一种阳离子脂质体禽流感疫苗及其制备方法技术

本申请公开一种阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法。该方法基于荷载十八胺阳离子脂质体制备出的疫苗，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力,能引发CD4+与CD8+T细胞反应，诱导产生强炎症反应，提高记忆T细胞的感应并增加其维持能力，疫苗的粒径约450nm，疫苗的包封率均在50％以上，在某些抗原浓度抗原下，包封率均超过70％,随着抗原浓度的提高,包封率逐步提高。步提高。步提高。

【技术实现步骤摘要】
一种阳离子脂质体禽流感疫苗及其制备方法


[0001]本申请涉及生物
，具体的涉及一种荷载十八胺的阳离子脂质体禽流感疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]佐剂是指能增强机体抗原免疫应答或改变免疫应答类型的物质，其主要作用是为了增强机体免疫系统的反应强度和持久性。现有疫苗佐剂多为油佐剂或铝胶佐剂，存在局部刺激大、不良反应多、疫苗稳定性差、效力不高等问题。国内白油佐剂工艺不高，质量不稳定，目前我国疫苗企业使用的佐剂主要依赖进口，造成疫苗制剂的生产成本大幅度提高和产品价格上涨。因此，研制新型疫苗佐剂是提高疫苗安全、效力的重要途径，也是打破国外行业垄断的必由之路。此外，现有疫苗佐剂产生免疫保护率低、免疫期短，同时油乳剂不易被机体吸收并有刺激性，容易导致注射部位红肿或溃烂等副作用，影响动物产品的品质。随着人们对食品安全的高度关注，开发高效、安全、绿色的新型纳米佐剂具有广阔的应用前景。
[0003]禽流感(Avian influenza,AI)是由禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的一种以禽类为主要感染群体的呼吸道疾病,该病危害养禽及相关产业持续发展的同时,也威胁着人类的健康。H9N2亚型禽流感病毒从20世纪90年代开始在世界范围内流行,一般情况下不能引起禽严重的临床症状,但易引起其他病原继发感染,增加禽死亡率。近年来,对我国部分活禽市场及发生呼吸道感染的蛋鸡、肉鸡开展H9N2亚型禽流感病原检测,发现H9N2亚型的阳性率高达60％以上,说明H9N2亚型禽流感在我国广泛存在。目前，H9N2亚型禽流感灭活疫苗主要是由灭活的H9N2亚型禽流感病毒液后的半成品与油佐剂以适当比例混合配置而成，但油佐剂不良反应严重，皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿，并且油类物质长期潴留于组织中不易代谢，造成禽类肉制品的食品安全问题。因此，开发高效低毒的新型禽流感纳米疫苗佐剂就显得十分迫切和必要。

