪切形成至少10个结构和功能蛋白。其中蛋白core/e1，e1/e2，e2/p7 和p7/ns2的位点由宿主细胞信号肽酶剪切并形成病毒的结构蛋白和p7蛋白。ns2-3蛋白酶剪切ns2/ns3位点，其余下游蛋白的加工有ns3-4a丝氨酸蛋白酶完成，释放出成熟的ns3、ns4a、ns4b、ns5a和ns5b蛋白。
3、hcv感染的实验室诊断是丙型肝炎诊断的重要依据，主要包括特异性抗体(hcv抗体)的检查、hcv基因和hcv核心抗原的检测以及肝细胞损害
4、采用双抗体夹心法检测hcv抗原可以有效提高检出窗口期，并且可用于免疫功能障碍人群hcv感染的辅助诊断，鉴别hcv既往感染与现症感染，丙肝治疗的辅助监测等方面，其中，核心抗原(core)富含精氨酸、赖氨酸、脯氨酸，亲水性强，抗原性强，特异性高，亲和力强，是hcv诊断的重点区段。hcv核心抗原测定是近年来国际上出现的一种新的测定方法，国外的研资料表明它与hcv rna检测存在着很好的相关性，可用于 hcv早期诊断。但是，由于血清中的游离core水平较低，因此需要一种高灵敏的多表位抗体组合，来满足更高的活性检测要求。
技术实现思路
1、专利技术人经过大量研究和探索，对各种结合hcv抗原片段的抗体进行分析，通过实验筛选和验证，获得能够用于hcv核心抗原(core)检测的抗体组合，并且组合中的抗体识别不同的hcv core片段，能够充分互补，实现hcv core抗原的高灵敏、高活性检测，降低漏检风险和缩短窗口期。
2、因此，在一些实施方案中，本专利技术提供了一种检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合，具备改善的灵敏度、检出率和检测活性，可用于制备检测丙型肝炎试剂盒，缩短了检测窗口期。在一些实施方案中，一种检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合包括第一抗体、第二抗体、第三抗体和第四抗体，所述第一抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第28-35位氨基酸序列，所述第二抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第100-120位氨基酸序列，所述第三抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第35-53位氨基酸序列，所述第四抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第60-72位氨基酸序列。
3、在一些实施方案中，第一抗体、第二抗体、第三抗体或第四抗体可以是单克隆抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体或者抗体的抗原结合片段，只要他们展示所需的生物学活性，如特异性结合hcv抗原的氨基酸片段。在一些实施方案中，第一抗体、第二抗体、第三抗体或第四抗体可以是抗体片段，即可以是全长抗体的部分，优选地包括其抗原结合区、可变区或cdr。例如f(ab’)2、fab’、fab、fd、fv、dab、scfv、双价抗体或结构域抗体。在一些实施方案中，当用于本文中时，"特异性结合"可以指抗体选择性地或优先地结合所述氨基酸序列，或者所述氨基酸序列上的主要表位。
4、在一些实施方案中，可以使用任何适当的体外测定、基于细胞的测定、体内测定、动物模型等检测本专利技术抗体的效果如结合能力、活性、特异性、或灵敏度等。在一些实施方案中，所述测定可以包括例如elisa，facs结合测定，biacore，竞争性结合测定等。在一些实施方案中，例如在elisa或facs 中本专利技术的抗体(或其抗原结合片段)与抗原结合的ec50值。在一些实施方案中，可以使用标准测定法如表面等离子共振技术(例如)确定结合亲和力。在一些实施方案中，也可以使用酶联免疫吸附法检测抗体结合所述氨基酸序列的能力。例如在一些实施方案中，采用hrp标记羊抗鼠 igg，所述氨基酸序列包被酶标反应板，测定样品(如血清)中抗体的反应值，来表示结合能力。例如在一些实施方案中，以反应值与对照值(阴性) 比值≥2.0为阳性，阳性表示特异性结合。
5、在一些实施方案中，第一抗体、第二抗体、第三抗体、第四抗体之间表位互补，获得改善的检出率。在一些实施方案中，对第一抗体、第二抗体、第三抗体、第四抗体进行包被或者标记。在一些实施方案中，将上述四种抗体分为捕获抗体和标记抗体。例如捕获抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的任意一种、任意两种或任意三种，标记抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的除捕获抗体的其他所有抗体。在一些实施方案中，第一抗体为捕获抗体，第二抗体、第三抗体、第四抗体为标记抗体。又或者，在一些实施方案中，第二抗体为捕获抗体，第一抗体、第三抗体、第四抗体为标记抗体；以此类推。在一些实施方案中，所述捕获抗体为第一抗体和第二抗体；所述标记抗体为第三抗体和第四抗体。又或者，在一些实施方案中，所述捕获抗体为第一抗体和第三抗体；所述标记抗体为第二抗体和第四抗体；以此类推。