技术实现思路

[0004]为克服上述缺陷，本申请的目的在于：提出一种基于荷载十八胺的阳离子脂质体佐剂的禽流感疫苗及其制备方法。该佐剂通过荷载十八胺制备的阳离子纳米脂质体，该脂质体兼具佐剂和递送系统的功能，作为递送系统可荷载禽流感疫苗抗原，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力。
[0005]为了达到以上目的，本申请如下技术方案：
[0006]一种阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法，其特征在于，
[0007]所述制备方法包含如下步骤：
[0008]S1、将大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺按照一定的比例溶解于有机溶剂中,以制备荷载十八胺的阳离子脂质体，
[0009]S2、将H9N2型流感病毒裂解疫苗原液加入到制备的荷载十八胺的阳离子脂质体中
并进行充分混合，以制成脂质体禽流感疫苗。
[0010]在一较佳的实施方式中，该步骤S1中，还包括在真空度介于0.05～0.15MPa及转速150r/min条件下，真空旋转蒸发混合液第一预预设时间。
[0011]在一较佳的实施方式中，该步骤S1中大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺的微摩尔比例为54：23：4：2.5。
[0012]在一较佳的实施方式中，该步骤S2中包括：在30-40℃的环境温度下充分搅拌混合,使得充分搅拌后无有机溶剂残留。
[0013]在一较佳的实施方式中，该步骤S2之后还包括，充分混合后制备的脂质体禽流感疫苗通过碳酸纤维膜筛选粒径。
[0014]在一较佳的实施方式中，依次通过孔径1000nm、800nm及500nm的滤膜筛选。依次通过孔径1000nm、800nm及500nm的滤膜的好处在于可将粒径过大的脂质体依次挤压成粒径在500nm左右或以下粒径的脂质体，达到控制脂质体粒径和使粒径更加均匀的目的。
[0015]本申请实施例提供一种利用上述制备方法制备的阳离子脂质体禽流感疫苗备，其特征在于，所述脂质体的包封率50％以上。
[0016]本申请实施例提供一种利用上述制备方法制备阳离子脂质体禽流感疫苗备，其特征在于，所述脂质体的粒径介于400-500nm。较佳的，该脂质体的粒径介于422-463nm。
[0017]有益效果
[0018]本申请提出的荷载十八胺的阳离子脂质体禽流感疫苗佐剂制备方法，该方法通过荷载十八胺制备的阳离子纳米脂质体，该脂质体兼具佐剂和递送系统的功能，作为递送系统可荷载禽流感疫苗抗原，作为新型纳米佐剂，可明显提高抗原提呈细胞对抗原的提呈能力,能引发CD4+与CD8+T细胞反应，诱导产生强炎症反应，提高记忆T细胞的感应并增加其维持能力，作为一种疫苗佐剂既可以增强免疫应答的强度,又降低了免疫的不良反应。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
[0020]图1为本申请实施例的制备的疫苗在不同实验组脾脏淋巴细胞IL-2分泌水平比较；
[0021]图2为本申请实施例的制备的疫苗在不同实验组脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平比较；
[0022]图3为本申请实施例的制备的疫苗不同实验组脾脏淋巴细胞IL-4分泌水平比较示意图；
[0023]图4为本申请实施例的制备的疫苗免疫后各组SPF鸡体内特异性抗体增长曲线示意图。
具体实施方式
[0024]以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明
本申请而不限于限制本申请的范围。实施例中采用的实施条件可以如具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。当用于权利要求书或说明书时，选择/可选/优选的“数值范围”既包括范围两端的数值端点，也包括相对于前述数值端点而言，所述数值端点中间所覆盖的所有自然数。
[0025]纳米科技是近年来发展极其迅速的前沿技术学科，特别是利用纳米材料与技术改善农业投入品的功能与效率，已经成为纳米科技与农业科学交叉领域的研究热点。大量研究表明，在纳米尺度智能化递释系统(Smart Delivery System)，通过纳米材料的其小尺寸、大比表面与界面效应等特殊属性，可显著增强免疫功能物质的生物活性，实现靶向传递和智能化释放，提高有效利用率，降低农产品残留。根据纳米颗粒的组成、大小、形状及表面特性等，利用纳米技术制备成不同的纳米颗粒已在医学领域广泛应用。纳米颗粒不仅具有免疫佐剂活性，有助于抗原在细胞内加工，与主要组织相容性复合体分子特异性结合、运输并递呈给效应细胞，增强机体产生天然免疫应答，而且还能够通过多种途径到达抗原提呈细胞，调节免疫应答。在预防性和治疗性疫苗中，纳米颗粒被用作运输系统增加抗原提呈或作为免疫佐剂激活和增强机体产生免疫应答。
[0026]脂质体是由磷脂双层膜围绕亲水空腔组成的可生物降解的纳米粒，可分为阳离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包含如下步骤：S1、将大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺按照一定的比例溶解于有机溶剂中,以制备荷载十八胺的阳离子脂质体，S2、将H9N2型流感病毒裂解疫苗原液加入到制备的荷载十八胺的阳离子脂质体中并进行充分混合，以制成脂质体禽流感疫苗。2.如权利要求1所述的阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，还包括在真空度介于0.05～0.15MPa及转速150r/min条件下，真空旋转蒸发混合液第一预预设时间。3.如权利要求1所述的阳离子脂质体禽流感疫苗的制备方法，其特征在于，步骤S1中大豆磷脂、胆固醇、PEG500-DSPE及十八胺的微摩尔比例为54：23：4：2.5。4.如权利要求1所述的阳离子脂质体禽流...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，孙飞跃，王亚萍，
申请(专利权)人：江苏飞阳益科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：