在一些实施方案中，第一抗体、第二抗体、第三抗体为捕获抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合，包括第一抗体、第二抗体、第三抗体和第四抗体，所述第一抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第28-35位氨基酸序列，所述第二抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第100-120位氨基酸序列，所述第三抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第35-53位氨基酸序列，所述第四抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第60-72位氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体组合，包括捕获抗体和标记抗体；例如捕获抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的任意一种、任意两种或任意三种，标记抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的除捕获抗体的其他所有抗体；例如所述捕获抗体为第一抗体和第二抗体；所述标记抗体为第三抗体和第四抗体。
3.根据权利要求2所述的抗体组合，其中捕获抗体结合至固相，可选地，固相例如是膜载体、微粒或微孔板；例如是磁微粒，乳胶、微球、微量滴定板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、尼龙膜或微流控芯片。
4.根据权利要求2所述的抗体组合，其中所述标记抗体用可检测标记物标记，可选地，可检测标记物例如金属粒子、荧光标记，发色团标记，电子致密标记
5.根据权利要求2所述的抗体组合，其中所述捕获抗体或所述标记抗体独立地连接至结合配偶体之一；结合配偶体选自生物素/抗生物素蛋白、生物素/亲和素、受体/配体，地高辛/地高辛配基，碳水化合物/凝集素。
6.一种检测丙型肝炎试剂盒，包括权利要求1-5任一项所述的检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，还包括检测丙型肝炎病毒抗体的试剂。
8.根据权利要求7所述的抗试剂盒，所述丙型肝炎病毒抗体为core抗体、E1抗体、E2抗体、NS2抗体、NS3抗体、NS4抗体或NS5抗体中的至少一种。
9.如权利要求1-5任一项所述的抗体组合在制备检测丙型肝炎试剂盒中的用途。
10.制备权利要求1所述的检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合的方法，包括：选自下述片段1-片段4作为免疫原中的抗原性部分，利用免疫原免疫动物，获得分别特异性结合片段1-片段4的抗体：
...【技术特征摘要】
1.一种检测丙型肝炎病毒核心抗原的抗体组合，包括第一抗体、第二抗体、第三抗体和第四抗体，所述第一抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第28-35位氨基酸序列，所述第二抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第100-120位氨基酸序列，所述第三抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第35-53位氨基酸序列，所述第四抗体特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第60-72位氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体组合，包括捕获抗体和标记抗体；例如捕获抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的任意一种、任意两种或任意三种，标记抗体选自所述第一抗体至第四抗体中的除捕获抗体的其他所有抗体；例如所述捕获抗体为第一抗体和第二抗体；所述标记抗体为第三抗体和第四抗体。
3.根据权利要求2所述的抗体组合，其中捕获抗体结合至固相，可选地，固相例如是膜载体、微粒或微孔板；例如是磁微粒，乳胶、微球、微量滴定板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、尼龙膜或微流控芯片。
4.根据权利要求2所述的抗体组合，其中所述标记抗体用可检测标记物标记，可选地，可检测标记物例如金属粒子、荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，或酶标记，例如胶体金，胶体银，胶体硒，胶体碳，胶体碲、荧光...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘少丽，
申请(专利权)人：菲鹏生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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